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腺病毒感染及胞内运输途径的研究进展被引量：1: 2014年; 目前关于腺病毒感染及胞内运输的分子机制研究主要来源于C亚群腺病毒在肿瘤细胞系中的研究结果。腺病毒对靶细胞的感染及胞内运输大致分为几步:病毒与细胞表面受体的特异结合,胞吞介导的病毒内化,病毒逃脱胞内体进入细胞质,病毒沿着微管运输至核孔,病毒基因组入核。病毒胞内运输效率极高,感染后1 h,80%以上的病毒基因组被送至核内。但是腺病毒胞内的运输方式会因以下几个因素变化而产生差异:靶细胞类型,细胞生理状态,病毒血清型。文中对腺病毒感染靶细胞及胞内运输的已有分子机制进行综述,为临床基因治疗用途的病毒载体研发提供思路。; 张文峰邵红伟贺华黄树林; 关键词：腺病毒胞吞病毒受体

5型和35型腺病毒纤毛蛋白的原核表达及活性验证: 2013年; 目的:原核表达5型腺病毒纤毛蛋白(Ad5 fiber)和35型腺病毒纤毛蛋白(Ad35 fiber),并对蛋白活性进行初步分析。方法:将重组质粒pET28a-Ad5 fiber和pET28a-Ad35 fiber转化入E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达后,经Ni-NTA凝胶珠亲和纯化,用SDS-PAGE鉴定纯化蛋白,并用蛋白竞争性实验验证纯化蛋白的活性。结果:转化溶原菌后能够表达目的蛋白,Ad35 fiber蛋白对Ad5(5型腺病毒)感染无影响,只能阻断Ad5F35(5型腺病毒纤毛被替换为35型腺病毒纤毛的嵌合腺病毒)对细胞的感染;Ad5 fiber蛋白对嵌合腺病毒Ad5F35感染无影响,只能抑制Ad5对细胞的感染。结论:成功表达具有生物活性的5型和35型腺病毒纤毛蛋白,为进一步研究嵌合腺病毒Ad5F35感染细胞的机制奠定基础。; 张文峰张琼宇薄华本邵红伟李晓程王腾黄树林; 关键词：原核表达

Hsp70.1在冬凌草甲素处理的肝癌细胞中的作用研究: 2011年; 目的研究Hsp70.1在冬凌草甲素处理后的肝癌细胞HepG2中的表达情况及其与冬凌草甲素抗肿瘤活性的关系。方法采用蛋白印迹法及实时荧光定量PCR技术观察Hsp70.1在冬凌草甲素处理的肝癌细胞HepG2的表达变化,并采用RNA干扰技术观察抑制Hsp70.1表达后对冬凌草甲素抗肝癌效果的影响。结果冬凌草甲素作用12 h后,HepG2细胞的Hsp70.1蛋白及RNA表达均增加。Hsp70.1短发夹RNA(shRNA)转染抑制Hsp70.1表达后,与对照组相比,Hsp70.1 shRNA转染组、冬凌草甲素处理组或两者联合应用组的HepG2细胞的存活率均明显降低。结论 Hsp70.1可促进HepG2细胞的生存,对HepG2细胞和冬凌草甲素处理的HepG2细胞具有保护作用。; 王辉叶燕黄树林禹志领; 关键词：冬凌草甲素肝癌细胞

Survivin-2B在肿瘤细胞凋亡过程中的作用研究: 2009年; 目的探讨肿瘤细胞凋亡过程中survivin-2B的作用机制。方法通过流式细胞仪分析survivin-2B对肿瘤细胞周期的影响;利用激光共聚焦显微镜观察通过青色荧光蛋白(CFP)标记的survivin-2B和罗丹明123标记的线粒体在细胞内的定位及在细胞凋亡过程中的变化;采用荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)方法分析survivin-2B和survivin-ΔEx3在细胞内的相互作用。结果流式细胞仪分析结果表明,Survivin-2B能够明显抑制肿瘤细胞生长,促使细胞凋亡增加;通过激光共聚焦显微镜观察到凋亡早期survivin-2B聚集在细胞发生固缩的部位,且在肿瘤凋亡过程中不存在明显的线粒体定位及与线粒体的相关性;FRET分析显示survivin-2B与survivin-ΔEx3在细胞质中存在很弱的相互作用。结论Survivin-2B能够明显促进肿瘤细胞凋亡,且survivin-2B通过与survivin-ΔEx3直接结合以阻断其抗凋亡效应的可能性较小。; 邵红伟张文峰胡青莲黄树林; 关键词：细胞凋亡线粒体荧光共振能量转移

