病毒学国家重点实验室开放研究基金
- 作品数：51 被引量：229H指数：8
- 相关作者：李玲叶啟发赵慧佳乐江沈秉正更多>>
- 相关机构：武汉大学华中科技大学中南大学湘雅三医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖北省自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学理学更多>>
- 纳帕海高原湿地mazG遗传多样性初步研究被引量：2
- 2020年
- mazG基因广泛存在于细菌和病毒中,其功能大多数未知,仅在大肠杆菌中的功能被证实。为揭示纳帕海高原湿地mazG遗传多样性,本研究于纳帕海高原湿地采集旱季泥炭土样品,提取总的基因组,以特异性引物对其mazG基因进行扩增,得到不同的mazG有效序列共39条,并与其它细菌及病毒进行系统发育分析和PCoA分析。通过研究得知,纳帕海高原湿地的部分mazG基因和其它细菌及病毒的mazG序列相接近,其余mazG序列的遗传距离较远,推测其可能为纳帕海高原湿地独有的类群。
- 崔自红李珊秦堃豪张琦魏云林唐兵季秀玲
- 关键词：高原湿地
- H5N1亚型禽流感病毒NS1基因截短体的克隆与原核表达被引量：3
- 2012年
- 禽流感病毒H5N1 NS1蛋白是一种非结构蛋白,在病毒感染过程中发挥着重要的作用。构建基因截短的重组蛋白,可为进一步研究NS1不同结构域与宿主蛋白间的相互作用奠定基础。在成功克隆禽流感病毒H5N1全长NS1基因并测序的基础上,将部分截短基因序列克隆到表达载体pET28a(+)上,构建基因截短的重组表达质粒pET28a-NS1-RBD和pET28a-NS1-ED,转化大肠埃希菌BL21(DE3),阳性重组质粒经IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE检测,获得预期蛋白的表达,然后利用Ni-NTA树脂蛋白纯化系统对重组蛋白进行纯化,并通过Western Blotting进一步确认NS1及截短体蛋白的表达。结果表明,实验成功构建禽流感病毒H5N1亚型的NS1蛋白截短体,并在大肠埃希菌中高效表达,这为进一步研究NS1蛋白不同结构域与宿主蛋白的相互作用提供了实验材料,为深入研究NS1蛋白的生物学功能奠定了坚实基础。
- 郑方亮朱春玉商玲玲马杰良孙婷婷艾海新朱俊峰段艳婷朱应刘宏生
- 关键词：NS1原核表达纯化
- 肝细胞肝癌中长链非编码RNA LINC00844的表达及对细胞增殖和迁移能力的抑制作用被引量：2
- 2020年
- 目的:探讨长链非编码RNA LINC00844在肝细胞肝癌组织中的表达水平及其作用。方法:采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测12对临床肝细胞肝癌组织及相应癌旁组织中LINC00844表达水平;通过携带LINC00844基因的慢病毒与不携带外源性基因的慢病毒感染的方式构建HepG2和HCCLM9细胞系过表达LINC00844组(LV-LINC00844)和对照组(LV-NC),并通过荧光显微镜及q RT-PCR检测过表达的效率,利用细胞计数试剂盒(CCK-8)和Transwell分析LINC00844对HepG2和HCCLM9细胞增殖及迁移的影响。结果:在12对临床标本中,11对肝细胞肝癌组织中LINC00844的表达明显低于癌旁组织(P<0.01);成功构建了过表达LINC00844的HepG2和HCCLM9细胞系;过表达LINC00844可以抑制HepG2和HCCLM9细胞的增殖及迁移能力(P<0.01)。结论:LINC00844可以抑制细胞的增殖及迁移参与肝细胞肝癌的发生发展,LINC00844可能是肝细胞肝癌的一个潜在的生物标记物及治疗靶点。
