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广东省科技计划工业攻关项目(20098030803054)
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袁军
赵国庆
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重组腺病毒载体pAdeasy-1/pAdtrack-CMV—GFP-β-NGF的构建和鉴定
2011年
目的构建携带绿色荧光蛋白(GFP)标记的小鼠β-NGF重组腺病毒载体。方法利用RT—PCR法从小鼠颌下腺总mRNA中扩增β-NGF全长cDNA片断,定向克隆于腺病毒穿梭质粒pAdtrack-CMV(已标记绿色荧光蛋白)中;在细菌中与缺陷型腺病毒基因组pAdeasy-1进行同源重组.构建Adeasy-1/pAdtrack—CMV-GFP-β-NGF载体,并进行酶切鉴定。结果成功获得小鼠β-NGF全长扩增片段;pAdTrack—CMV-β-NGF测序验证含有目的基因;双酶切鉴定成功构建重组pAdTrack-CMV-β-NGF质粒:限制性内切酶的酶切分析结果证明成功构建同源重组的Adeasy-1/pAdtrack-CMV-GFP-β-NGF载体。结论本实验所用方法可高效、安全构建腺病毒载体pAdeasy-1/pAdtrack—CMV-GFP-β-NGF。
赵国庆
肖哲
袁军
韩天旺
关键词:
神经生长因子
腺病毒载体
绿色荧光蛋白
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