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首都卫生发展科研专项(2011-5021-02)

作品数：13 被引量：30H指数：3
相关作者：王鲁平葛畅许春伟张玉萍方园更多>>
相关机构：北京军区总医院安徽医科大学中国人民解放军更多>>
发文基金：首都卫生发展科研专项更多>>
相关领域：医药卫生更多>>

文献类型

  • 13篇中文期刊文章

领域

  • 13篇医药卫生

主题

  • 11篇基因
  • 7篇甲基化
  • 6篇直肠
  • 6篇结直肠
  • 6篇病变
  • 5篇脱氧
  • 5篇脱氧胞苷
  • 5篇结直肠锯齿状...
  • 5篇胞苷
  • 5篇HT-29
  • 5篇LOVO
  • 4篇细胞
  • 3篇蛋白
  • 3篇细胞株
  • 3篇基因甲基化
  • 3篇甲基化状态
  • 3篇癌细胞
  • 3篇癌细胞株
  • 3篇5-氮杂-2...
  • 3篇DNA甲基化

机构

  • 9篇北京军区总医...
  • 3篇安徽医科大学
  • 3篇中国人民解放...
  • 1篇山西医学科学...
  • 1篇军事医学科学...

作者

  • 13篇王鲁平
  • 12篇许春伟
  • 12篇葛畅
  • 9篇张玉萍
  • 8篇方园
  • 1篇王琳

传媒

  • 4篇诊断病理学杂...
  • 2篇中国医药导报
  • 1篇中华病理学杂...
  • 1篇贵州医药
  • 1篇基础医学与临...
  • 1篇皖南医学院学...
  • 1篇安徽医药
  • 1篇中华肿瘤防治...
  • 1篇解放军医药杂...

