吉林省科技发展计划基金(20050703-4)
- 作品数：7 被引量：24H指数：3
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- 相关机构：延边大学吉林大学吉林市动物检疫站更多>>
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- 牛瑟氏泰勒虫P23表面蛋白基因表达条件的优化被引量：1
- 2009年
- 将已构建并测序正确的含有牛瑟氏泰勒虫P23表面蛋白基因的pGEX-4T-P23转化菌用IPTG进行诱导表达,经SDS-PAGE电泳可检测到相对分子量为46.0 ku的融合蛋白.根据SDS-PAGE确定融合蛋白的最佳表达条件,结果显示诱导时机和时间是影响表达的主要因素,诱导温度和IPTG浓度次之;确定最佳诱导时机为转接种后2.0 h,最佳诱导温度34℃,最佳诱导时间6.0 h,最适IPTG浓度0.08 mmol/L.表达产物主要以包涵体存在,在优化条件下融合蛋白的表达量经Bandscan5.0软件分析约占菌体总蛋白的31.7%.
- 方东山许应天
- 关键词：牛瑟氏泰勒虫
- 牛瑟氏泰勒虫18S rRNA基因的克隆及分子分类学分析
- 2009年
- 为分析牛瑟氏泰勒虫延边株18S rRNA基因序列,根据GenBank上已发表的牛瑟氏泰勒虫18S rRNA基因序列设计2对特异性引物,通过PCR扩增目的基因片段,将扩增产物连接到pMD18-T载体中,经酶切鉴定和PCR鉴定为阳性的重组质粒进行测序,对测序结果用DNAMAN软件对其与GenBank上8个虫株相关序列进行同源性比较,建立系统发育树。结果显示,牛瑟氏泰勒虫中国延边株的18SrRNA基因大小为1 744 bp,瑟氏泰勒虫延边株、兰州株、日本株以及水牛泰勒虫中国株彼此之间亲缘关系最近;瑟氏泰勒虫延边株与突变泰勒虫亲缘关系较远。
- 沈岩许应天李静栾杨杨兴
- 关键词：牛瑟氏泰勒虫RRNA基因克隆
- 以p33重组蛋白为抗原建立牛瑟氏泰勒虫病间接ELISA诊断方法被引量：9
- 2007年
- 许应天高旭武振久张守发张西臣
- 关键词：瑟氏泰勒虫病诊断抗原重组蛋白间接ELISA血液原虫病
- 应用间接荧光抗体技术检测林蛙嗜水气单胞菌被引量：7
- 2010年
- 以感染嗜水气单胞菌的林蛙各组织脏器为抗原,以热灭活的嗜水气单胞菌为免疫原,免疫家兔制备兔抗嗜水气单胞菌血清为第一抗体,用异硫氰酸荧光素(FITC)标记的羊抗兔IgG作为二抗,建立了间接荧光抗体试验方法。分别采用2.5%戊二醛5 min、甲醇10 min、冷丙酮1 h 3种固定方法固定抗原,然后滴加不同稀释倍数的兔抗嗜水气单胞菌血清、羊抗兔IgG-FITC,于荧光显微镜下观察。结果表明,2.5%戊二醛固定腹水5 min,兔抗血清抗体效价为1∶80,荧光二抗的最佳稀释倍数为1∶4000。
- 白雪梅李太元杨兴李艳茹孙丹丹董丹
- 关键词：荧光抗体技术林蛙嗜水气单胞菌
- 牛瑟氏泰勒虫P33表面蛋白基因的克隆与原核表达被引量：2
- 2009年
- 本研究根据GenBank牛瑟氏泰勒虫P33表面蛋白基因设计1对引物,利用全血基因组DNA提取试剂盒提取牛瑟氏泰勒虫全血基因组DNA,PCR扩增得到了大小为786 bp的基因片断,测序分析证明,它与已报道序列的核苷酸同源性可达99%。将该基因与pET-28a(+)载体进行连接,经酶切和PCR鉴定,证明成功构建了含有目的基因片段的重组表达载体pET-28a-P33。将此质粒转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)中,用IPTG进行诱导。结果证实,该基因在大肠杆菌中用IPTG诱导4 h时表达量达到高峰,表达产物为分子质量约30.3 ku的融合蛋白,其表达量占菌体总蛋白的43%,以包涵体形式存在;Western blotting试验证明,表达蛋白P33可被牛瑟氏泰勒虫阳性血清所识别,表明该融合蛋白具有较好的反应原性。
- 李春花张西臣张守发许应天
- 关键词：牛瑟氏泰勒虫原核表达
- 牛瑟氏泰勒虫P23主要表面蛋白基因的克隆及原核表达被引量：1
- 2010年
- [目的]研究牛瑟氏泰勒虫P23表面蛋白基因的克隆及原核表达。[方法]采用PCR方法扩增牛瑟氏泰勒虫中国延边株P23基因片段,将扩增产物克隆入pMD18-T载体构建重组质粒pMD18-P23,经PCR、双酶切鉴定后测序;将目的基因片段亚克隆入表达载体pGEX-4T-1构建重组表达质粒pGEX-4T-P23,转化宿主菌BL21获得重组菌。通过对诱导条件的优化,根据SDS-PAGE确定表达蛋白的最佳表达条件;Western-blotting检测表达蛋白的反应原性。[结果]所克隆的牛瑟氏泰勒虫P23基因片段长507 bp,与牛瑟氏泰勒虫日本株P23基因的核苷酸同源性达99.4%,表达的融合蛋白大小约为46 ku;诱导时机以接种培养后2 h为最佳,诱导时间以6 h为最佳,诱导温度以34℃为最佳,0.008-1.000 mmol/L的IPTG对表达量的影响不大。Western blotting检测表明该蛋白具有较好的抗原性。[结论]为牛瑟氏泰勒虫病的免疫学诊断和预防等研究奠定了基础。
- 李文学李海峰金清洙
- 关键词：牛瑟氏泰勒虫大肠杆菌
- 牛瑟氏泰勒虫P33-P23核酸疫苗研究被引量：6
- 2008年
- 根据牛瑟氏泰勒虫主要表面蛋白基因p23和p33的已知序列,设计特异性引物,将克隆产物与pVAX1表达载体连接,得到真核重组表达质粒pVAX1-p33-p23,脂质体介导其转染Hela细胞后进行表达产物的鉴定,最后进行BALB/c小鼠免疫试验。结果,目的基因在真核细胞内得到正确表达,动物免疫试验pVAX1-p33-p23核酸疫苗能够提高小鼠的细胞免疫和体液免疫水平,并且pVAX1-p33-p23免疫组的免疫效果均高于pVAX1-P33和pVAX1-P23免疫组(P<0.05)。从而证明,牛瑟氏泰勒虫的重组pVAX1-p33-p23核酸疫苗成功构建。
- 李娟许应天张西臣李建华张国才宫鹏涛杨举孟丹
- 关键词：牛瑟氏泰勒虫P33真核表达
