国家重点基础研究发展计划(G1999054300)
- 作品数：41 被引量：404H指数：11
- 相关作者：窦忠英曹谊林崔磊李松刘伟更多>>
- 相关机构：西北农林科技大学上海第二医科大学附属第九人民医院上海第二医科大学更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金上海市博士后基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 大鼠IL-10真核表达载体在软骨细胞中的表达被引量：2
- 2003年
- 目的 构建大鼠IL-10真核表达载体并在大鼠软骨细胞中进行表达。方法 将目的基因片段通过酶切连入真核表达载体pcDNA3,并以Super Fect Transfection Reagent介导转入大鼠软骨细胞表达,RT-PCR检测细胞中mRNA水平,及ELISA检测细胞培养上清液中的IL-10蛋白含量。结果 成功构建了大鼠IL-10真核表达载体,转入软骨细胞后,检测到细胞内IL-10mRNA转录,细胞培养24、48和72 h后,经ELISA检测上清液中IL-10蛋白含量分别为36、62和100 pg/mL。结论 大鼠IL-10真核表达载体的构建并在软骨细胞中表达,为研究IL-10诱导软骨细胞同种异体移植耐受奠定了基础。
- 赵阳柳子星王颖张惠珍王树军葛海良
- 关键词：大鼠软骨细胞真核表达
- 人胚胎干细胞饲养层培养体系的建立被引量：2
- 2005年
- 目的建立人胚胎干细胞饲养层培养体系。方法以胎鼠和人胎儿为材料,以DMEM加15%FBS加0.1mM2ME为基础培养液,分别制备胎鼠和胎儿成纤维细胞饲养层。结果分别获得了传16代的胎鼠成纤维细胞和传7代的人胎儿成纤维细胞,建立了人胚胎干细胞饲养层的培养体系。结论胎鼠成纤维细胞和人胎儿成纤维细胞相比较,后者生长速度慢,且较易老化;胎鼠成纤维细胞饲养层更有利于人胚胎干细胞的生长;8～14d龄胎鼠最适宜制备人胚胎干细胞饲养层;在室温条件下,以0.2%胰酶加0.04%EDTA为消化液处理原代胎鼠组织块时间以15～20min为宜。
- 苗增民李松窦忠英
- 关键词：人胚胎干细胞饲养层成纤维细胞
- 家兔角膜上皮植片无饲养层构建与自体移植
- 目的采用无饲养层细胞培养体系构建家兔角膜上皮组织,自体移植后观察其对角膜缘干细胞缺失的治疗效果。方法将14只家免制作成角膜缘于细胞缺失的病理模型。用角膜缘组织块或体外分离2～4代的角膜缘干细胞接种到去除上皮的人羊膜基底膜...
- 屈雷杨学义王馨赵明窦忠英
- 关键词：角膜缘干细胞细胞培养自体移植
- 文献传递
- 胚胎干细胞与胚胎生殖细胞被引量：7
- 2002年
- 胚胎干细胞与胚胎生殖细胞同属于胚胎源的多潜能干细胞。胚胎干细胞是从附置前胚胎内细胞团分离而来的,而胚胎生殖细胞来自胎儿原始生殖细胞。二者在现代生命科学的各个领域都有着广阔的应用前景。对胚胎生殖细胞的特性,胚胎干细胞与胚胎生殖细胞的异同以及二者的应用前景作一综述。
- 徐小明杨炜峰窦忠英华进联
- 关键词：胚胎干细胞胚胎生殖细胞多潜能干细胞
- 交锁髓内钉固定长骨骨缺损山羊模型的建立被引量：6
- 2002年
- 为探讨建立大动物长骨骨缺损的标准模型 ,根据羊股骨解剖资料的统计数据 ,研制出适用于大动物长骨骨缺损的交锁髓内钉内固定器械 ,应用于羊股骨骨缺损内固定。通过X片 ,大体标本和组织学观察 ,表明建立的标准模型值得在大动物的长骨骨缺损实验研究中推广运用。
- 祝联徐耀明李伟国蒋宜康崔磊刘伟曹谊林
- 关键词：骨缺损大动物交锁髓内钉长骨
- 骨髓基质干细胞-藻酸钙复合物构建骨组织的实验研究被引量：5
- 2003年
- 目的研究犬骨髓基质干细胞 (BMSCs)体外成骨活性和在犬体内异位成骨能力 ,探讨其作为骨组织工程种子细胞的可能性。 方法抽取成年犬骨髓 ,梯度离心法获取单个核细胞 ,条件培养液体外培养、诱导、扩增后 ,进行组织化学、免疫细胞化学染色 ,透射电镜下观察其成骨活性。将培养的第 3代细胞与藻酸钙所形成的复合物植于犬皮下 ,3月后行组织学检测。 结果体外培养的BMSCsVonKossa染色可见钙结节 ,AKP染色及I型胶原、Osf2 /Cbfα1、骨钙素免疫细胞化学染色先后呈现阳性 ;透射电镜下见基质钙化 ;组织学检测提示细胞 -藻酸钙复合物体内培养 3月后形成骨样组织。 结论BMSCs在大量扩增的同时 ,在一定条件下能向成骨细胞分化 ,细胞与藻酸钙复合物能在具免疫力的哺乳动物皮下形成骨样组织。
