国家高技术研究发展计划(2008AA10Z157)
- 作品数：22 被引量：200H指数：8
- 相关作者：章镇渠慎春张计育刘庆忠吕东更多>>
- 相关机构：南京农业大学山东省果树研究所中国科学院植物研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划江苏省科技支撑计划项目国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 珠眉海棠根原生质体分离条件研究被引量：2
- 2010年
- 以苹果属珠眉海棠(Maluzumi Mati)根为供体进行原生质体分离条件的研究,结果表明,酶解过程中酶液浓度、酶液渗透压、酶解时间均对原生质体分离效果产生重要影响。对于珠眉海棠,一步酶解法,两步酶解法皆可以分离根原生质体,但两步酶解法优于一步酶解法。两步酶解法的最佳分离条件为:Cellulysin 28 mg/mL+纤维素酶(Cellulase RS)15 mg/mL+果胶酶(PectolaseY-23)2 mg/mL。
- 于立杰王忆许雪峰李天忠韩振海
- 关键词：根系原生质体
- 水杨酸诱导湖北海棠全长cDNA文库的构建及应用被引量：21
- 2010年
- 以湖北海棠为材料,经水杨酸处理后,用改良CTAB法提取总RNA,纯化后构建全长cDNA文库,并进行PGIP基因的克隆.结果表明：（1）提取的总RNA无降解,无污染;mRNA弥散带主要集中在500～2 000 bp左右,没有rRNA残留.（2）ds cDNA弥散带主要分布于300～2 000 bp之间,PCR验证后片段大小分布于200～2 000bp之间,说明合成ds cDNA质量较好,成功地构建了全长cDNA文库.（3）通过PCR从该cDNA文库中克隆了PGIP基因,命名为MhPGIP,GenBank登录号为FJ449708;其核苷酸序列及推导氨基酸序列与苹果的一致性分别为98%和97%,该序列含有两个串联的亮氨酸重复序列.综上所述,构建的全长cDNA文库质量很好,该文库的建成可以用于今后抗病新基因的挖掘、克隆和利用,为苹果抗病机理的研究奠定基础.
- 张计育渠慎春董畅高志红乔玉山章镇
- 关键词：湖北海棠水杨酸CDNA文库
- 一种简便的同步提取烟草叶片DNA和总RNA的方法被引量：5
- 2011年
- 以野生型和转几丁质酶烟草株系叶片为材料,采用改进的CTAB法对其DNA和总RNA进行同步提取和DNA中RNA的消化以及总RNA中DNA的消化,并分别进行了电泳检测、含量测定和相应的PCR和RT-PCR检测。结果表明:用该法提取的DNA条带清晰、无降解,所提取的DNA浓度在109.20～245.46μg/mL,OD_(260)/OD_(280)在1.83～1.94。以提取的DNA为模板,PCR能够扩增出清晰的目的条带。RNA具有5.8SrRNA、18S rRNA和28S rRNA 3条清晰的条带,且无降解。RNA浓度在355.57～570.13μg/mL,OD_(260)/OD_(280)在1.84～2.04,OD_(260)/OD_(230)在2.06～2.33。RNA逆转录成cDNA,经PCR扩增出清晰的看家基因和目的基因条带。
- 张计育杜小丽渠慎春刘金义章镇
- 关键词：烟草叶片DNA总RNA
- 苹果中新抗旱相关基因GR-RBPs的克隆与表达分析被引量：4
- 2011年
- 在构建楸子叶片SSH cDNA文库及EST分析的基础上,通过电子克隆(in silico cloning)和RT-PCR方法分别从楸子和平邑甜茶叶片中各克隆得到了1个富含甘氨酸RNA结合蛋白(GR-RBP)基因,分别命名为MpGR-RBP1(HM042682)和MhGR-RBP1(HQ380209)。它们的cDNA全长分别为781和558 bp,ORF分别编码171和164个氨基酸的多肽。MpGR-RBP1和MhGR-RBP1基因编码蛋白均含有一个RNA识别结构域(RRM)和一个富含甘氨酸区(glycine-rich region)。生物信息学分析表明,MpGR-RBP1和MhGR-RBP1蛋白属于植物GR-RBPs蛋白家族。定量PCR分析表明,MpGR-RBP1和MhGR-RBP1基因在根、茎和叶中均有表达;在干旱胁迫下,它们的表达量增加,而楸子MpGR-RBP1表达水平明显高于平邑甜茶MhGR-RBP1。结果表明,MpGR-RBP1和MhGR-RBP1可能参与植物对干旱胁迫的响应反应,并推测抗旱蛋白结构的差异可能对植物的抗旱性有影响。
- 王顺才梁东师守国马锋旺束怀瑞
- 关键词：苹果干旱基因表达
- 外源基因对八棱海棠株系组培苗生根的影响被引量：1
- 2009年
- 以南京农业大学生物技术实验室获得的两个转番茄铁载体蛋白基因八棱海棠株系B4、B5组培苗的茎段为试材,以非转基因八棱海棠为对照,研究转基因对生根情况的影响。结果表明:在相同IBA或者IAA浓度下,转基因八棱海棠生根率明显低于对照植株;而从根长来看,在IBA的条件下,转基因株系明显低于对照,而在IAA的条件下则不明显;在IAA条件下平均根数也少于对照。