年份

  • 1篇2015
  • 9篇2014
  • 3篇2013
共 13 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
5'-氮杂-2'-脱氧胞苷对HT-29和LoVo结直肠癌细胞株中p16基因甲基化状态、mRNA表达及蛋白表达的影响
2014年
目的探讨甲基化酶抑制剂5'-氮杂-2'-脱氧胞苷(5'-Aza-2'-deoxycytidine,5'-Aza-CdR)对结直肠癌细胞株HT-29和LoVo中p16基因甲基化状态、mRNA及蛋白表达的影响。方法应用Taq Man探针为基础的实时定量PCR法、SYBR Green PCR法及蛋白印迹实验(Western blot)检测不同浓度5'-Aza-CdR处理前后HT-29和Lo Vo细胞中p16基因的甲基化状态、mRNA和蛋白表达。结果 Taq Man探针为基础的实时定量PCR法检测HT-29和Lo Vo细胞中p16蛋白在药物作用后异常甲基化得到逆转;实时荧光定量PCR和Western Blot检测到0.5、1.0、1.5μM 5'-Aza-CdR处理后p16基因mRNA和蛋白均重新表达,具有统计学意义(P均<0.05)。结论结直肠癌细胞株HT-29和Lo Vo中p16启动子甲基化可能是导致该基因表达下调甚至失活的主要原因。5'-Aza-CdR能够较成功的逆转结直肠癌细胞株HT-29和Lo Vo中p16基因的甲基化状态,并能恢复mRNA及蛋白重新表达。
葛畅许春伟王鲁平方园张玉萍
关键词：HT-29P16基因
锯齿状病变组织中Runx3基因的甲基化及蛋白表达被引量：2
2014年
目的探讨Runx3基因启动子区CpG岛甲基化状态和蛋白表达在锯齿状病变发生与癌变通路中的作用及意义。方法用TaqMan探针为基础的实时定量PCR(Methylight)法检测77例锯齿状病变(29例HP、29例SSA/P和19例TSA)、16例正常结直肠组织和14例结直肠癌中Runx3基因CpG岛甲基化状态,同时用免疫组化法检测相应组织中Runx3蛋白的表达;并分析两者之间的关系。结果 Runx3启动子CpG岛甲基化率在正常和HP、SSA/P、TSA、CRC分别为12.5%(2/16)和17.2%(5/29)、51.7%(15/29)、63.2%(12/19)和78.6%(11/14)。Runx3蛋白阳性表达率在正常和HP、SSA/P、TSA、CRC分别为81.3%(13/16)和72.2%(21/29)、48.3%(14/29)、31.6%(6/19)、21.4%(3/14)。SSA/P、TSA和CRC 3组中Runx3甲基化与Runx3蛋白表达结果具有相关性(P<0.05),且为负相关。结论 Runx3基因启动子区域甲基化是诱导Runx3蛋白表达下调或缺失的主要原因,在锯齿状病变尤其是锯齿状腺瘤的发生及癌变通路中起重要作用。
张玉萍王鲁平方园许春伟葛畅
关键词：DNA甲基化免疫组化
5'-氮杂-2'-脱氧胞苷对结直肠癌细胞株HT-29和LoVo中MGMT基因甲基化状态、mRNA表达及蛋白表达的影响被引量：3
2014年
目的探讨甲基化酶抑制剂5'-氮杂-2'-脱氧胞苷(5'-Aza-CdR)对结直肠癌(colorectal cancer,CRC)细胞株HT-29和LoVo中MGMT基因甲基化水平、mRNA及蛋白表达的影响。方法用0.5、1.0、1.5μmol/L浓度的5'-Aza-CdR处理CRC细胞株HT-29和LoVo。应用MethyLight方法、实时荧光定量PCR方法及蛋白印迹试验(Westernblot)检测药物处理前后HT-29和LoVo细胞中MGMT基因的甲基化状态、mRNA和蛋白表达情况。结果 MethyLight检测HT-29和LoVo细胞中MGMT蛋白在药物作用后异常甲基化得到逆转。实时荧光定量PCR检测5'-Aza-CdR浓度为0.5、1.0、1.5μmol/L组HT-29细胞株和LoVo细胞株MGMT基因mRNA表达水平均较对照组上调,Western blot检测5'-Aza-CdR浓度为0.5、1.0、1.5μmol/L组MGMT蛋白表达水平均较对照组上调,且均具有药物剂量依赖性(P<0.05,P<0.01)。结论 CRC细胞株HT-29和LoVo中MGMT基因启动子甲基化可能是导致该基因表达下调甚至失活的主要原因。5'-Aza-CdR能够逆转CRC细胞株HT-29和LoVo中MGMT基因的甲基化状态,并能恢复mRNA及蛋白重新表达。
许春伟葛畅王鲁平方园张玉萍
关键词：MGMT基因
检测锯齿状腺瘤中CDX2基因甲基化率的两种qPCR方法比较被引量：1
2014年