- 王敏翁雨来胡晓洁刘伟冯希平曹谊林
- 关键词：骨组织工程种子细胞骨髓基质干细胞成骨细胞藻酸钙
- FasL^+组织工程化猪软骨细胞的同种异体移植被引量：1
- 2007年
- 目的:探讨表达FasL的猪组织工程化软骨细胞在同种异体内的生长状况和免疫排斥反应。方法:实验于2002-09/2004-03在上海交通大学医学院,上海市免疫学研究所进行。①分离制备猪软骨细胞。②制备FasL+软骨细胞,构建重组pGCEN-FasL反转录病毒载体,转染PA317细胞。经G418筛选获得分泌pGCEN-FasL病毒颗粒的PA317细胞克隆,选择高滴度的病毒液,感染猪软骨细胞。再经过G418筛选获得FasL+的软骨细胞克隆,扩增培养。③FACS检测FasL的表达,应用JAM试验测定FasL+的软骨细胞诱导Fas+的Jurkat细胞及活化的T细胞的凋亡率。同时制备转染pGCEN反转录病毒空载体的软骨细胞为对照。④取FasL+的软骨细胞与可注射性生物材料PluronicF127混合,注射于同种异体猪的腹壁皮下。在第4,5周取材,通过组织病理和免疫组织化学等方法,检测软骨细胞生长和免疫排斥反应。结果:①经转染的软骨细胞表面FasL的表达率为57%。②FasL+的软骨细胞具有明显诱导Fas+细胞和活化的同种异体T细胞的凋亡,最大的凋亡率分别为53.41%,30.38%(效/靶=10∶1),对照组分别为32.27%,13.16%(效/靶=10∶1)。③组织工程化猪软骨结节的结构与正常软骨组织基本一致,可见清晰的软骨凹陷和软骨膜,仅细胞排列较正常软骨略显混乱、不均匀现象。④免疫组织化学染色显示FasL+的组织工程化猪软骨结节的Ⅱ型胶原蛋白分布均匀,形状清楚,与正常软骨比较基本一致。⑤第5周的软骨细胞表面的FasL分子表达明显,周围的炎性细胞浸润相对较少。而对照组的软骨细胞周围可见到大量浸润的炎性细胞。结论:成功构建FasL+软骨细胞并有效表达,抑制免疫排斥反应,为建立同种异体软骨细胞移植的免疫耐受提供了实验依据。
- 王树军张惠珍王颖金姝丁永霞葛瑜沈天伟葛海良
- 关键词：软骨细胞
- 体外快速构建角膜内皮的初步研究
- 2009年
- 用培养的角膜内皮细胞在羊膜和去除Descemet膜的角膜基质体外快速构建角膜内皮组织。分离家兔角膜内皮细胞并传代,将2~4代的角膜内皮细胞以1×105~5×105/mL的浓度接种到去上皮的人羊膜和去除Descemet膜的兔角膜基质上,体外快速构建角膜内皮层。角膜内皮细胞在羊膜和去除Descemet膜的角膜基质上培养48 h,细胞就可形成与在体角膜内皮类似的单层角膜内皮组织,并发现角膜基质透明度随着内皮细胞的增殖而逐渐增加的过程。以1×105~5×105/mL的浓度接种到去上皮的人羊膜和去除Descemet膜的兔角膜基质上,48 h可构建与在体角膜内皮类似的单层内皮组织。
- 屈雷敬晓棋杨学义闫海龙窦忠英
- 关键词：角膜内皮细胞体外构建
- 疼痛记录单的设计与临床应用被引量：23
- 2002年
- 目的 设计术后疼痛护理记录单和慢性疼痛护理记录单并用于临床 ,为有效地开展临床疼痛管理工作打下基础。方法 设计术后疼痛记录单和慢性疼痛记录单 ,并试用于 132例术后患者和68例慢性疼痛患者的疼痛评估。结果 疼痛记录单的制定与应用提高了整体护理意识 ,并为有效开展疼痛管理工作打下了基础 ,但在使用过程中必须充分考虑临床工作的实际 ,所选择的评价方法应兼顾科学性与可操作性 ,同时必须对有关护理人员进行系统规范的培训 ,才能确实提高疼痛评估记录的准确性和可信度。结论 在临床工作中应采用简单易行的评估工具和记录表格来准确评估和记录患者的疼痛情况 。
- 赵继军庹炎王晓英
- 关键词：慢性疼痛记录单疼痛评估术后疼痛
- 骨髓基质细胞与玻璃陶瓷复合培养体内成骨的实验研究被引量：4
- 2000年
- 目的 观察骨髓基质细胞（BMSC）与钙磷陶瓷（BGC）复合后形成骨组织的生物学机制，为形成组织工程化新生骨组织提供理论依据。方法 将BMSC与BGC复合植入动物体内后进行大体观察、组织学染色，观察其成骨过程。结果 一定浓度的BMSC与BGC复合植入动物体内可产生成熟新生骨组织，其成骨过程与局部血运、材料孔隙、孔径有关。结论 利用组织工程学方法可以形成新生骨组织，为进一步研究组织工程化新生组织的体内移植手段和方法提供了新的思路和可能。
- 金丹裴国献王前
- 关键词：骨髓基质细胞玻璃陶瓷骨缺损
