上海市卫生局科研基金(2010138)
- 作品数：3 被引量：5H指数：1
- 相关作者：孙其志张颖张竞袁文王良哲更多>>
- 相关机构：第二军医大学上海交通大学医学院附属新华医院中国人民解放军第88医院更多>>
- 发文基金：上海市卫生局科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 伴肌动蛋白相关锚定蛋白(N-RAP)在颈椎后纵韧带骨化中的表达及意义被引量：4
- 2013年
- 目的：从蛋白质及核酸水平研究伴肌动蛋白相关锚定蛋白（N—RAP）在颈椎后纵韧带骨化中的表达．探讨其存在的临床意义。方法：选择2006～2010年间行手术治疗的20例颈椎后纵韧带骨化症患者（OPLL组）及10例因外伤行颈椎手术患者（对照组）的颈椎后纵韧带标本。所有标本福尔马林固定、石蜡包埋，以N—RAP兔抗人多克隆抗体作为I抗免疫组化SP法制片，DAB显色。选择染色满意的标本切片，观察表达N—RAP的细胞（棕黄染色）在两组样本中的数量及分布特点。5例骨化样本及5例对照样本冰浴匀浆、提取总RNA，行实时定量PCR检测。观测后纵韧带骨化症患者及对照病例后纵韧带组织中N—RAPmRNA的表达情况。结果：20例骨化韧带标本中，16例染色满意：10例对照组后纵韧带标本中，6例染色满意。免疫组化结果显示N—RAP表达于韧带组织中细胞的胞浆中，呈棕黄色染色。在OPLL组的后纵韧带组织中，可见多个黄染细胞及少量蓝色无N—RAP表达的细胞。而在对照组后纵韧带中，仅可见蓝色无N—RAP表达的细胞。实时定量PCR检测发现N—RAP在对照组标本中平均表达量为14．29±4．70，在OPLL组标本中为161．29±60．14，两组间差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：颈椎OPLL韧带组织中存在较高水平的N—RAP，其可能参与了韧带骨化的发生、发展过程。
- 张竞张颖王良哲孙其志袁文
- 关键词：后纵韧带骨化症实时定量PCR
- 伴肌动蛋白相关锚定蛋白特异性siRNA筛选及效能评价被引量：1
- 2013年
- 目的设计、合成人伴肌动蛋白相关锚定蛋白(Nebulin related anchoring protein,NRAP)的特异性siRNA,转染人成纤维细胞筛选最佳干扰序列。方法设计并合成4条针对NRAP的siRNA,以不同浓度转染人成纤维细胞。通过Westernblot、RT-PCR法检测其对NRAPmRNA及蛋白表达的抑制效果。结果siRNA50mol/L及Lipofectamine2000 1 l有较高的转染效率。4种siRNA干扰成纤维细胞24小时后,NRAP的mRNA及蛋白表达量均有显著下降,其中siRNA47抑制效果最为显著。结论成功筛选出可有效抑制成纤维细胞NRAP表达的siRNA,为观察阻断NRAP表达后应力诱导OPLL细胞成骨的变化奠定了基础。
- 张竞张颖王良哲孙其志袁文
- 关键词：后纵韧带骨化症小干扰核糖核酸
- 外源性Ⅵ型胶原对人后纵韧带细胞增殖和成骨转化的影响
- 2014年
- 目的观察外源性VI型胶原蛋白（collagenVI,CⅥ）对人后纵韧带细胞增殖和成骨转化的影响.方法取颈椎后纵韧带骨化症（ossificationoftheposteriorlongitudinalligament,OPLL）患者手术切除的后纵韧带未骨化部分和非OPLL患者因外伤手术切除的正常后纵韧带,原代培养至第3代细胞,分别记作O细胞和N细胞;两种细胞均采用0、6.25、12.5、25、50、100g/mlCⅥ刺激;CCK8法测定刺激后两种细胞1～7天光密度（D）值,评价CⅥ对细胞增殖的影响;骨形态生成蛋白-2（BMP-2）对不同浓度CⅥ刺激的细胞进行诱导骨化,用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测各组细胞成骨细胞转录因子-2（RunX2）、碱性磷酸酶（ALP）、骨钙素（OC）的基因表达情况.结果CⅥ对两种细胞的增殖均起促进作用,且随着CⅥ浓度增加,其对细胞增殖的促进作用随之增强,但达到一定浓度后这种作用会保持不变或减弱,同一时间点内50g/mlCⅥ刺激时两种细胞的D值最大;BMP-2诱导后的两组细胞有CⅥ刺激的ALP、RunX2和OC的基因表达均高于无CⅥ刺激的对照组（P〈0.05）;在无CⅥ刺激的情况下,O细胞的基因表达高于N细胞（P〈0.05）.结论CⅥ能够促进人后纵韧带细胞的增殖和成骨转化,而来自后纵韧带骨化患者的细胞则更易被促进增殖和诱导骨化,CⅥ可能具有促进后纵韧带细胞成骨的功能.
- 孙其志张竞
- 关键词：后纵韧带骨化症细胞增殖成骨转化
