山东省科技攻关计划(01BB1DADA1)
- 作品数：6 被引量：22H指数：3
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 小鼠胚芽干细胞同种移植治疗慢性肝脏损伤的实验研究被引量：1
- 2006年
- 将分离和体外扩增的小鼠胚芽干细胞,用BrdU标记后,经尾静脉同种移植于CCL4制备慢性肝损伤小鼠体内。分别于移植后2w、4w取出肝脏,进行连续冰冻切片,用免疫组织化学和免疫荧光双重染色检测移植细胞在受体小鼠肝内的存活、分布和肝细胞特异性白蛋白的表达;用PAS染色检测移植细胞的糖原代谢;HE染色观察移植动物肝组织的结构变化。探索胚芽干细胞在慢性损伤肝脏中的存活、分化和治疗作用。实验结果表明:胚芽干细胞经静脉移植后可以进入损伤肝脏中,并分化为肝样细胞和肝小叶内的其他细胞,并明显改善损伤肝脏的组织结构,具有较好的治疗作用。
- 刘晓萍高英茂邴鲁军郭菲菲徐珞
- 关键词：细胞移植小鼠
- 胚胎干细胞移植对急性损伤肝脏的作用被引量：7
- 2007年
- 目的探索胚胎干细胞移植在急性损伤肝脏中的存活和分化情况。方法用四氯化碳(CCl4)制备小鼠急性肝损伤模型,将BrdU标记的来源于小鼠原始生殖细胞的胚胎干细胞经静脉移植于模型动物体内,分别于移植后2周、4周取出肝脏,用免疫组织化学、免疫荧光双重染色和PAS染色方法检测移植细胞在受体小鼠肝内的分布、存活、白蛋白的表达和糖原代谢。结果急性损伤小鼠肝脏可见大量肝细胞空泡样变性,有严重出血现象;2周时损伤肝内可见炎性细胞浸润和未吸收的出血区;4周时仍见少量炎性细胞浸润。干细胞移植2周,肝小叶内可见散在分布的BrdU和ALB双阳性着色细胞,PAS染色呈阳性反应;部分小细胞呈BrdU单阳性着色;损伤移植组的肝小叶结构基本恢复。移植4周,损伤肝小叶结构正常,小的BrdU阳性细胞数量增多。结论原始生殖细胞可以在急性损伤肝脏中存活,并分化为肝细胞和肝小叶内的其他细胞,并明显改善损伤肝的组织结构。
- 刘晓萍高英茂徐珞郭菲菲邴鲁军
- 关键词：原始生殖细胞细胞移植肝脏损伤免疫荧光
- 新生小鼠精原细胞分离和纯化的实验研究被引量：9
- 2005年
- 目的:分离和纯化7～8d新生雄性小鼠精原细胞,为深入研究生精机理及其影响因素提供细胞来源和技术支持。方法:采用组合酶消化法制备7～8d雄性小鼠的生精细胞悬液;Percoll密度梯度离心法分离精原细胞,贴壁培养法进一步纯化精原细胞;滴片进行碱性磷酸酶染色;取同时间段雄性小鼠睾丸组织冰冻切片进行碱性磷酸酶染色。结果:精原细胞主要分布于45%～55%梯度间的Percoll中,经贴壁培养后纯度达75.2%。结论:用上述方法成功地分离和纯化了小鼠精原细胞。
- 张晓丽高英茂赵舒武邴鲁军
- 关键词：精原细胞纯化小鼠
- 生精细胞的体外培养被引量：3
- 2005年
- 目的:在体外培养中,观察精原细胞的增殖、分化和形态变化规律。方法:用胶原酶、透明质酸酶和胰蛋白酶分次消化法制取睾丸组织的细胞悬液,密度梯度离心法富集生精细胞,贴壁培养后观察生精细胞的存活、分裂和形态变化,并行AnnexinⅤ-FITC/PI染色,采用激光共聚焦扫描显微镜检测细胞的凋亡情况。结果:睾丸组织细胞悬液中的体细胞在培养中较早贴壁,胞质形成多个突起;精原细胞贴壁较迟,贴壁后呈规则的圆形或卵圆形,以链状或团块状位于体细胞层之上,细胞分裂不完全,相互间以细胞间桥相连。AnnexinⅤ-FITC/PI染色显示,培养第2天时精原细胞已出现凋亡,但数量极少,后逐渐增多。结论:在本实验所提供的体外培养条件下,精原细胞能够存活并发生贴壁、分裂、分化等行为,但同时也有细胞凋亡。