肿瘤患者偏移的T细胞TCRBV表达谱在自体CIK细胞中的恢复: 2015年; 目的研究肿瘤患者自体PBMC经体外诱导培养的CIK细胞群TCRBV亚家族表达的变化。方法Ficoll密度梯度离心法分类人体外周血单核细胞（PBMC）,经IFN-γ、OKT-3以及IL-2诱导培养,Trizol试剂提取总RNA,RT-PCR半定量分析24个TCRBV亚家族表达情况,流式分选平台分选CD3＋CD8＋细胞和CD3＋CD56＋细胞亚群。结果诱导培养后的CIK中,分化的CD3＋CD56＋细胞亚群比例占12.6%~41.7%。PBMC中弱表达或缺失的TCRBV亚家族,在CIK中上调或恢复表达。CIK细胞群中,CD3＋CD8＋细胞和CD3＋CD56＋细胞亚群克隆组成无明显差异。结论肿瘤患者自体PBMC体外诱导培养CIK细胞后,部分表达偏移的TCRBV亚家族能恢复表达,表明部分受损或被抑制的T细胞克隆在CIK培养中被激活并增殖。; 彭鑫王腾邵红伟黄树林; 关键词：CIK T细胞 RT-PCR

单链TCR分子的构建与酵母表面展示: 2010年; 目的构建单链T细胞抗原受体(scTCR),借助酵母展示载体对其进行表达和展示,并确定优化的展示时间点。方法利用融合PCR(fusion PCR)通过linker将TCR分子两条链的可变区连接在一起,构建成scTCR,并克隆入展示载体pYD1;转化酵母细胞后,通过激光共聚焦显微镜观察scTCR的表达情况,并利用流式细胞仪测定其表达曲线;洗脱酵母细胞表面的蛋白质,通过点杂交检测进一步确定scTCR的表达。结果 scTCR被成功地构建和克隆;转化酵母细胞后,激光共聚焦检测表明其分布在酵母细胞的表面,流式细胞检测表明scTCR在诱导24 h左右在酵母细胞表面的展示比例达到峰值;对酵母表面洗脱蛋白的点杂交检测进一步表明了scTCR的表达和展示。结论所构建的scTCR能够有效地表达并展示在酵母细胞表面,为下一步构建scTCR酵母展示库并确定最佳的表达诱导和筛选时机奠定了良好的基础。; 邵红伟郭亨彭黄晓露张文峰黄树林

T细胞过继免疫治疗法在肿瘤疾病治疗中的应用进展被引量：5: 2011年; 目前T细胞过继免疫治疗技术已应用于治疗各种疾病,尤其是在肿瘤领域的应用,具有肿瘤抗原特异性的T细胞过继免疫疗法不仅可以在体外实验中诱导肿瘤细胞死亡,而且已经部分应用于临床患者并达到一定的治疗效果,有望成为从基因水平上解决肿瘤疾病的前沿武器。本文对近年来T细胞过继免疫疗法在肿瘤疾病治疗方面的研究进行综述。; 郭宁宁王辉肖兰凤; 关键词：基因治疗肿瘤

