上海市卫生局科研基金(054028)
- 作品数：4 被引量：6H指数：1
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- 中国人群Kell血型K阳性的分子特征及分型试剂盒的研制和应用被引量：5
- 2008年
- 目的了解中国人群Kell血型中K+型的分子生物学特征,并研制序列特异性引物-聚合酶链(PCR-SSP)试剂盒,为制订血型检测策略提供依据。方法测序分析血清学鉴定K+标本,确定K+突变类型,根据突变类型分别设计K、k基因型的特异性引物,研制PCR-SSP扩增试剂盒,同时分析100名上海地区献血者、23名外籍献血者、72名新疆地区维吾尔族献血人群的K/k基因型,并随机抽取阳、阴性标本进行测序。结果血清学鉴定为K+的突变类型为C698T突变;经研制的K/kPCR-SSP试剂盒可以特异性扩增K基因和k基因。1例新疆标本基因型为K+k+;3例外籍献血者标本基因型为K+k+,其余均为K-k+。结论本研究中所有中国人K+的分子生物学特征与西方人一致,经研制的PCR-SSP试剂盒可直观有效地检测KELK/k基因型。不同种族、不同地区献血者K+频率的差异有显著性,制订相关检测法规或条例时应有所考虑,建议外国人献血、产前检查时加做K+检测。
- 王玲玲杨颖朱自严
- 关键词：血型检测K+K+
- 中国人群KEL等位基因2例新突变的检出
- 2007年
- 目的研究中国人群中KEL基因多态性。方法用聚合酶链反应-限制性酶切片段-单链构象多态性分析(PCR-RF-SSCP)合并异源二聚体分析,筛选找出具有不同格局的样本并对其测序,找出突变位点。结果在500份随机的中国人群样本中,发现2份样本格局与正常格局不同,测序显示其核苷酸发生了突变,分别是KEL基因外显子9上1086G>A和内含子7的第67位C>A点突变,外显子9上碱基突变是同义突变。结论在中国人群中检出2例新突变的KEL基因。
- 张玉娴杨颖朱自严
- 关键词：异源二聚体
- PCR-限制性酶切片段-单链构象多态合并异源二聚体分析中国人群的Kell血型系统
- 2007年
- 目的分析中国人群的Keu血型系统的多态性，寻找合适的筛选方法。方法建立聚合酶链反应-限制性酶切片段-单链构象多态性方法（polymerase chain reaction-restriction fragment-single strand conformation polymorphism，PCR-RF-SSCP）合并异源二聚体分析，筛选找出KEL基因第7～9外显子区域中具有不同格局的样品，并对其测序，找出突变位点。结果500份标本中发现两个突变，分别是KEL基因第9外显子上966G〉A和第7内含子的第67位C〉A点突变，但没有涉及氨基酸序列的变化；突变率为4／1000；没有发现PCR-RF-SSCP合并异源二聚体分析有漏检情况。结论PCR-RF-SSCP合并异源二聚体分析可以作为有效的经济简便的筛选方法，适用于基因背景不明了、没有阳性对照品的群体。中国人群的Keu血型系统有自己的特征，多态性有别于其他民族，值得进一步研究。
- 杨颖张玉娴郭忠慧朱自严
- 关键词：异源二聚体
- 红、白系细胞具有不同形式的KEL基因mRNA转录本被引量：1
- 2008年
- 目的了解不同细胞KEL基因转录本的差异。方法分别抽取K阴性、K阳性、K0的DNA、红系细胞RNA和总RNA，应用逆转录PCR、巢式PCR分别扩增、测序及克隆测序分析KEL基因第1-19外显子以及第2～8外显子。同时，4种单抗标记后流式细胞术检测红、白细胞上的Kell蛋白表达情况。结果红系RNA均为忠实于基因组序列的正常KEL转录本，而K产生4种不同的转录本。但总RNA作模板时，可以发现不同个体产生不同的转录本，以正常、缺失第3外显子、第7外显子之前插入16bp内含子的转录本为最常见，这些异常拼接也见于K0的红系RNA；总RNA第1～19外显子扩增片段虽然电泳条带只有一条，但测序显示为多种序列的混合。流式细胞技术检测证实K0红细胞上无Kell抗原的表达，其余个体的红细胞均有Kell抗原的强表达，但其白细胞上有不同程度Kell抗原的弱表达或无表达。结论KEL基因在不同细胞中存在不同的转录本，可能导致Kell抗原在红、白细胞上有表达或无或弱表达。证实了KEL基因的表达转录研究中红系mRNA比总RNA更可靠。
- 王玲玲杨颖王晨张嘉敏郭忠慧李勤陈和平朱自严
- 关键词：网织红细胞巢式PCR流式细胞技术