目的应用两种方法检测锯齿状腺瘤中CDX2基因甲基化状态,比较这两种检测方法的差异。方法采用Taqman探针qPCR(MethyLight)和SYBR Green qPCR方法检测129例锯齿状腺瘤(包括61例SSA/P、68例TSA)和42例正常结直肠黏膜组织中CDX2基因CpG岛甲基化状态。结果 MethyLight方法:SSA/P组织中CDX2基因甲基化率(75.41%,46/61)高于对照组(53.38%,22/42),两者差异显著(P<0.05)。TSA组织中CDX2基因甲基化率(80.88%,55/68)高于对照组(53.38%,22/42),两者差异显著(P<0.05)。SYBR Green qPCR方法:SSA/P、TSA组和对照组的组织中CDX2基因均呈高甲基化状态,SSA/P组织中CDX2基因甲基化率(81.97%,50/61)高于对照组(73.81%,31/42),两者比较差异不显著(P>0.05);TSA组织中CDX2基因甲基化率(86.76%,59/68)高于对照组(73.81%,31/42),两者比较差异不显著(P>0.05);结论 MethyLight消除了引物二聚体和非特异性扩增对试验结果的影响,提高了结果的特异性和准确性,被证实是进行异常DNA甲基化状态检测的可靠方法。
许春伟葛畅王鲁平张玉萍
关键词：甲基化
结直肠SSA/P和TSA的临床病理学及免疫组化研究被引量：4
2013年
目的探讨广基锯齿状腺瘤/息肉(SSA/P)和传统锯齿状腺瘤(TSA)的临床病理学、免疫组化特征及癌变通路的意义。方法收集病理诊断为结直肠锯齿状病变的病例共计291例,从中筛选出结直肠锯齿状腺瘤64例(SSA/P 41例,TSA 23例),收集临床相关资料和观察镜下病理学特征,同时进行MGMT、MLH1、β-catenin、p16、CDX2、RUNX3和Ki-67免疫组化染色。选取34例增生性息肉(HP)、24例正常肠组织和28例结直肠癌(CRC)作为对照,其中HP全部为微小泡型。结果 SSA/P和TSA均好发于左侧结肠。组织学显示,SSA/P锯齿状改变腺体紧靠黏膜肌层,基底隐窝呈倒"T"或"L"型分支;TSA腺体可见明显的锯齿状结构、异位隐窝和细胞异型增生,其中纤维绒毛状TSA(FSA)异型增生程度较高。免疫组化:Ki-67、β-catenin、p16和RUNX3表达阳性率,在SSA/P和TSA组与对照组之间比较差异显著(P<0.05);MLH1表达阳性率,在SSA/P与对照组HP和正常之间差异显著(P<0.05),且阳性表达率呈递增趋势,支持广基锯齿状通路学说,提示HP是SSA/P的一种前期病变。结论 SSA/P和TSA是CRC的癌前病变,通过锯齿状通路发生恶变,具有较高恶性潜能,需要与HP加以区别。
张玉萍王鲁平方园
关键词：TSA病理学免疫组化
5'-氮杂-2'-脱氧胞苷对HT-29和LoVo结直肠癌细胞株中Wif-1基因甲基化状态、mRNA表达及蛋白表达的影响被引量：1
2014年
目的探讨甲基化酶抑制剂5'-氮杂-2'-脱氧胞苷(5'-Aza-2'-deoxycytidine,5'-Aza-CdR)对结直肠癌细胞株HT-29和LoVo中Wif-1基因甲基化水平及蛋白表达的影响。方法用不同浓度(0.5、1.0、1.5μmol/L)5'-Aza-CdR处理结直肠癌细胞株HT-29和LoVo。应用TaqMan探针为基础的实时定量PCR(Methylight)方法、SYBR Green PCR方法及蛋白印迹实验(Western blot)检测药物处理前后HT-29和LoVo细胞中Wif-1基因的甲基化状态、mRNA和蛋白表达。结果 Methylight检测HT-29和LoVo细胞中Wif-1蛋白在药物作用后异常甲基化得到逆转;实时荧光定量PCR和Western Blot检测到0.5、1.0、1.5μmol/L 5'-Aza-CdR处理后Wif-1基因mRNA和蛋白重新表达,实时荧光定量PCR检测DMSO对照组和不同浓度5'-Aza-CdR(0.5、1.0、1.5μmol/L)在HT-29细胞株相对表达量分别为(1.000±0.000)、(1.207±0.052)、(1.790±0.033)和(2.016±0.123);在LoVo细胞株相对表达量分别为(1.000±0.000)、(1.294±0.048)、(1.893±0.061)和(2.204±0.041)。Western blot检测Wif-1蛋白检测DMSO对照组和不同浓度5'-Aza-CdR在HT-29细胞株相对表达量分别为(0.456±0.040)、(0.511±0.025)、(0.857±0.031)和(0.934±0.047);LoVo细胞株相对表达量分别为(0.842±0.032)、(0.844±0.044)、(0.854±0.037)和(0.856±0.034)。