- 黄康李玲叶啟发彭贵主
- 关键词：肝细胞肝癌增殖迁移
- 活细胞内基于Diels-Alder反应的量子点标记蛋白质研究
- 2017年
- 目的建立一种基于Diels-Alder环加成反应用于活细胞内量子点(quantum dots,QDs)标记蛋白质的新方法。方法反式环辛烯(trans-cyclooctene 2,TCO2)修饰的类转录激活因子效应物(transcription activator-like effectors,TALE)蛋白与偶联四嗪(tetrazine 1,Tz1)的红色量子点QD625在Vero活细胞内特异性结合,形成量子点荧光标记的蛋白TALE-QD625,通过激光共聚焦显微镜观察TALE-QD625在Vero细胞内的荧光信号分布。结果基于Tz1和TCO2的Diels-Alder环加成反应在Vero活细胞内将QD625标记至TALE蛋白,并随TALE进入细胞核内,在核内观察到红色的QDs荧光信号,成功建立活细胞内量子点标记蛋白方法。结论通过Diels-Alder环加成反应首次实现活细胞内量子点标记蛋白,为蛋白单分子成像提供一种新的标记方法。
- 王明秀张加玲刘云凤乔增杰
- 关键词：量子点活细胞
- 北京鸭CD8α分子克隆与表达及其多克隆抗体制备被引量：3
- 2008年
- 为了探讨鸭CTL免疫与病毒关系,本文用PCR技术从鸭cDNA文库中克隆了其CD8α基因(DuCD8α)。将DuCD8α成熟肽cDNA插入表达载体pQE30、构建了E.coliJM109(pQE30/DuCD8α)原核表达系。经诱导表达、蛋白纯化,制备了鼠抗DuCD8α多克隆抗体。结果表明DuCD8α成熟肽长645 bp,编码214个氨基酸。与已报道的DuCD8α在氨基酸水平上的同源性高达99.0%。SDS-PAGE证实重组DuCD8α(rDuCD8α)在JM109工程菌中的表达量可达15%。纯化的rDuCD8α分子量为26 kDa。ELISA结果显示鼠抗rDuCD8α多克隆抗体效价为1∶1 280 000。
- 廖定为唐秀山蒋一男张念之夏春
- 关键词：北京鸭CD8Α抗体
- 新疆出血热病毒截短糖蛋白的原核表达及抗体制备被引量：4
- 2015年
- 目的：原核表达纯化新疆出血热病毒79121毒株糖蛋白截短片段（ Gn、Gc1和Gc2）并分别制备其多克隆抗体。方法采用反转录PCR的方法克隆79121毒株Gn、Gc1及Gc2基因片段，并将其构建到原核表达载体pET-28a（＋）中，转化到E．coli BL21（DE3）中进行诱导表达，经镍柱亲和层析法纯化Gn-His、Gc1-His及Gc2-His融合蛋白，SDS-PAGE分析蛋白相对分子质量（ Mr ）。用纯化蛋白免疫新西兰白兔制备抗血清，ELISA和Western blot法检测血清效价和特异性。结果双酶切鉴定和测序证实构建的pET-28a-Gn、pET-28a-Gc1和pET-28a-Gc2重组表达载体正确，表达的融合蛋白Gn-His、Gc1-His和Gc2-His其Mr 分别约为25×103、33×103和34×103。 ELISA法检测抗体效价分别为1∶25600、1∶6400及1∶25600。 Western blot结果表明兔多克隆抗体均能特异性识别相应的重组蛋白。结论新疆出血热病毒截短糖蛋白的表达纯化和效价高、特异性好的兔抗血清的制备，为新疆出血热病毒的检测和糖蛋白生物学功能的深入研究提供资料。
- 俞欢汪梅芳张渝疆彭倩寇春达尔肯·托肯李阳李轶杰孙素荣
- 关键词：新疆出血热病毒糖蛋白原核表达多克隆抗体
- PGC-1α基因多态性与代谢性疾病的相关性被引量：5
