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新型骨靶向雌激素大黄酸—雌酮抗骨质疏松活性研究被引量：4: 2010年; 【目的】研究新型雌激素衍生物大黄酸-雌酮{新型骨靶向雌激素3-羟基-雌甾-1,3,5(10)-三烯-17酮-3-[N4-(1,8-二羟基-9,10-蒽醌-3-甲酰基)哌嗪基-N1-乙基]醚,代号LC}对去卵巢大鼠骨密度及子宫内膜增殖的影响,探讨其抗骨质疏松活性及其对子宫的副作用。【方法】采用去卵巢大鼠模型,每天给予大黄酸-雌酮4μmol/kg(H-LC组)或0.8μmol/kg(L-LC组),6个月后测定大鼠骨密度(BMD)、骨矿含量(BMC)及子宫重量、子宫直径、子宫内膜厚度变化,并与模型组(OVX组),雌酚酮组(E组)比较。【结果】与OVX组相比,E组BMD及BMC增加,子宫相对重量及子宫直径均显著增加。L-LC组BMD、BMC及H-LC组BMC显著增加,达到E组水平,子宫相对重量及子宫直径虽高于OVX组,但显著低于E组。【结论】大黄酸-雌酮具有雌激素样的抗骨质疏松活性,但大大降低了对子宫的刺激性。; 张岭金鑫李灵芝张永亮唐存贵王越; 关键词：去卵巢大鼠雌酚酮

改良酶消化法培养成骨细胞的研究被引量：1: 2007年; 【目的】采用改良胶原酶法体外培养大鼠颅骨成骨细胞。【方法】取新生24 h SD大鼠颅骨,剔净后剪成碎块。依次以0.25%胰蛋白酶-0.02%EDTA和0.1%Ⅰ型胶原酶消化后,培养于-αMEM培养液中。倒置显微镜下观察形态学变化,钙钴染色法检测ALP活性,茜素红染色法观察矿化结节的形成。【结果】培养的细胞具有典型的成骨细胞形态特征,碱性磷酸酶呈阳性。【结论】采用改良胶原酶法培养的成骨细胞操作简便,成活率高,细胞具有典型的成骨细胞形态特征,且成分较单一。; 梁林龚海英张丽佟巍金鑫李灵芝; 关键词：成骨细胞细胞培养酶消化法

葛根素对胎鼠骺板Ⅰ型胶原蛋白表达的影响被引量：21: 2008年; 取怀孕16d昆明种小鼠的胎鼠，以胚胎长骨为靶器官，设17β-雌二醇1umol／L阳性对照组、空白对照组及葛根素1，10，100umol／L3个剂量组。剥离出胎鼠尺骨，置于BGJb培养基中，葛根素和雌二醇作用48h后，将长骨固定，脱钙后作石蜡切片，进行免疫组织化学染色，光镜下观察骺板静止区、增殖区和肥大区阳性细胞定位，图像分析系统下测定免疫反应阳性细胞面积。每组培养长骨8根，重复3次。葛根素10，100umol／L组胎鼠骺板各区Ⅰ型胶原蛋白免疫组织化学染色阳性细胞面积显著大于对照组（P〈0．01）。葛根素1，10umol／L组各区Ⅰ型胶原蛋白免疫组织化学染色阳性细胞面积均低于17β雌二醇组（P〈0．05～0．01）；葛根素100umol／L组阳性细胞面积与17β-雌二醇组差异无显著性意义（P〉0．05）。随葛根素剂量升高，各区阳性细胞面积基本呈逐渐增加的趋势。在体外培养条件下，葛根素可上调胎鼠骺板静止区、增殖区和肥大区Ⅰ型胶原蛋白表达水平，并呈剂量依赖性。; 龚海英张丽郑忠志李灵芝张永亮; 关键词：骨骺雌二醇葛根素