以上作用均呈时间、剂量依赖性,Wif-1基因mRNA在HT-29细胞株表达和LoVo细胞株表达差异均有高度统计学意义(F=144.823,P=0.000;F=476.195,P=0.000)。Wif-1蛋白表达在HT-29细胞株表达差异有高度统计学意义(F=129.674,P=0.000),但Wif-1蛋白表达在LoVo细胞株表达差异无统计学意义(F=0.117,P=0.948)。结论结直肠癌细胞株HT-29和LoVo中Wif-1启动子甲基化可能是导致该基因表达下调甚至失活的主要原因。5'-Aza-CdR能够较成功地逆转结直肠癌细胞株HT-29和LoVo中Wif-1基因的甲基化状态,并能恢复mRNA及蛋白重新表达。
葛畅许春伟王鲁平方园张玉萍
关键词：HT-29LOVOWIF-1基因
结直肠锯齿状病变h-MLH1基因甲基化状态和蛋白表达意义研究被引量：2
2014年
目的:通过研究结直肠锯齿状病变组织中h-MLH1基因启动子区CpG岛甲基化及蛋白表达,探讨h-MLH1启动子甲基化状态与蛋白表达相关性及在锯齿状癌变通路中的作用,并分析h-MLH1基因在不同年龄层段甲基化程度。方法:收集北京军区总医院病理科2007-01-01-2012-12-31诊断为锯齿状病变标本225例,其中包括96例增生性息肉(hyperplastic polyp,HP)、61例广基(无蒂)锯齿状腺瘤/息肉(sessile serrated adenoma/polyp,SSA/P)和68例传统锯齿状腺瘤(traditional serrated adenoma,TSA);同时收集同院同期的54例管状腺瘤(tubular adenoma,TA)、69例结直肠癌(colorectal cancer,CRC)和42例正常结直肠黏膜组织作为对照。应用Taqman探针qPCR(MethyLight)方法检测各组织中h-MLH1基因CpG岛甲基化状态,同时采用免疫组织化学方法检测其蛋白表达水平,其中随机抽取锯齿状病变116例(HP 52例、SSA/P 41例、TSA 23例)、TA 20例、CRC 24例和正常结直肠黏膜组织24例,并将其甲基化状态与相应的蛋白表达水平及临床病理学资料进行统计学分析。结果:正常、TA、HP、SSA/P、TSA和CRC组织中,h-MLH1基因启动子CpG岛甲基化阳性表达率分别为9.24%(4/42)、40.74%(22/54)、22.92%(22/96)、45.90%(28/61)、61.76%(42/68)和52.17%(36/69)。HP组与正常、SSA/P、TSA及CRC组之间比较,正常组与SSA/P及TSA组之间比较,差异均有统计学意义,P<0.05;其余各组之间比较,差异均无统计学意义,P>0.05。正常、TA、HP、SSA/P、TSA和CRC组织中,h-MLH1蛋白阳性表达率分别为100%(24/24)、80.00%(16/20)、98.08%(51/52)、75.61%(31/41)、69.57%(16/23)和70.83%(17/24)。正常组与HP、SSA/P、TSA、TA、CRC组之间比较,差异均有统计学意义,P<0.05;其余各组之间比较,差异均无统计学意义,P>0.05。TA、SSA/P和TSA组中,h-MLH1基因甲基化与其蛋白表达差异均有统计学意义(P<0.05),且呈负相关,相关系数γ分别为-0.553、-0.497、和-0.473。TA、HP、SSA/P和TSA组中,h-MLH1基因�
葛畅王鲁平许春伟
关键词：结直肠肿瘤DNA甲基化
5'-氮杂-2'-脱氧胞苷对结直肠癌细胞株HT-29和LoVo中MLH-1基因甲基化状态、mRNA及蛋白表达的影响被引量：1
2014年
目的:探讨甲基化酶抑制剂5'-氮杂-2'-脱氧胞苷(5'-Aza-2'-deoxycytidine)对结直肠癌细胞株HT-29和Lo Vo中MLH-1基因甲基化水平、mRNA及蛋白表达的影响。方法:用不同浓度5'-氮杂-2'-脱氧胞苷处理结直肠癌细胞株HT-29和Lo Vo。应用Taq Man探针为基础的实时定量PCR(Methylight)方法、SYBR Green PCR方法及蛋白印迹实验(Western blot)检测药物处理前后HT-29和Lo Vo细胞中MLH-1基因的甲基化状态、mRNA和蛋白表达。