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四川省应用基础研究计划项目(04JY029-002-7)
四川省应用基础研究计划项目(04JY029-002-7)
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
- 相关作者：何芳刘丽刘聪唐红赵连三更多>>
- 相关机构：四川大学华西医院更多>>
- 发文基金：四川省应用基础研究计划项目国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 表达乙肝病毒preS2S蛋白的荷瘤小鼠模型的建立
- 2008年
- 目的:建立能表达乙肝病毒(hepatitis Bvirus,HBV)preS2S抗原蛋白的荷瘤小鼠模型,为研究HBV核酸疫苗的体内CTL应答及免疫治疗作用提供简便易行的研究模型。方法:以免疫印迹法验证SP2/0-S2S细胞中有HBVpreS2S抗原的稳定表达,将SP2/0-S2S细胞种植到BALB/c小鼠胁部皮下(荷瘤),观察能否生长成瘤,以及成瘤的时间、肿瘤大小和荷瘤后小鼠的生存时间;以免疫组织化学法检测小鼠肿瘤组织HBVpreS2S抗原的表达。以不表达preS2S抗原蛋白的SP2/0-CMV细胞荷瘤小鼠作为阴性对照。结果:荷瘤后3天～1周,SP2/0-S2S细胞可在小鼠皮下形成实体肿瘤,成瘤率为100%,肿瘤细胞中有preS2S抗原表达,荷瘤后小鼠的平均生存时间为16±1天;与不表达preS2S抗原蛋白的SP2/0-CMV细胞荷瘤小鼠相比,成瘤率、成瘤时间、肿瘤大小及生存时间差异。结论:建立了能表达HBVpreS2S抗原蛋白的荷瘤小鼠模型,可用于HBV核酸疫苗的体内CTL应答及免疫治疗作用的实验研究。同时也建立了不表达preS2S抗原蛋白的荷瘤小鼠模型,可用作阴性对照。
- 何芳唐红刘丽刘聪赵连三
- 关键词：乙型肝炎病毒BALB/C小鼠
- 乙肝病毒核酸疫苗诱导BALB/c小鼠特异性免疫应答
- 2008年
- 目的观察含乙肝病毒(hepatitis Bvirus,HBV)preS2S基因的核酸疫苗免疫小鼠后的特异性免疫应答。方法将BALB/c小鼠随机分为4组分别肌肉接种pCMV-S2S、乙肝表面抗原(HBsAg)、空载质粒(pCMV)及生理盐水(NS)。免疫组织化学法检测接种局部组织preS2S抗原的表达,乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测特异性CTL活性,ELISA法检测小鼠血清特异性抗体Anti-HBs。结果pCMV-S2S组小鼠肌肉细胞中有较多量的preS2S蛋白表达,其它小鼠肌肉细胞中均未检出preS2S蛋白表达。pCMV-S2S组小鼠CTL活性为(32.10±1.93)%,明显高于各对照组(P<0.05)。pCMV-S2S组小鼠8周后Anti-HBs阳性率最高为42.9%。HBsAg组小鼠4周时Anti-HBs阳性率即达到100%。pCMV组及NS组小鼠血清中均未检测出Anti-HBs。结论乙肝核酸疫苗pCMV-S2S能在小鼠体内表达preS2S蛋白,并能在小鼠体内诱生较强的特异性CTL活性,也能诱生一定程度的特异性体液免疫应答。
- 何芳唐红刘丽刘聪赵连三
- 关键词：核酸疫苗免疫应答
- 乙肝核酸疫苗接种小鼠后特异性抗原表达及CTL应答的动态观察被引量：1
- 2008年
- 目的:观察乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)核酸疫苗pCMV-S2S免疫小鼠后,接种局部HBV preS2S抗原的表达及特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)应答的动态变化。方法:将pCMV-S2S接种到BALB/c小鼠胫前肌,分别以免疫组化法检测接种局部肌肉HBV preS2S抗原表达的动态变化,乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测特异性CTL活性的动态变化。结果:小鼠接种pCMV-S2S后,局部肌肉细胞3d后已有少量目的抗原HBV preS2S蛋白表达,4周时表达最强,至6月时仍可检出有preS2S蛋白表达,但表达强度明显减弱。小鼠接种pCMV-S2S3天后,特异性CTL活性平均值最高为21·67%,12周时CTL活性平均值最高为35·14%,6月时仍可检出较弱的CTL活性。结论:HBV核酸疫苗pCMV-S2S能在小鼠体内持续表达特异性抗原及诱生特异性CTL应答。
- 何芳唐红刘丽刘聪赵连三
- 关键词：乙型肝炎病毒核酸疫苗抗原表达细胞毒性T淋巴细胞
- 丙肝病毒核心蛋白抑制乙肝病毒转录与复制的实验研究被引量：1
- 2007年
- 目的观察丙型肝炎病毒核心蛋白(HCV core)对乙型肝炎病毒(HBV)基因转录和病毒复制的影响。方法将不同剂量的HCVcore表达质粒(pNKF-HC Vcore)转染HepG2.2.15细胞。以空载质粒(pNKF)转染HepG2.2.15细胞作为阳性对照,转染HepG2细胞作为阴性对照。以Northern吸印杂交检测HBV mRNA的转录水平,以Southern吸印杂交检测HBV复制中间体DNA的复制水平。结果20μg pNKF-HCV core转染HepG2.2.15细胞后,可使细胞中HBV mRNA转录水平及HBV复制中间体DNA复制水平明显降低,抑制率分别为51.9%及36.5%。10μg及15μg pNKF-HCV core较pNKF转染的HepG2.2.15细胞的HBV mRNA信号与HBV复制中间体DNA检出信号强度无显著差异。结论HCV核心蛋白达到一定的剂量后能够在一定程度上抑制HBV的转录与复制。
- 何芳唐红刘丽王甦刘凤君刘聪
- 关键词：乙型肝炎病毒转录丙型肝炎病毒核心蛋白
