国家自然科学基金(30672290)
- 作品数：5 被引量：3H指数：1
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- TGF-β1对大鼠高危角膜移植免疫排斥反应中植片IL-10表达的影响被引量：1
- 2009年
- 目的研究重组腺相关病毒介导的转化生长因子-β1(recombinant adeno-associat-ed virus mediated transforming growth factor-β1,rAAV-TGF-β1)对大鼠高危角膜移植免疫排斥反应的抑制作用以及对白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)表达的影响。方法构建rAAV-TGF-β1真核表达质粒载体。40只角膜新生血管化的SD大鼠行穿透性角膜移植术。实验组(20只):角膜植片预浸泡在rAAV-TGF-β1(10×1012v.g.L-1)的达尔伯克必需基本培养液F12混合培养液中37℃孵育30min;对照组(20只):角膜植片预浸泡在0.1mol.L-1磷酸盐缓冲液中37℃孵育30min。裂隙灯观察TGF-β1对大鼠角膜植片存活时间、排斥反应指数的影响。术后第1周、第2周、第4周、第2个月对角膜植片行组织病理学检查,免疫组织化学方法检测角膜组织中IL-10的表达。结果对照组角膜植片平均存活时间为(10.40±2.45)d,实验组为(18.70±1.51)d,比对照组显著延长,差异具有显著统计学意义(P<0.01);术后第2周实验组角膜植片排斥反应指数(3.48±0.86)明显低于对照组(7.65±0.42),差异具有显著统计学意义(P<0.01)。IL-10在术后主要表达于角膜的上皮层与内皮层。术后各时期实验组IL-10的表达明显高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论rAAV-TGF-β1能显著延长角膜植片存活时间,抑制大鼠高危角膜移植免疫排斥反应,其机制与提高角膜组织中IL-10的表达有关。重组腺相关病毒是眼科基因治疗的有效载体。
- 黄晓莉周炼红艾明朱祥祥邢怡桥谭锦泉
- 关键词：重组腺相关病毒高危角膜移植免疫排斥反应
- TGF-β_1基因在高危角膜移植术后对移植排斥反应的作用
- 2009年
- 目的研究高危角膜移植术后，重组腺相关病毒（rAAV）携载的TGF—β1基因（rAAV—TGF—β1）在角膜中的表达及对免疫排斥反应的影响。方法用碱烧伤的方法建立受体角膜新生血管（CNV）化模型。20只Wistar大鼠角膜为供体，40只SD大鼠为受体进行大鼠穿透角膜移植。治疗组术前将20只供体植片置于含rAAV—TGF-β1的DMEM／F12混合培养液中常温培养30min，对照组术前将20只供体植片置于DMEM／F12培养液中常温培养30min，术后裂隙灯下观察植片排斥反应及存活情况。免疫组织化学染色观察2组术后1、2、4周TGF—β1在角膜中的表达。Western blot检测2组术后1、2、4、8周TGF—β1的表达量。结果治疗组角膜平均存活时间为（17．60±2．31）d，对照组为（9．27±1．50）d，治疗组角膜植片混浊及血管化程度明显低于对照组（P〈0．01）。免疫组织化学染色显示治疗组术后1周TGF-v在角膜上皮呈弱阳性表达，术后2～4周角膜上皮及内皮细胞层呈阳性表达并高于对照组。对照组术后1～4周TGF—β1在角膜上皮及基底膜呈弱阳性表达。Western blot检测显示术后1周2组角膜TGF—β1含量差异无统计学意义（P〉0．05），术后2、4、8周治疗组角膜TGF—β1的表达较对照组增高（P〉0．05）。结论rAAV-TGF—β1能减轻高危角膜移植的排斥反应。
- 周炼红朱祥祥邢怡桥谭锦泉王炯
- 关键词：腺相关病毒转化生长因子高危角膜移植
- TGF-β_1对大鼠高危角膜移植排斥反应及超微结构的影响被引量：2
- 2010年