- 2019年
- 过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1-α(peroxisome proliferator-activated receptor gamma coactivator 1-alpha,PGC-1α)属于人体内一种重要的核转录辅助激活因子,能与多种核受体及转录因子相互作用,以调控其靶基因的表达。PGC1-α在人体能量代谢中发挥着重要的作用,其参与脂肪酸氧化,肝糖异生以及调节线粒体ATP的生物合成等。研究表明PGC-1α基因多态性与Ⅱ型糖尿病、糖尿病肾病、肥胖以及冠心病等代谢性疾病的发生有着密切的关系。探究PGC-1α基因多态性与代谢性疾病的相关性有利于从基因层面检测和评估代谢类疾病的发生风险,从而实现早期发现和预防该疾病的发生,提高代谢性疾病的生存质量,延长生存期。本文拟就近五年PGC-1α参与的代谢途径和其基因多态性与代谢性疾病的相关性的研究进展做一综述。
- 范志鹏李玲赵慧佳赵慧佳刘晓红郝卓文孙功鹏董礼乐江乐江吴建国
- 关键词：代谢性疾病基因多态性
- 脂质代谢中的重要靶点：法尼酯X受体(FXR)被引量：9
- 2018年
- 法尼酯X受体(FXR)是一种可以被胆汁酸激活的核受体,通过调控CYP7A1等靶基因的表达,影响脂质在肝脏、小肠等重要器官的各种代谢过程。本文拟就近几年来探究FXR在脂质合成、氧化、吸收及转运环节中的作用机制作一综述,进而FXR有望成为治疗脂肪肝、高甘油三酯血症等疾病的药物靶点,为预防和治疗临床上疾病的发生提供科学依据。
- 刘晓红李玲齐振华陈彬尧赵慧佳郝卓文乐江叶啟发吴建国
- 关键词：法尼酯X受体脂质氧化
- 甲硝唑联合乳酸杆菌制剂治疗滴虫性阴道炎有效性和安全性的Meta分析被引量：4
- 2018年
- 目的:系统评价甲硝唑联合乳酸杆菌制剂治疗滴虫性阴道炎的疗效及不良反应。方法:计算机检索截止于2017年11月20日国内外使用乳酸杆菌制剂辅助治疗滴虫性阴道炎的随机对照试验(RCTs)文献,按照纳入和排除标准进行文献筛查、资料提取和质量评价后,最终纳入7篇RCTs研究,采用RevMan 5.3软件进行Meta分析。结果:与单用甲硝唑治疗的对照组相比,乳酸杆菌制剂联合甲硝唑治疗滴虫性阴道炎的总有效率(P=0.008)和治愈率(P<0.000 1)均较高,而总复发率(P=0.000 6)较低,差异均具有统计学意义。联合治疗组不良反应发生率较单用甲硝唑治疗组并未提高。结论:乳酸杆菌制剂辅助治疗滴虫性阴道炎可显著提高患者的总有效率和治愈率,明显降低复发率,且安全性好。
- 周园红罗幼珍谢燕刘强
- 关键词：滴虫性阴道炎甲硝唑有效性
- 黑胸大蠊浓核病毒NS2蛋白的表达、抗体制备及亚细胞定位被引量：4
- 2009年
- ns2是黑胸大蠊浓核病毒的一个非结构基因,所编码的蛋白质大小为30kD,是一个功能未知的基因。为了对该基因进行深入的功能研究,从感染了黑胸大蠊浓核病毒的蟑螂的后肠组织中通过RT-PCR得到ns2基因编码序列,将其构建于原核表达载体pET-28a,转化大肠杆菌BL21(DE3)获得融合表达产物。此融合蛋白经分离纯化后,免疫新西兰大白兔,制备其多克隆抗体。采用Western印迹技术,用该抗体检测ns2基因的真核表达产物,证明该抗体有较好的针对NS2蛋白的专一性,可用于对NS2结构和功能的研究。同时,将此编码序列克隆至果蝇细胞表达载体pAC,得到重组质粒后转染果蝇S2细胞表达重组蛋白,通过共聚焦显微镜用该抗体检测该蛋白在S2细胞中的亚细胞定位,发现NS2蛋白主要定位于细胞质,核内仅有少量分布。
- 杨波余沛然蔡大威董晓敏刘志刚胡征张珈敏胡远扬
- 关键词：黑胸大蠊浓核病毒亚细胞定位