结果:Methylight检测HT-29细胞株中MLH-1蛋白在药物作用后异常甲基化得到逆转;实时荧光定量PCR和Western Blot检测到0.5、1.0、1.5μmol/L 5'-氮杂-2'-脱氧胞苷处理后MLH-1基因mRNA和蛋白表达上调,实时荧光定量PCR检测对照组和不同浓度实验组在HT-29细胞株相对表达量分别为1.000±0.000、1.171±0.126、1.356±0.085和1.422±0.090;在Lo Vo细胞株相对表达量分别为1.000±0.000、1.117±0.094、1.273±0.062和1.285±0.070。Western blot检测MLH-1蛋白对照组和不同浓度实验组在HT-29细胞株相对表达量分别为0.114±0.033、0.365±0.040、0.831±0.041和0.849±0.051;Lo Vo细胞株相对表达量分别为0.602±0.020、0.621±0.028、0.934±0.029和1.057±0.045。以上作用均呈时间、剂量依赖性,MLH-1基因mRNA在HT-29细胞株表达(F=8.918,P=0.010)和Lo Vo细胞株表达(F=8.351,P=0.011)具有统计学意义。MLH-1蛋白表达在HT-29细胞株表达(F=226.825,P=0.000)和Lo Vo细胞株表达(F=153.642,P=0.000)亦具有统计学意义。结论:结直肠癌细胞株HT-29和Lo Vo中MLH-1启动子甲基化可能是导致该基因表达下调甚至失活的主要原因。5'-氮杂-2'-脱氧胞苷能够较成功的逆转结直肠癌细胞株HT-29和Lo Vo中MLH-1基因的甲基化状态,并能恢复mRNA及蛋白重新表达。
葛畅许春伟王鲁平方园张玉萍
关键词：HT-29LOVO
结直肠锯齿状病变的Wif-1基因甲基化状态及β连环蛋白的表达被引量：2
2014年
目的检测结直肠锯齿状病变中Wif-1基因启动子区甲基化状态及B连环蛋白的表达情况，探讨二者之间以及与结直肠锯齿状病变发生发展的关系。方法收集增生性息肉52例、广基锯齿状腺瘤41例、传统锯齿状腺瘤23例，并取结直肠癌24例和24例正常结直肠黏膜组织作为对照进行B连环蛋白免疫组织化学染色，同时从上述各组中分别抽取增生性息肉29例、广基锯齿状腺瘤29例、传统锯齿状腺瘤19例、结直肠癌14例和正常结直肠黏膜组织16例进行SYBRGreenPCR，检测Wif-1基因启动子区甲基化状态。结果B连环蛋白异常阳性率在正常结直肠黏膜、增生性息肉、广基锯齿状腺瘤、传统锯齿状腺瘤及结直肠癌组中分别为12．5％（3／24）、59．6％（31／52）、63．4％（26／41）、73．9％（17／23）及100．0％（24／24），同时Wif-1基因启动子区甲基化率在以上各组中分别为2／16、10／29（34．5％）、16／29（55．2％）、15／19及13／14（P〈0．05）；传统锯齿状腺瘤中Wif-1基因甲基化与β连环蛋白表达呈正相关（r=0．536，P〈0．05）。结论／3连环蛋白异常阳性率及Wif-1基因启动子区甲基化比例在锯齿状病变中明显升高，Wif-1基因启动子区甲基化可能是引起β连环蛋白异常表达的机制之一，二者通过Wnt／β连环蛋白信号通路异常激活可能参与锯齿状病变的发生发展过程。
方园王鲁平张玉萍葛畅许春伟
关键词：癌前状态Β连环素
MGMT基因甲基化状态在结直肠锯齿状病变中的表达及意义被引量：11
2014年
目的 观察锯齿状病变组织中MGMT基因甲基化状态和MGMT蛋白表达,探讨临床病理意义和在癌变通路中的作用,同时探讨MGMT基因在不同年龄层段甲基化状况.方法 应用Taqman探针qPCR （MethyLight）方法检测北京军区总医院2007～2013年的225例锯齿状病变[包括96例增生性息肉（HP）、61例广基（无蒂）锯齿状腺瘤/息肉（SSA/P）和68例传统型锯齿状腺瘤（TSA）]、54例管状腺瘤（TA）、69例结直肠癌（CRC）和42例正常结直肠黏膜组织中MGMT基因CpG岛甲基化状态,并通过测序法验证扩增的目的片段甲基化状态,同时应用免疫组化方法检测其中116例锯齿状病变（包括52例HP、41例SSA/P、23例TSA）、20例TA、24例CRC和24例正常结直肠黏膜组织中MGMT蛋白的表达情况.结果MGMT基因启动子甲基化状态和MGMT蛋白异常阳性程度在锯齿状病变和对照组中差异均有统计学意义（P＜0.05）,且两者之间呈负相关;MGMT基因启动子甲基化频率在不同年龄层段相关性比较中两者呈正相关,但差异无统计学意义（P＞0.05）.结论组织中MGMT基因甲基化可能诱导其蛋白表达下调的主要原因,在结直肠“增生性息肉-锯齿状腺瘤-癌”的锯齿状癌变通路中起重要作用.
许春伟王鲁平葛畅
关键词：DNA甲基化MGMT基因DNA探针
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