- 张晓丽高英茂赵舒武邴鲁军
- 关键词：精原细胞体外培养
- 小鼠胚芽干细胞的分离与培养
- 2005年
- 目的:探讨胚芽干细胞的提取、培养和体外扩增的最佳条件;筛选胚芽干细胞在体外培养中的活力最佳时期。方法:分离受精11d小鼠生殖腺嵴,经消化制备成胚芽干细胞悬液,将细胞分别接种于基础培养液、同种胎鼠成纤维细胞条件培养液、添加LIF的基础培养液、有饲养层的培养基和与胎鼠成纤维细胞共培养5种不同的培养体系中,比较观察在5种培养体系中胚芽干细胞的形态学、碱性磷酸酶染色和体外分化情况。结果:①在含15%胎牛血清的DMEM/F12基础培养液中培养时,胚芽干细胞贴壁明显减少,EGC克隆形成很少,传代率很低;②在基础培养液中添加白血病抑制因子(LIF)或同种胎鼠成纤维细胞条件培养液时,细胞生长情况与基础培养液培养相比无明显差异;③有饲养层存在时,4～6d后出现鸟巢状胚芽干细胞集落。传4代后集落逐渐减少、变小。6～7代后集落消失;④与胎鼠成纤维细胞共培养时,2～4d即可见EGC集落形成。传6代后细胞的集落逐渐减少、变小;⑤在与胎鼠成纤维细胞共培养时,第2、3代细胞的生长曲线基本相同,接种24h后细胞呈对数生长。培养液的更新可以显著影响小鼠胚芽干细胞的生长。第5代的细胞增殖速度减慢。结论:与饲养层细胞或腹壁组织成纤维细胞共培养可较好地培养和扩增胚芽干细胞;第3代细胞的活力最好。
- 刘晓萍高英茂邴鲁军
- 关键词：体外培养小鼠
- 定向诱导小鼠原始生殖细胞向肝细胞分化的研究被引量：4
- 2005年
- 目的探索诱导小鼠原始生殖细胞向肝细胞定向分化的最佳条件。方法分离提取小鼠的原始生殖细胞,体外培养扩增后,接种到6孔培养板中。向不同孔中分别加入不同浓度的bFGF、EGF、-βNGF、RA、肝细胞提取液和与胎肝组织分隔培养,进行诱导分化。用靛青绿摄入试验和α-1-抗胰蛋白酶(AAT)、白蛋白(ALB)免疫细胞化学染色鉴定原始生殖细胞向肝细胞分化的状况。结果与胎肝组织分隔培养2 d,可见原始生殖细胞向肝样细胞分化,分化细胞呈圆形和星形,圆形细胞多呈簇状,可以摄入靛青绿呈绿色,并呈AAT和ALB免疫阳性着色,培养12 d时分化率达80%。肝细胞提取液也可诱导原始生殖细胞向肝样细胞分化,12 d时分化率达70%以上;0.5 g/L和1 g/L的肝细胞提取液的诱导分化率无显著差异;但是0.5 g/L提取液诱导组圆形细胞较多;而1 g/L肝提取液诱导组,星状分化细胞多。β-神经生长因子(-βNGF)诱导4 d,可见肝样细胞出现,随诱导时间延长,分化细胞增多,圆形分化细胞较多,12 d时分化率达60%以上;20μg/L和50μg/L两种浓度的-βNGF诱导分化率无显著差异。bFGF、EGF、RA诱导组未见ALB免疫反应阳性细胞。RA可以增强-βNGF的诱导分化作用,使星状细胞增多明显。结论-βNGF和肝细胞因子可诱导原始生殖细胞向肝细胞定向分化。
- 刘晓萍高英茂邴鲁军
- 关键词：原始生殖细胞肝细胞Β-神经生长因子碱性成纤维细胞生长因子维甲酸小鼠