葛根素对大鼠成骨细胞增殖和分化的影响被引量：29: 2007年; 目的:课题以往的研究已证实,葛根素在体外能够抑制破骨细胞的骨吸收活性,促进骨生长,实验将进一步验证葛根素对大鼠成骨细胞增殖和分化的影响,并评价其对骨形成的作用。方法:实验于2003-03/2004-03在武装警察部队医学院药物化学教研室药物活性筛选室进行。①实验材料:葛根素(Puerarin)购自中国药品生物制品检定所,雌酚酮购自浙江仙居制药厂。大鼠由解放军军事医学科学院实验动物中心提供。②实验方法:实验分5组:雌酚酮阳性对照组、空白对照组(不加药,只加等量细胞悬液和培养基)、0.01,0.1,1μmol/L葛根素组。由新生24hSD大鼠颅盖骨分离培养成骨细胞,调整成骨活细胞密度为0.9×107L-1,接种于24孔培养板,每组12个复孔,分别于第1,3,5天每组取3孔计数,绘制细胞生长曲线。③实验评估:分别于第1,3,5天采用四唑盐法测定吸光度,计算平均增殖率,采用硝基苯基质动力学法测定各组细胞内外碱性磷酸酶活性。结果:①与空白对照组相比,0.1,1μmol/L葛根素干预组与雌酚酮阳性对照组第3,5天细胞增殖速度均加快,差异有显著性意义(P<0.01)。②经1μmol/L葛根素处理的第1,3,5天,细胞内、外碱性磷酸酶活性均明显高于空白对照组(P<0.01)。经0.1μmol/L葛根素处理第3,5天,细胞内、外碱性磷酸酶活性明显高于空白对照组(P<0.05,P<0.01)。经0.01μmol/L葛根素处理后第5天,细胞外碱性磷酸酶活性明显高于空白对照组(P<0.01)。结论:葛根素对骨形成的作用:①通过影响碱磷酸酶活性,而促进成骨细胞分化。②通过雌激素受体介导促进成骨细胞的骨形成效应。; 王久亮郑忠志李灵芝张永亮龚海英; 关键词：葛根素成骨细胞增殖分化

大黄酸-雌酮对去卵巢大鼠骨质量的保护作用被引量：4: 2011年; 目的观察新型雌激素衍生物—大黄酸-雌酮对去卵巢大鼠骨质量的保护作用及其对子宫的雌激素样作用,以评价大黄酸-哌嗪雌酚酮的抗骨质疏松活性。方法 6月龄Wistar雌性未孕大鼠48只,分为假手术组、去卵巢模型组、雌酚酮组、大黄酸-雌酮高、中、低3个剂量组,除假手术组外其余各组均行双侧卵巢切除,给药24 w后,测定大鼠全身及脊柱骨密度、骨矿盐含量、股骨生物力学及骨羟脯氨酸、骨钙含量和观察大鼠股骨远端和子宫的形态学变化。结果大黄酸-雌酮3个剂量组大鼠全身及脊柱骨密度、骨矿物含量、最大压缩载荷、最大压缩应力、骨羟脯氨酸含量及股骨远端骺板下小梁骨体积均明显高于模型组(P<0.05或P<0.01);除骨体积少于雌酚酮组外,其余指标与雌酚酮组无明显差异;3组子宫重量、直径和内膜厚度明显小于雌酚酮组和假手术组,与模型组无明显差异。结论大黄酸-雌酮在本实验剂量范围内与雌酚酮一样能显著改善去卵巢大鼠骨质量,而对子宫的刺激作用远远低于雌酚酮。; 唐存贵李灵芝金鑫王越崔颖张永亮; 关键词：大黄酸雌酚酮骨质疏松骨质量

人成骨样细胞和前破骨样细胞ER亚型、OPG/RANKL/RANK系统、IL-6及其受体以及破骨细胞标志基因表达的研究被引量：1: 2010年; 目的分析比较两种人成骨样细胞系(U2-OS、MG-63)和两种人前破骨样细胞系(U937、HL-60)ER亚型、OPG/RANKL/RANK系统、IL-6及其受体以及破骨细胞标志基因表达的差异,为今后研究雌激素与IL-6等细胞因子在骨组织中相互关系提供适宜的细胞模型。方法RT-PCR和免疫印迹法检测ERα、ERβ的表达,ELISA法测定IL-6的分泌,OPG、RANKL、RANK及IL-6受体的表达采用免疫印迹法进行检测,TRAP、MMP-9则采用RT-PCR技术进行分析。结果(1)转录水平及蛋白水平证实四种细胞均表达ERα和ERβ;(2)四种细胞不同程度地表达OPG和RANKL,而RANK则仅见于U937细胞表达;(3)四种细胞均表达IL-6受体(IL-6Rα、gp130),除U2-OS细胞外其余三种细胞均组成型分泌IL-6;(4)破骨细胞标志基因TRAP在两种人前破骨样细胞U937、HL-60中均表达,且表达水平相近;而MMP-9仅在U937细胞中弱表达;两种人成骨样细胞U2-OS、MG-63未见有这两种基因表达。结论筛选出用于研究雌激素与IL-6等细胞因子在骨组织中相互关系的细胞模型,同时也为今后深入阐明骨靶向和其他新型抗骨质疏松雌激素的分子机制研究奠定基础。; 王越朱雅琴吴健孙维甲李灵芝; 关键词：成骨样细胞 OPG/RANKL/RANK系统 IL-6及其受体