- 陈卫平孙英戴强渠慎春
- 关键词：八棱海棠
- 一个苹果山梨醇转运子基因家族新成员的克隆及其表达分析被引量：1
- 2010年
- 【目的】克隆一个苹果山梨醇转运子基因(命名为ST)的全长cDNA,为进一步研究该基因的功能奠定基础。【方法】利用RT-PCR法从苹果叶片中克隆ST基因,应用相关软件对其进行生物信息学分析;并采用实时荧光定量RT-PCR(Real-time RT-PCR)法,分析ST在苹果不同组织中以及在果实发育过程中的表达情况。【结果】获得了1个包含全长开放阅读框的ST基因,该基因cDNA全长1 767 bp,包含长达1 617 bp的完整开放阅读框,该基因所编码的蛋白与GenBank中已登录的其他植物山梨醇转运子的同源性均在72%以上,其中与苹果山梨醇转运子MdSOT5的同源性较高,为81%。Real-time RT-PCR结果表明,在不同组织中,ST在韧皮部的相对表达量最高,其次在衰老叶、成熟叶、叶柄中较高,在库器官花、幼叶、果实、果柄、根中表达较低;在果实不同发育时期,ST基因表达量在果实发育早期很低,花后30 d快速升高并达到峰值,在发育中期保持一个较高的表达水平,在果实发育后期相对表达量又降低,之后略呈递增趋势。【结论】从苹果叶片中克隆了ST基因,生物信息学分析可知ST具有糖转运功能;ST在韧皮部的表达量最高,说明其负责长距离运输;ST在果实发育过程中的表达量与山梨醇的含量变化相一致。
- 李换桃梁东马锋旺
- 关键词：苹果基因克隆
- 苹果抗病虫基因研究进展(综述)
- 在长期进化过程中,植物形成了一系列防御机制,抵抗各类病原物入侵,抗病R基因在其中发挥着关键作用。R基因的研究,在苹果中虽然取得了一定的进展,但与农作物相比还有一定的差距。本文综述了目前在苹果抗病虫基因研究方面的研究进展,...
- 渠慎春吕东章镇
- 关键词：苹果QTL分子标记抗性基因
- 文献传递
- 苹果抗病虫基因研究进展被引量：6
- 2009年
- 苹果是研究果树抗病基因的模式植物,综述了苹果抗病虫基因的结构特点和基因定位,总结了抗黑星病、白粉病、火疫病、苹果棉蚜等苹果主要病虫害的研究进展,特别是分子标记技术在苹果抗病虫基因研究的应用情况,并对其中存在的问题与解决方法进行了讨论。
- 渠慎春吕东章镇
- 关键词：苹果QTL抗性基因
- 抗真菌α-硫堇蛋白DB_4基因导入苹果的研究被引量：1
- 2010年
- [目的]利用转基因的办法提高苹果(Malus domesticaBorkh)对叶部病害和幼果期侵染果实病害的抵抗能力。[方法]利用农杆菌介导的遗传转化方法将绿色组织特异表达的菠菜核酮糖二磷酸羧化酶/加氧酶的激活酶(Rubisco-activase)启动子(RCAP)驱动下的α-硫堇蛋白DB4基因转入到"皇家嘎啦"苹果叶片外植体中。[结果]PCR、Southern blotting分析及GUS检测结果表明,目的基因已经整合到苹果基因组上。[结论]获得了转α-硫堇蛋白DB4基因的转基因苹果。
- 孙春玉孙旸魏海蓉宗晓娟刘庆忠
- 关键词：抗真菌转基因苹果
- SA、MeJA、ACC和苹果轮纹病病原菌诱导湖北海棠MhWRKY1基因的表达被引量：26
- 2011年
- 【目的】从湖北海棠叶片中克隆MhWRKY1转录因子的全长cDNA序列,分析该基因在各种组织中(叶、茎、根)的表达特性,并分析SA、MeJA、ACC在叶、茎、根中诱导MhWRKY1基因的表达模式以及苹果轮纹病病原菌诱导条件下湖北海棠叶片中该基因的表达特性。【方法】利用电子克隆技术和RT-PCR验证相结合的方法,从SA诱导的湖北海棠全长cDNA文库中,克隆MhWRKY1转录因子的全长序列;利用生物信息学的方法对其进行结构和功能的初步分析;利用实时荧光定量RT-PCR技术分析该基因在不同组织中的表达以及在SA、MeJA、ACC和苹果轮纹病病原菌诱导下的表达特性。【结果】克隆了MhWRKY1基因的全长cDNA序列为1 338 bp,GenBank数据库登录号为FJ598139。生物信息学分析表明,该基因最大开放阅读框为993 bp,编码330个氨基酸。推导的氨基酸序列与杨树WRKY26、杨树WRKY20、大豆WRKY,马铃薯WRKY2、烟草WRKY、拟南芥WRKY7、水稻WRKY53的同源性分别为68%、68%、66%、60%,59%,49%和43%。该转录因子含有1个WRKY结构域,其N端含有1个WRKYGQK结构域,C端含有1个C2H2锌脂结构,属于第Ⅱ类型的转录因子。表达分析结果表明,MhWRKY1在叶和茎中的表达量较大,分别是根的4.81和3.75倍。在湖北海棠叶、茎、根中,SA、MeJA、ACC都可以诱导该基因的表达。另外,在所研究的72 h内,苹果轮纹病病原菌可以诱导该基因表达,且表达量在12 h达到最大,是未处理之前的9倍左右。【结论】MhWRKY1转录因子可能参与SA、MeJA和ET介导的植物抗病防卫反应的基本信号通路,并且参与对苹果轮纹病病原菌引起的防卫反应,在湖北海棠的的抗病过程中可能起着非常重要的作用。
- 张计育佟兆国高志红罗昌国渠慎春章镇
- 关键词：湖北海棠SAMEJAACC
