浙江省自然科学基金(301524)
- 作品数：3 被引量：58H指数：3
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- 1800MHz射频电磁场对人乳腺癌细胞蛋白质表达的影响被引量：5
- 2006年
- 目的采用高通量的蛋白质组学技术研究人乳腺癌细胞株MCF7细胞受GSM1800MHz射频电磁场辐照后,其蛋白质表达谱的变化,以探索移动电话信号对细胞正常生理功能的可能影响。方法比吸收率为3.5W/kg时,采用不同时间(1、3、6、12和24h)和辐照模式(间断辐射和连续辐射)的GSM1800MHz射频电磁场处理MCF7细胞后,直接抽提蛋白质,然后进行双向凝胶电泳。凝胶经银染后,使用PDQuest软件分析假辐照组与电磁场辐照组间的差异表达蛋白质斑点。每个实验重复3次。结果凝胶上平均可检测到1100个蛋白斑点。3.5W/kg连续辐射6h未发现差异点,其他暴露情况下均可检测到不同数量的差异蛋白,以3.5W/kg间断辐射3h和连续辐照12h检测的差异蛋白点较多,分别为18个和7个。通过搜索SWISSPROT蛋白数据库,对差异蛋白的类别和功能进行了初步推测,结果表明差异蛋白主要与生物分子的合成和调控、信号转导、DNA损伤修复等功能相关。结论GSM1800MHz射频电磁场对MCF7细胞蛋白质表达谱具有一定程度的影响,且依赖于暴露的强度、时间和模式,影响环节可能涉及多个生物学过程。
- 曾群力翁瑜陈光弟鲁德强姜槐许正平
- 关键词：电磁场蛋白质组肿瘤细胞培养乳腺癌
- 细胞裂解液对蛋白质定量方法的影响被引量：24
- 2008年
- 目的：观察不同细胞裂解液对Bradford法和bicinchoninic acid（BCA）法的影响，以确定适合蛋白质组学研究中细胞全蛋白含量的定量方法。方法：采用Bradford法和BCA法测定牛血清白蛋白（bovine serum albumin，BSA）样品溶液，样品BSA溶液分别由双蒸水和不同裂解液（荧光差异双向凝胶电泳裂解液、三种传统双向凝胶电泳裂解液）配制；然后，采用这两种方法测定上述裂解液所提取的细胞全蛋白样品；采用Bradford法定量反复冻融、不同比色杯和不同时期标准曲线下的样品。结果：各细胞裂解液对Bradford法均有显著性影响，使所定量的BSA浓度普遍偏高1．2至2倍，但定量值可随着加样浓度的增加而增加（r=0．989～0．996，P〈0．05）；各裂解液对BCA法也均有显著性的干扰，多数定量结果超出仪器读数范围；对于同批全蛋白溶液样品，BCA法的定量结果与Bradford法相比可有千倍差异；反复冻融后蛋白浓度变化统计学上无显著性差异，但有下降趋势，不同比色杯和不同时期标准曲线对Bradford法无显著影响。结论：Bradford法是蛋白质组学中细胞全蛋白定量的较适方法，但需根据具体实验进行优化。
- 徐珊珊阎春兰刘黎明曾群力
- 关键词：蛋白质组学电泳凝胶血清白蛋白
- 双向凝胶电泳比较三种常用蛋白质提取方法被引量：29
- 2005年
- 组织(或细胞)的蛋白质提取效率直接影响蛋白质双向凝胶电泳(2-DE)的分辨率.为探索建立适用于人乳腺癌细胞株MCF-7蛋白质提取的最佳条件,比较目前在双向凝胶电泳中常用的3种蛋白质提取方法对MCF-7细胞总蛋白的提取效率.MCF-7细胞经培养后,分别采用M-PER试剂、标准裂解液或含硫脲裂解液提取其总蛋白质,然后进行双向凝胶电泳,并根据凝胶上蛋白质斑点的丰度和分布特点判断所得双向电泳图谱的质量,以确定MCF-7细胞蛋白质提取的相对最佳方法.结果显示,M-PER试剂法得到的图谱分辨率较低,蛋白质主要集中分布在分子量15～70 kD,pH 4.7～6.3的范围内;标准裂解液法得到的图谱分辨率有所提高,蛋白质分布比M-PER试剂法得到的图谱广;硫脲裂解液法得到的图谱是三者中分辨率最高的,尤其是高丰度蛋白和高分子量蛋白分离效果比前两者好.结果表明,在3种常用的蛋白质提取方法中,硫脲裂解液对细胞蛋白质的溶解性最佳,相对更适合于提取MCF-7细胞的蛋白质,并与双向凝胶电泳条件更兼容.
- 翁瑜曾群力姜槐许正平
- 关键词：蛋白质提取双向凝胶电泳MCF-7
