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光老化对皮肤成纤维细胞降解晚期糖基化终末产物的影响被引量：3: 2018年; 目的探讨光老化对皮肤成纤维细胞降解胞内晚期糖基化终末产物（AGE）的影响。方法连续长波紫外线（UVA）照射诱导成纤维细胞光老化，通过CCK8法、β半乳糖苷酶染色及细胞凋亡率检测验证模型是否构建成功。取原代成纤维细胞分为4组：光老化组（以UVA照射诱导光老化），非光老化组（不做处理），光老化＋ AGE组（以UVA照射诱导光老化后加入200 mg/L AGE？BSA孵育），非光老化＋ AGE组（未诱导光老化细胞中加入200 mg/L AGE？BSA孵育），孵育4 ~ 72 h后，流式细胞仪检测各组细胞内AGE？BSA荧光强度，激光扫描共聚焦显微镜定位、半定量各组细胞8 h点胞内AGE？BSA。ELISA检测各组细胞24 h内AGE？BSA浓度变化。结果与对照组（未照射UVA）相比，UVA照射组细胞增殖活性显著下降（t = 7.559，P 〈 0.05），而凋亡率及β半乳糖苷酶染色阳性率显著升高（t值分别为14.075、43.524，均P 〈 0.05）。流式细胞仪检测示，孵育4、8、16、24、48、72 h后，光老化＋ AGE组AGE？BSA平均荧光强度分别为293 ± 8.19、359.67 ± 11.59、347 ± 12.29、338 ± 12.77，334.67 ± 14.22、336.3 ± 10.21，非光老化＋ AGE组分别为222.33 ± 8.74、276.33 ± 6.11、256.33 ± 5.51、243 ± 10.15，236.33 ± 1.53、240.33 ± 1.52，均分别高于相应时间点光老化组和非光老化组，差异均有统计学意义（P 〈 0.05）。其中光老化＋ AGE组AGE？BSA平均荧光强度显著高于相应非光老化＋ AGE组细胞（P 〈 0.05）。激光扫描共聚焦显微镜观察发现，吞入胞内的AGE？BSA主要位于溶酶体内，光老化＋ AGE组AGE？BSA荧光强度显著高于非光老化＋ AGE组，P 〈 0.05。ELISA检测发现，32 h点非光老化＋ AGE组细胞AGE浓度较8 h点下降（14.6 ± 1.2）%，显著高于光老化＋ AGE组（t = 6.604，P 〈 0.05）。结论光老化皮肤成纤维细胞对吞入胞内AGE？BSA的降解能力下降，可能; 许新雅郑跃许庆芳黎钰莹黄云芬龚子鉴陆春赖维; 关键词：成纤维细胞皮肤衰老细胞衰老糖基化

UVA照射对皮肤成纤维细胞组织蛋白酶K表达的影响被引量：6: 2013年; 目的探讨皮肤成纤维细胞中组织蛋白酶K（Cathepsin K，CatK）的表达随UVA照射后时间及其剂量的变化。方法原代培养的皮肤成纤维细胞来自儿童包皮，10代以内的细胞行后续实验。先以10J／em2UVA照射皮肤成纤维细胞，在照射后24、48、72h提取照射组和对照组细胞蛋白和mRNA。再以10J／cm2、20J／cm2、30J／cm2UVA照射皮肤成纤维细胞，在照射后48h收集细胞。用RT—PCR和Western印迹法分别检测各组间CatKmRNA、蛋白的表达的差异。结果10J／cm2UVA照射后1、2、3d，照射组CatKmRNA表达分别为0．351±0．038（对照组0．177±0．006）、0．510±0．017（对照组0．176±0．002）、0．313±0．012（对照组0．173±0．002）。照射组CatK蛋白灰度值分别为1．76±0．27（对照组0．82±0．45）、2．97±0．36（对照组1．58±0．15）、2．23±0．14（对照组1．29±0．32），照射组CatKmRNA、蛋白表达均较对照组升高（P〈0．05），且以照射后第2天表达最高。10、20、30J／cmzUVA照射后，48h皮肤成纤维细胞中CatKmRNA表达分别为对照组的2．34、2．91、3．18倍，CatK蛋白表达分别为对照组的1．77、2．82、3．64倍，均随UVA剂量的升高而增加，其差异有统计学意义（P〈0．05）。结论CatK在UVA照射后皮肤成纤维细胞中的表达升高。; 许庆芳侯巍刘晨郑跃龚子鉴赖维; 关键词：成纤维细胞组织蛋白酶K 紫外线

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广东省科技计划工业攻关项目(20128031800057)

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