国家自然科学基金(31171633)
- 作品数：3 被引量：6H指数：1
- 相关作者：郑穗平刘端玉韩双艳林影韦斌如更多>>
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- 棘孢曲霉β-葡萄糖苷酶Ⅰ在毕赤酵母中的表达及烷基糖苷的催化合成被引量：5
- 2012年
- 将来自棘孢曲霉(Aspergillus aculeatus NO.F-50)的β-葡萄糖苷酶Ⅰ在毕赤酵母中分泌表达.初步研究表明,目的蛋白得到较好表达,以对硝基酚-β-D-葡萄糖苷(4-Nitrophenyl-β-D-glucopyranoside,pNPG)为底物,重组β-葡萄糖苷酶Ⅰ酶促反应的最适温度为65℃,最适pH为5.0,50℃下反应发酵上清液中的酶活力可达33.8 U/mL,蛋白表达量最高可达0.388 mg/mL.该重组酶可通过逆水解或转糖苷反应催化合成烷基糖苷.在有机-水双相反应体系中,初步优化了pH值、含水量、葡萄糖浓度及酶量等条件.结果表明,在优化的反应条件下,丁基、己基、辛基和癸基葡萄糖苷最大产率分别为51.4%,28.8%,6.9%和3.0%.
- 韦斌如刘端玉韩双艳林影郑穗平
- 关键词：棘孢曲霉Β-葡萄糖苷酶毕赤酵母分泌表达烷基糖苷
- 毕赤酵母表面展示棘孢曲霉β-葡萄糖苷酶催化合成APG的工艺条件优化被引量：1
- 2014年
- 使用毕赤酵母细胞表面展示棘孢曲霉的β-葡萄糖苷酶作为全细胞催化剂,以葡萄糖为底物,在水-醇双相体系中逆水解合成C6-C10烷基糖苷。讨论了含水量、葡萄糖添加量、全细胞催化剂添加量、乙酸-乙酸钠缓冲液pH值和温度等主要因素对反应的影响,并与商品酶苦杏仁β-葡萄糖苷酶、Novozym188进行比较。结果表明,Novozym188不适合逆水解合成APG,苦杏仁β-葡萄糖苷酶反应所需时间短,但最终转化率不如全细胞催化剂。在5 mL反应体系中,合成HG的最优条件:葡萄糖0.1 g,全细胞催化剂0.05 g,10%pH 3.0 buffer;合成OG的最优条件:葡萄糖0.2 g,全细胞催化剂0.05 g,15%pH3.0 buffer;合成DG的最优条件:葡萄糖0.2 g,全细胞催化剂0.2 g,20%pH 3.0 buffer;放置55℃200 r/min恒温振荡器中,反应时间为72 h,HG和DG的最大产率分别为11.69%和3.58%,而OG的产率则在96 h到达最大值6.34%。
- 胡霞艳刘端玉郑穗平
- 关键词：细胞表面展示Β-葡萄糖苷酶烷基糖苷
- 棘孢曲霉β-葡萄糖苷酶I的毕赤酵母多拷贝体系构建及其在高密度发酵中的表达被引量：1
- 2014年
- β-葡萄糖苷酶目前广泛应用于合成烷基糖苷、芳基糖苷和辅助纤维素酶水解纤维素。本研究将来自棘孢曲霉(Aspergilus aculeatus)的β-葡萄糖苷酶I(ABGL)在毕赤酵母中通过构建多拷贝表达盒的方法实现高效表达,利用同尾酶Bgl II/BamH I反复酶切和用DNA连接酶连接的方法,成功构建了含多拷贝表达盒5’AOX-ABGL-TT的pHKA-(ABGL)3的分泌重组质粒,并线性化重组质粒转化毕赤酵母GS115,经过七叶苷显色筛选平板筛选获得高表达的GS115/pHKA-(ABGL)3菌株,且在50升发酵罐实现高密度发酵表达。研究表明,以pNPG为水解底物,在甲醇诱导120 h时摇瓶发酵液上清酶活可达83.15 U/mL,较之前报道的酶活提高了3.35倍;同时在50 L发酵罐实现高密度发酵,在甲醇诱导120 h时发酵罐上清酶活可达979 U/mL,较对照菌株的发酵罐上清液酶活提高2.94倍,且总蛋白表达量可以达到12 g/L。
- 陈文勇胡霞艳康雅君郑穗平
- 关键词：Β-葡萄糖苷酶毕赤酵母分泌表达高密度发酵
