国家自然科学基金(31360602)
- 作品数：7 被引量：10H指数：2
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- 相关领域：生物学农业科学化学工程更多>>
- 牛白介素10的克隆、测序及其在CHO细胞的表达被引量：1
- 2014年
- 用RT-PCR方法从健康牛外周血淋巴细胞中扩增出牛白介素10(bIL-10)基因并进行测序,发现其核苷酸序列全长为537bp,编码179氨基酸,具有很好的遗传保守性。将该基因克隆到表达载体pcDNA3.1/V5-His Vectors A中,构建真核表达重组质粒pcDNA3.1/V5-His A/IL-10,将该质粒转染到CHO细胞中,采用SDS-PAGE和Western blot方法检测培养物上清和沉淀物中bIL-10的表达,结果表达的bIL-10大小约为20ku。本试验为bIL-10生物学特性及其基因多态性的研究奠定了基础。
- 敖敦格日勒温德宝百溪英一格日勒图
- 关键词：克隆测序真核表达
- 2种不同方法纯化乳酸杆菌重组S-层融合蛋白的比较试验
- 2014年
- 将重组菌E.coli BL21(含重组质粒pGEX-SLP)经IPTG诱导获得重组融合蛋白GST-SLP,分别用非特异性的氯化锂沉淀方法和特异性的Pierce GST Spin Purification Kit纯化方法,将该融合蛋白进行纯化,纯化结果采用SDS-PAGE方法进行鉴定。结果显示,2种方法均能够获得大小约为71 ku的目的融合蛋白,但氯化锂沉淀方法纯化效果不及Pierce GST Spin Purification Kit方法。该研究结果为进一步研究乳酸杆菌S-层蛋白生物学特性提供了参考。
- 小琴特尼格尔赵慧格日勒图
- 关键词：重组菌E.COLIBL21融合蛋白纯化
- 多型FMDV VP1表位嵌入型载体pMG-SLPMultiVP1的构建及其表达产物鉴定被引量：1
- 2016年
- 构建出表达载体pMG-SLPMultiVP1,并对其进行双酶切鉴定及PCR鉴定。将阳性重组质粒转入到发酵乳杆菌中进行表达,并对表达产物进行SDS-PAGE、Western blot和IFAT鉴定。多型FMDV VP1表位嵌入的SLPMultiVP1融合基因成功克隆入穿梭质粒pMG36e中,其表达产物大小约为35ku,部分表达产物位于发酵乳杆菌表面。成功构建了一个乳杆菌嵌入型表达载体pMG-SLPMultiVP1,为以发酵乳杆菌为活菌载体的表位疫苗研究奠定了基础。
- 陆继爽黄天鹏吴咪贺海燕格日勒图
- 关键词：S-层蛋白发酵乳杆菌表位疫苗
- PEDV S基因的B细胞表位嵌入型乳杆菌S-层蛋白的原核表达及其鉴定被引量：1
- 2019年
- 利用生物软件和在线数据库中筛选出猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)S基因的B细胞表位,通过overlap PCR方法将其嵌入到嗜酸性乳杆菌的S-层蛋白基因中,获得融合基因SLP-EpitopeS。将该融合基因导入到原核表达载体pGEX-4T-3中,成功构建了原核表达载体pGEX-SLP-EpitopeS。经过双酶切和PCR方法以及基因测序方法验证融合表达载体pGEX-SLP-EpitopeS的正确性。应用SDS-PAGE和Western blot方法鉴定表达产物,其中SDS-PAGE结果显示:融合蛋白质的大小约为77000,与理论值相符;Western blot结果显示:融合蛋白SLP-EpitopeS被GST血清所识别,而B细胞表位分别被表位特异的鼠源单克隆抗体(McAb)和表位合成多肽所识别。本试验为进一步嵌入型蛋白SLP-EpitopeS的免疫原性研究奠定了基础。
- 朝木丽格侯殿文韩佳黄天鹏吴咪贺海燕格日勒图
- 关键词：猪流行性腹泻病毒S基因B细胞表位原核表达
- 多型FMDV VP1表位融合蛋白SLP-MultiVP1的纯化及鉴定被引量：4
- 2015年