- 目的探讨重组腺相关病毒介导的转化生长因子-β1(recombinant adeno-associated virus mediated transforming growth factor-β,rAAV-TGF-β)抑制大鼠高危角膜移植术后免疫排斥反应的作用及对植片超微结构的影响。方法构建rAAV-TGF-β真核表达质粒载体。碱烧伤的方法建立角膜新生血管化动物模型,52只角膜新生血管化的SD大鼠接受穿透性角膜移植手术,分为2组,实验组(26只)Wistar大鼠角膜植片浸泡在含rAAV-TGF-β1(10×1012v.g..L-1)的DMEM/F12培养液中,37℃孵育30min,移植到SD大鼠角膜植床上;对照组(26只)Wistar大鼠角膜植片浸泡在DMEM/F12培养液中,37℃孵育30min,移植到SD大鼠角膜植床上。术后裂隙灯显微镜观察植片排斥情况,比较2组角膜植片的平均存活时间和各时间点排斥反应指数。术后9d、14d角膜植片行超微结构检查,免疫组织化学方法检测角膜组织中IFN-γ、TGF-β1的表达。结果对照组角膜植片平均存活时间为(10.75±1.91)d,实验组为(22.85±3.48)d,2组比较差异有显著统计学意义(P<0.01);实验组术后各时间点角膜植片排斥反应指数均明显低于对照组,差异均有显著统计学意义(均为P<0.01)。术后9d、14d角膜植片超微结构检查显示,实验组角膜植片基质层成纤维细胞凋亡与坏死明显减轻;免疫组织化学分析显示,实验组植片内IFN-γ表达低于对照组,TGF-β1表达高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05或0.01)。结论rAAV-TGF-β1能显著延长角膜植片存活时间,抑制大鼠高危角膜移植免疫排斥反应,改变植片的超微结构。
- 王炯周炼红邢怡桥谭锦泉黄晓丽吴丽
- 关键词：重组腺相关病毒高危角膜移植免疫排斥反应超微结构干扰素-Γ
- 重组腺相关病毒介导的血管内皮生长因子反义核苷酸对糖尿病视网膜病变的影响
- 2008年
- 目的 观察重组腺相关病毒（rAAV）介导的血管内皮生长因子（VEGF）反义核苷酸（rAAV-aVEGF 165）对糖尿病大鼠视网膜VEGF表达的影响。方法 40只Sprague-Dawley大鼠用链尿佐菌素（STZ）腹腔注射诱导糖尿病大鼠模型。去除实验中途死亡和血糖恢复的大鼠，共计32只大鼠纳入研究，随机平均分为实验组和对照组,每组各16只。实验组和对照组大鼠玻璃体腔分别注射rAAV-aVEGF165（10^10 pfu/ml）、磷酸盐缓冲液各10 μl，建模后1、5个月免疫组织化学及Western blot评价视网膜VEGF的表达，并对视网膜血管进行透射电子显微镜观察。结果 1个月时，实验组和对照组大鼠视网膜VEGF表达极低；5个月时，实验组大鼠视网膜VEGF表达较同期对照组降低，差异有统计学意义（t=23.87, P＜0.01）。透射电子显微镜观察显示，实验组视网膜未见明显异常改变，而对照组视网膜微血管腔明显狭窄，基底膜明显增厚，密度不均，并出现断裂，内皮细胞明显肿胀，突起增多，管腔明显狭窄，周细胞内细胞器结构模糊，细胞核固缩，呈凋亡状态，异染色质明显分布不均，浓集。结论 rAAV-aVEGF165能下调视网膜VEGF的表达，从而阻止糖尿病视网膜病变的发生、发展；rAAV是眼反义基因治疗的有效载体。
- 周炼红陈剑朱祥祥陈希邢怡桥巩丽清
- 关键词：基因疗法血管内皮生长因子A核苷酸类
- 绿色荧光蛋白在大鼠角膜移植术后植片中的表达
- 2009年
- 目的研究穿透角膜移植术(PKP)后重组腺相关病毒(rAAV)载体介导的绿色荧光蛋白(GFP)在大鼠植片中的转染及表达情况。方法建立32只大鼠穿透角膜移植的动物模型,SD大鼠作为受体,Wistar大鼠作为供体,供体植片置于含1010μg/mL(病毒基因组数/mL)rAAV-GFP的DMEM/F121:1混合培养液中培养30min。按照不同的观察时间点用抽签法将角膜移植术后的大鼠随机分成4组,每组8只。手术后隔日在裂隙灯显微镜下观察角膜植片的存活情况。于角膜移植术后1、2、4、12周取各组眼球在共焦显微镜下观察角膜组织中GFP的表达情况,Infinity-capt软件测量角膜植片内皮层中荧光的表达强度。结果各组中选取的受体角膜植片无水肿、混浊、新生血管及其他并发症发生。GFP基因表达阳性的角膜内皮细胞呈绿色荧光。各组角膜内皮细胞绿色荧光强度与背景亮度比值,A组:91.83±10.83;B组:128.67±4.32;C组:117.33±3.01;D组:118.50±3.02,转染后1周即有明显表达,4周及12周组较1周组强(P<0.01),2周组强度最高(P<0.01)。结论通过共培养的方法,rAAV-GFP能够有效地转染到角膜内皮细胞中。PKP后GFP基因能够持续、高效、稳定地在移植片的角膜内皮细胞中表达。
- 周炼红朱祥祥邢怡桥陈希
- 关键词：重组腺相关病毒绿色荧光蛋白穿透角膜移植