细胞自分泌对小鼠骨髓基质细胞体外培养的影响: 2015年; 目的阐明小鼠骨髓基质细胞体外培养的影响因素,优化骨髓基质细胞体外培养方法。方法以小鼠骨髓基质细胞为研究对象,倒置显微镜和MTT法观察骨髓基质细胞不同接种数目(1×105个/孔,3×105个/孔,5×105个/孔)条件下和相同接种数目不同培养基体积(100、150、200μl)条件下的骨髓基质细胞体外生长状态。制备骨髓基质细胞体外培养条件培养基,观察条件培养基对骨髓基质细胞体外生长状态的影响。结果骨髓基质细胞体外培养7 d,100μl培养体系时,接种1×105个细胞的培养孔基本无基质细胞生长,接种3×105个细胞的基质细胞贴壁约30%左右,接种5×105个细胞的基质细胞贴壁达90%左右。当接种细胞数目为3×105个时,随培养基体积的增多基质细胞数目明显减少(P<0.05),而条件培养基组基质细胞的数目明显多于普通培养基组(P<0.05);当接种细胞数目为5×105个时,培养基体积对基质细胞生长状态基本无影响,条件培养基组与普通培养基组骨髓基质细胞的生长状态无显著差异。结论骨髓基质细胞在体外培养时,接种细胞数目过低会影响自身分泌胞外因子的浓度从而影响其自身的生长;细胞自分泌对自身的生长有促进作用,但是当分泌的胞外因子达到一定浓度后促生长作用将达到平台期。; 薄华本郑迪威钱佳碧邵宏伟黄树林; 关键词：骨髓基质细胞自分泌细胞生长

两种存活蛋白变异剪接体在HeLa细胞中的表达定位及相互作用被引量：3: 2009年; 存活蛋白(survivin)是重要的肿瘤相关抗原基因,在肿瘤的发生发展中起着重要的作用.除了标准的剪接形式外,它至少还编码2种变异剪接产物—存活蛋白-2B和存活蛋白-ΔEx3,这2个变异剪接体所编码的蛋白具有不同的生物学功能.为研究这2个变异剪接体在肿瘤细胞中的相互作用情况,本实验利用增强型青色荧光蛋白(enhanced cyan fluorescent protein,ECFP)和增强型黄色荧光蛋白(enhanced yellowfluorescent protein,EYFP)分别标记存活蛋白-2B和存活蛋白-ΔEx3.首先通过激光共聚焦扫描显微镜观察它们的细胞定位;同时利用荧光共振能量转移(fluorescence resonanceenergytransfer,FRET)技术研究两者在细胞内的相互作用情况.研究结果表明,存活蛋白-2B主要分布在细胞质中,而存活蛋白-ΔEx3则主要分布在细胞核内,少量分布在细胞质中;FRET分析结果显示,两者仅在细胞质中存在着很弱的相互作用,表明两者很可能是通过某种间接的方式发挥功能上的相互调节作用.本研究为进一步探讨存活蛋白变异剪接体的生物学功能及相互作用机制奠定了基础.; 邵红伟张文峰胡青莲黄树林; 关键词：荧光共振能量转移相互作用

肿瘤患者胸/腹水和外周血中TCR Vβ亚家族表达及调节性T细胞亚群的研究被引量：4: 2012年; 目的:探讨肿瘤患者胸/腹水中肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)和外周血T细胞中T细胞受体(TCR)Vβ亚家族的表达变化情况、CD4/CD8细胞比例变化和Treg细胞的分布情况,分析肿瘤患者的免疫状态。方法:分离11例肿瘤患者胸/腹水和外周血以及4例健康人外周血的T细胞,采用流式方法检测Vβ24个亚家族及CD3、CD4、CD8、CD25、CD127的表达情况,统计分析T细胞中Vβ24个亚家族、Treg细胞的特点。结果:TCR Vβ亚家族的表达在肿瘤患者胸/腹水TIL中与血液淋巴细胞中存在着显著差异,其中肺癌患者(4/5)TIL中TCR Vβ8,结肠癌患者(3/4)TIL中TCR Vβ2等亚家族显著高表达;11例肿瘤患者胸/腹水样本中Treg的比例均比外周血高(P<0.05),其中5例肺癌患者胸腹水中CD8+T细胞比例降低。结论:肿瘤患者胸/腹水中的淋巴细胞TCR Vβ亚家族表达与外周血存在差异,表明肿瘤患者体内淋巴细胞发生了明显的优势取用和定向趋化。此外肿瘤微环境可能影响了TIL中CD4+细胞的分化导致胸腹水中Treg细胞的比例升高,同时伴随着CD8+T比例的下降,并可能因此影响到TIL中TCR Vβ亚家族的优势取用情况,且导致免疫耐受。; 区裕升邵红伟吴凤麟黄树林肖兰凤; 关键词：肿瘤调节性T细胞

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“重大新药创制”科技重大专项(2009ZX09103-708)

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