大黄酸-雌酮对大鼠成骨细胞增殖和分化的作用被引量：1: 2008年; 【目的】研究大黄酸-雌酮(LC-1)对原代培养大鼠成骨细胞增殖和分化的作用。【方法】酶消化法分离培养SD乳鼠颅盖骨成骨细胞;采取MTT法测定细胞增殖,磷酸苯二钠法(pNPP)测定细胞内外碱性磷酸酶(ALP)活性,研究不同浓度LC-1对成骨细胞增殖和分化能力的影响,并与雌酚酮和大黄酸的作用进行比较。【结果】给药3 d后,与空白对照组相比:10-6mol/L LC-1组、10-7mol/L LC-1组和10-7mol/L雌酚酮组明显促进成骨细胞增殖和增加细胞内外ALP活性(P<0.05);大黄酸抑制成骨细胞增殖,其中10-6mol/L组有明显差异(P<0.05),同时有增加细胞ALP活性的趋势,但无统计学差异。【结论】大黄酸-雌酮在体外可以促进成骨细胞增殖和分化。; 金鑫李灵芝唐存贵; 关键词：大黄酸雌酚酮成骨细胞增殖碱性磷酸酶

HPLC法测定小鼠骨中大黄酸浓度被引量：8: 2008年; 目的：建立大黄酸在小鼠后肢骨中药物浓度快速HPLC测定方法，初步考察大黄酸的趋骨性。方法：后肢骨样品经冷冻、粉碎、匀浆、去蛋白和有机溶剂提取处理后，RP-HPLC进行分析。采用Phenomenex ODS-C18（250mm×4．6mm，5μm）色谱柱；流动相为甲醇-乙酸水溶液-三乙胺（400：150：0．55，乙酸调pH5．0）；流速1．0mL·min^-1；柱温25℃；检测波长为420nm。结果：后肢骨中大黄酸的方法回收率在98％～106％，在0．04～20．00μg·g^-1范围内线性关系良好，相关系数为0．9999，日内、日间RSD均〈6％，重现性良好。结论：本法简便、准确、灵敏，适用于大黄酸在小鼠骨内的药物分析。大黄酸具有较高的趋骨性。; 崔颖李灵芝朱江; 关键词：高效液相色谱法大黄酸趋骨性

大黄酸-雌酮对骺板TGF-β1及其受体TβRⅡ蛋白表达的影响被引量：2: 2008年; 目的考察新型雌激素衍生物——大黄酸-雌酮对小鼠长骨转化生长因子-β1(TGF-β1)及其受体TβRⅡ蛋白表达的影响,初步探讨该化合物对骨的作用机制。方法取16 d胚胎小鼠前肢尺骨在BGJb培养基中培养48 h,培养基中分别含有1×10-6mol/L大黄酸-雌酮、雌酚酮、大黄酸及雌酚酮+大黄酸混合物。采用免疫组织化学方法测定长骨骺板静止区、增殖区和肥大区TGF-β1和TβRⅡ基因表达产物。结果与空白对照组相比,雌酚酮组、大黄酸-雌酮和雌酚酮+大黄酸混合组骺板各区TGF-β1和TβRⅡ蛋白水平明显上调。大黄酸组仅肥大区TβRⅡ上调,其他各区TGF-β1和TβRⅡ蛋白水平均无明显改变。与雌酚酮组相比,大黄酸-雌酮组静止区和增殖区TGF-β1和TβRⅡ的表达均增强。结论培养基中加入大黄酸-雌酮可上调长骨TGF-β1及其受体的表达,并可能与其促进体外培养胚胎小鼠长骨生长有关。; 李灵芝倪宁张丽张永亮龚海英; 关键词：雌酚酮大黄酸长骨

鼠龄对大鼠去卵巢骨质疏松模型的影响被引量：15: 2008年; 目的探讨鼠龄对大鼠去卵巢后骨质疏松的影响。方法3月龄和6月龄Wistar雌性大鼠各16只,分别分为去卵巢组和假手术组。去卵巢组行双侧卵巢切除,6个月后,测定大鼠骨密度、骨矿含量、股骨生物力学和股骨远端形态结构的变化。结果与假手术组相比,去卵巢组全身及脊柱骨密度、骨矿盐含量、股骨最大压缩载荷、最大压缩应力、弹性模量均明显下降(P<0.01);骺板下骨小梁结构排列稀疏,骨小梁间的连接性变差,总量明显减少,6月龄组更明显。结论3月龄和6月龄大鼠去卵巢6个月,均可发生骨质疏松症。6月龄大鼠骨质疏松程度更严重。; 唐存贵李灵芝金鑫张新宁吕琪; 关键词：骨密度生物力学去卵巢骨质疏松症

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