国家自然科学基金(31260211)
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
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- 相关领域：生物学理学更多>>
- 碳水化合物结合组件的点突变研究被引量：1
- 2014年
- 碳水化合物结合组件(carbohydrate-binding module,CBM)是某些碳水化合物活性酶(carbohydrate-active enzymes)上的非催化部分,主要负责与底物特异性结合以提高与之相邻的催化结构域对不可溶底物的催化效率。CBM中的保守芳香族氨基酸通常是这些蛋白的底物结合位点,利用氨基酸定点突变技术可用来寻找和验证CBM中的结合位点的关键氨基酸。本研究的前期工作发现CBM46200与其同家族的其它成员相比对底物结合的能力要弱很多,多重序列比对发现家族中某些保守的芳香族氨基酸在CBM46200被非芳香族氨基酸替代,这可能是CBM46200与底物结合能力弱的原因,探究这些原因对研究前期工作中所鉴定的新家族CBM的广泛特异性具有重要意义。在本研究中利用氨基酸定点突变技术、亲和凝胶电泳技术以及蛋白对不可溶多糖的吸附技术等对前面的推论予以验证。结果表明,CBM46200的定点突变体对多糖底物的结合能力并没有增强,有些甚至还减弱了,这说明这些非芳香族氨基酸在CBM46200中的替代不是造成CBM46200对多糖的结合能力弱于其它家族成员的原因,可能还存在其它的因素影响CBM46200对底物的结合能力,本文对这些可能的因素也做了推测。
- 冯玉亮黄明月王菲曹启龙冯家勋段承杰
- 关键词：定点突变
- 草酸青霉中一个编码锌指蛋白的基因的功能鉴定被引量：1
- 2016年
- 草酸青霉是自然界中常见的产纤维素酶的丝状真菌,其基因组含有多个纤维素酶基因,能够分泌完整的纤维素酶系。真菌纤维素酶基因的表达主要是在转录水平上受到调控。通过对草酸青霉野生菌株HP7-1及其高产纤维素酶突变株EU2106的转录组以及基因组进行分析,获得了一批可能与突变株酶活变高有关的候选基因。HP7A1874是其中的一个候选基因,该基因在EU2106中的表达水平下降了82%。HP7A1874编码一个锌指蛋白,锌指结构域是转录因子所具有的典型结构之一。本研究通过基因敲除获得该基因的缺失突变株△HP7A1874,测定了突变株的纤维素酶和木聚糖酶活性。结果表明,HP7A1874缺失突变株的纤维素酶和木聚糖酶活与野生型菌株相比并无显著差异,说明HP7A1874与草酸青霉纤维素酶基因的表达调控无关。
- 谭艳静李明栋段承杰
- 关键词：纤维素酶转录因子缺失突变株
