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犬2型腺病毒通用载体的构建及鉴定被引量：5: 2007年; 为了获得能够携带较大外源基因的犬2型腺病毒E3区缺失性载体,以犬2型腺病毒全基因组质粒pPolyⅡ-CAV-2及E3区重组质粒pVAX-E3为基础,缺失1381bp的E3区片段(92.6%的E3区全序列),插入Linker-NF(内含NotⅠ、ClaⅠ、FseⅠ多克隆位点),获得重组载体质粒pPolyⅡ-CAV-2-ΔE3(NF)(31.9kb)。以AscⅠ和PmeⅠ双酶切,游离重组基因组,在脂质体LipofectamineTM2000介导下,转染MDCK细胞系,获得了E3区缺失的重组病毒CAV-2-ΔE3(NF)。通过病毒的形态学观察,血凝性、生长特性、感染性实验证明,该重组病毒与母源病毒没有差异。重组病毒CAV-2-ΔE3(NF)可以作为载体表达外源基因,其外源基因插入片段不小于3.3kb。; 李忠张守峰崔艳王晓虎刘晔扈荣良; 关键词：犬2型腺病毒重组病毒

狂犬病毒中和线性表位重组犬腺病毒2型载体的构建被引量：2: 2008年; 本试验成功构建了表达狂犬病病毒糖蛋白膜外区3个中和线性表位的重组犬腺病毒2型两个重组质粒。引用相关文献已报道的狂犬病病毒糖蛋白膜外区的3个中和线性表位基因,通过有柔性氨基酸将其3个表位基因相连。将重叠延伸PCR获得3个串联表位基因片段克隆入含犬腺病毒2型YCA18株纤突头部HI环的中间载体pBluescript II KS(+)中,然后用SalⅠ和PacⅠ将中间载体中含3个串联表位的纤突部分回收,克隆至缺失纤突部分的犬腺病毒2型全基因组重组质粒pPloyII-CAV-2及pPloyII-CAV-2-CGS中。经鉴定成功获得在犬腺病毒2型纤突头部HI环处插有狂犬病毒3个串联表位的两个重组质粒,分别命名为pPoly II-CAV-2-RG和pPoly II-CAV-2-CGS-RG。经软件对犬腺病毒2型纤突蛋白的构象分析表明,在其HI环插入外源抗原表位基因不影响其免疫原性。本试验为进一步研制多抗原表位展示性重组疫苗、新型狂犬病疫苗奠定基础。; 徐慧娟王晓虎李忠刘晔张守峰王颖袁子国徐振波扈荣良; 关键词：狂犬病毒糖蛋白

表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白基因重组犬2型腺病毒的构建及鉴定被引量：2: 2010年; 为构建表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5蛋白的重组犬2型腺病毒(CAV-2),本研究将PRRSV GP5蛋白基因表达盒连接于E3区部分缺失的CAV-2全基因组重组质粒pPolyⅡ-CAV-2中,构建重组质粒pPoly-Ⅱ-CAV-2-GP5。并采用PmeⅠ和AscⅠ双酶切和脂质体介导法,将其转染MDCK细胞,获得重组病毒rCAV-2-GP5,经酶切鉴定显示该重组病毒含有目的基因。经RT-PCR检测表明,rCAV-2-GP5能够转录相应GP5蛋白基因mRNA;western blot检测证实GP5蛋白在MDCK细胞中得到表达。体外连续传30代检测表明,rCAV-2-GP5具有良好的遗传稳定性。本实验为PRRSV新型疫苗的研制奠定了基础。; 周井祥薛江东刘晔张守峰朱霞扈荣良; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 GP5蛋白犬2型腺病毒重组病毒

两株狂犬病病毒强毒株糖蛋白基因的克隆及潜在抗原表位分析被引量：6: 2007年; 通过RT-PCR分别获得了狂犬病病毒强毒CVS株、DRV82株糖蛋白基因,进行克隆及测序,并推导出氨基酸序列,与犬用疫苗弱毒株ERA、SRV9、犬源性街毒株CGX及人用疫苗株PG的糖蛋白序列进行比较。结果表明,以上狂犬病病毒毒株间的核苷酸同源性为83.1%～99.2%,氨基酸序列同源性为87.0%～98.5%。经Jameson-Wolf抗原表位优势图分析,CVS株与其他各株相比发现在304位、372位抗原表位优势升高;而DRV82株与其它各株差异不明显。抗原优势变化可能导致狂犬病病毒糖蛋白出现新的潜在抗原位点,为下一步构建不同毒株的狂犬病病毒糖蛋白重组疫苗奠定了基础。; 崔艳李忠王雷张守峰扈荣良; 关键词：狂犬病病毒糖蛋白抗原位点

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国家自然科学基金(30471294)