- 口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)主要感染偶蹄兽引起的烈性传染病。本研究对已构建的含有VP1表位肽基因的原核表达载体pGEX-SLP-MultiVP1进行IPTG诱导表达,经SDS-PAGE试验在菌体裂解物中证明了80 000融合蛋白的存在。通过Pierce?GST Spin Purification Kit亲和层析和切胶相结合的方法,成功纯化出融合蛋白GST-SLP-MultiVP1,并用Prescission Protease将该融合蛋白中的GST标签切掉,获得大小为54 000的目的蛋白SLP-MultiVP1,并用Western Blot试验证明了该蛋白与牛A、O、AsiaⅠ型疫苗株阳性血清均有特异性的结合。本试验进一步为口蹄疫VP1表位肽的免疫原性研究奠定了基础。
- 特尼格尔赵慧小琴陆继爽黄天鹏格日勒图
- 关键词：口蹄疫融合蛋白纯化
- 各型FMDV VP1基因表位嵌入型蛋白SLP-MultiVP1对免疫不同小鼠血清IgG亚型的影响被引量：1
- 2017年
- 利用通过Swiss-Model在线软件分析所得的乳杆菌S-层蛋白高级结构3D模拟图,应用Swiss-Pbd Viewer软件对嵌入型蛋白SLP-MultiVP1中的3型口蹄疫病毒(FMDV)不同表位位点进行标注,并用嵌入型蛋白SLP-MultiVP1和重组蛋白SLP分别免疫6周龄的BALB/c和昆明小鼠,分离3次免疫后的血清,用Mouse IgG1Ready-SET-Go和Mouse IgG2aReady-SET-Go ELISA试剂盒检测血清中IgG抗体亚型IgG1和IgG2a。通过SPSS统计学分析发现:嵌入型蛋白SLP-MultiVP1组IgG1和IgG2a水平显著高于SLP组(P<0.05),其中嵌入型蛋白SLP-MultiVP1免疫组的IgG2a显著高于IgG1(P<0.05),但是BALB/c和昆明小鼠之间无显著性差异(P>0.05)。该结果提示,嵌入型蛋白SLP-MultiVP1可能倾向于激发Th1类细胞介导的免疫应答,而且无个体差异。
- 赵慧特尼格尔陆继爽黄天鹏小琴格日勒图
- 关键词：抗体亚型表位疫苗
- 猪流行性腹泻病毒S2基因B细胞表位嵌入型S-层蛋白在副干酪乳杆菌中的表达与鉴定被引量：2
- 2022年
- 【目的】构建新型猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)乳酸菌活菌疫苗载体。【方法】应用DNA重组技术将嗜酸乳杆菌S-层蛋白(SLP)基因及PEDV S2基因B细胞表位(EpitopeS2)融合基因(SLP-EpitopeS2)克隆到乳酸杆菌表达载体pTRK892中,构建重组载体pTRK-SLP-EpitopeS2,通过电转化方法将重组质粒导入副干酪乳杆菌中,获得重组副干酪乳杆菌。分别用SDS-PAGE、Western blotting和免疫荧光试验(IFA)鉴定目的蛋白在副干酪乳杆菌中的表达。【结果】PCR结果显示,成功扩增出大小为1400 bp的目的条带,与插入融合基因大小一致,双酶切结果出现大小分别为1400和4700 bp的2条带,基因测序结果显示无碱基缺失和突变等,从而确定重组质粒pTRK-SLP-EpitopeS2构建正确。SDS-PAGE、Western blotting结果显示,在48 ku处出现与理论值大小一致的目的蛋白条带,表明融合基因SLP-EpitopeS2在副干酪乳杆菌中得到有效表达。IFA结果显示,与对照组副干酪乳杆菌相比,重组副干酪乳杆菌均能被激发出特异性绿色荧光信号,与高浓度氯化锂(LiCl)洗脱下来的菌体膜蛋白样品补充鉴定试验结果相吻合。表明融合蛋白SLP-EpitopeS2可能在副干酪乳杆菌的菌体表面表达。【结论】成功构建了PEDV EpitopeS2及嗜酸乳杆菌SLP嵌入型融合表达载体pTRK-SLP-EpitopeS2,为乳杆菌活菌载体疫苗相关研究奠定了基础。
- 白伟琴卡楚拉乌志勇苗苗塔娜格日勒图
- 关键词：S2基因副干酪乳杆菌
