黑龙江省教育厅科学技术研究项目(12531292)
- 作品数：3 被引量：14H指数：2
- 相关作者：于建武孙丽杰赵勇华李树臣康鹏更多>>
- 相关机构：哈尔滨医科大学附属第二医院更多>>
- 发文基金：黑龙江省教育厅科学技术研究项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 沉默信息调节因子1活性受抑导致肝细胞糖代谢紊乱促进丙型肝炎病毒复制被引量：10
- 2013年
- 目的利用携带HcV复制子的Huh7．5细胞探讨HCV复制对沉默信息调节因子1（SIRTl）表达和肝细胞葡萄糖代谢的影响。方法应用流式细胞仪、比色法测定细胞活性氧（ROs）变化和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）＋／还原型NDA（NADH）比值变化，应用液体闪烁计数仪、实时荧光定量-聚合酶链反应（RT-PCR）、Western印迹法检测SIRTl活性、mRNA和蛋白的表达，应用放射核素法和葡萄糖氧化酶法测定肝细胞葡萄糖摄取率和糖异生，RT-PCR检测SIRTl下游调节糖代谢基因mRNA水平。计量资料比较采用t检验。结果与Huh7．5细胞相比，复制子细胞ROS水平升高（3．8±0．5比1．0±0．2，t=12．736，P〈0．01），NAD＋／NADH比值下降（0．03±0．01比0．12±0．03，t=6．971，P〈0．01），SIRTl活性（0．3±0．1比1．0±0．2，t=7．668，P〈0．01）、mRNA（0．4±0．1比1．0±0．3，t=4．648，P〈0．01）和蛋白（0．3±0．1比0．8±0．2，t=5．941，P〈0．01）水平下降。SIRT1受抑后，不仅增加胰岛素受体底物-1（IRS-1）磷酸化（0．7±0．2比0．4±0．1，t=3．286，P〈0．01），降低蛋白激酶B（Akt）磷酸化（0．3±0．1比0．6±0．2，t=3．286，P〈0．01），下调葡萄糖转运蛋白2（GLUT2）基因表达（0．4±0．1比1．0±0．2，t=6．573，P〈0．01），抑制葡萄糖摄取率（每分钟计数值：4600±500比21000±4600，t=8．682，P〈0．01）；而且降低叉头蛋白转录因子01（Fox01）磷酸化（0.2±0．1比0．5±0．1，t=5．196，P〈0．01），上调磷酸烯醇丙酮酸羧激酶（2．8±0．6比1．0±0．3，t=6．573，P〈0．01）和葡萄糖-6-磷酸酶（2．6±0．5比1．0±0．2，t=7．278，P〈0．01）基因表达，增加糖异生（2．5±0．5比1．0±0．2，t=5．543，P〈0．01）。结论HCV复制降低NAD＋／NADH比值，下调SIRTl活性和表达，改变其下游调节糖代谢相关基因表达，降低葡萄糖摄取能力，增
- 孙丽杰赵勇华李树臣于建武康鹏刘伟
- 关键词：肝炎病毒属凋亡抑制蛋白质类葡萄糖代谢障碍病毒复制
- 胰岛素抵抗的慢性丙型肝炎患者外周血及肝组织内源性大麻素系统的变化被引量：3
- 2014年
- 目的研究胰岛素抵抗(IR)的慢性丙型肝炎(CHC)患者外周血及肝组织内源性大麻素系统的变化。方法采用高效液相色谱-质谱联用技术检测CHC患者和CHC合并IR患者外周血内源性大麻素花生四烯酸乙醇胺(AEA)和花生四烯酰甘油(2-AG)水平,应用RT-PCR及Western印迹检测肝组织大麻素受体1(CB1R)及脂肪酸酰胺水解酶(FAAH)的表达,数据行t检验。结果与CHC患者相比,CHC合并IR患者外周血AEA水平升高[(6.80±1.70)pmol/mL比(3.88±0.63)pmol/mL,t=8.053,P<0.01];肝组织CB1R mRNA水平(1.7±0.4比1.0±0.2,t=4.696,P<0.01)和CB1R蛋白水平(0.8±0.2比0.4±0.1,t=5.367,P<0.01)增加;FAAH mRNA水平(0.5±0.1比1.0±0.3,t=4.743,P<0.01)和FAAH蛋白水平(0.5±0.1比0.8±0.3,t=2.846,P<0.01)下降。与胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)<4的患者相比,HOMA-IR指数≥4的患者AEA水平升高[(7.53±1.85)pmol/mL比(5.56±1.40)pmol/mL(t=2.986,P<0.05)];肝组织CB1 mRNA水平(2.3±0.65比1.4±0.35,t=2.986,P<0.05)和CB1R蛋白水平(1.2±0.3比0.9±0.2,t=2.038,P<0.05)升高,FAAH mRNA水平(0.3±0.08比0.6±0.15,t=4.076,P<0.01)和FAAH蛋白水平(0.2±0.05比0.4±0.1,t=3.464,P<0.05)下降。结论随着IR程度加重,CHC患者外周血AEA水平升高;肝组织CB1R表达增加而FAAH表达减少。
- 孙丽杰万琳张晓宇施宇光周洪波陈墨洋于建武
- 关键词：慢性丙型肝炎胰岛素抵抗内源性大麻素大麻素受体1
- 丙型肝炎病毒核心蛋白下调AMP激活蛋白激酶导致肝细胞糖代谢紊乱被引量：1
- 2013年
- 目的探讨HCV核心蛋白对AMP激活蛋白激酶(AMPK)表达及肝细胞葡萄糖代谢的影响。方法表达HCV核心蛋白的质粒转染L02人肝细胞。分别应用液体闪烁计数仪、实时荧光定量-PCR、Western印迹检测AMPK活性、mRNA及蛋白的表达。应用放射同位素法和葡萄糖氧化酶法测定肝细胞葡萄糖摄取率和糖异生。采用6-磷酸葡萄糖脱氢酶偶联比色法和乳酸脱氢酶偶联比色法测定葡萄糖激酶(GK)和磷酸烯醇丙酮酸羧激酶(PEPCK)活性。RT-PCR检测AMPK下游调节糖代谢的基因的葡萄糖转运蛋白(GLUT)1、GLUT2、PEPCK、葡萄糖-6-磷酸酶(G6Pase)和GK mRNA水平。结果与转染空载体的L02人肝细胞相比,表达HCV核心蛋白L02人肝细胞AMPKα2活性[(0.2±0.05)比(1.0±0.3),t=6.443,P<0.01]、AMPKα2 mRNA[(0.3±0.05)比(1.0±0.3),t=5.638,P<0.01]及磷酸化-AMPK蛋白的表达水平[(0.2±0.05)比(0.6±0.2),t=4.753,P<0.01]明显下降,PEPCK活性[mIU/min/mg蛋白:(35.80±8.70)比(25.50±5.80),t=2.413,P<0.05]明显升高,而GK活性[mIU/min/mg蛋白:(1.70±0.35)比(3.55±0.84),t=4.929,P<0.01]明显降低,葡萄糖摄取率[cpm:(5000±800)比(20000±5000),t=7.256,P<0.01]及其调节基因GLUT2mRNA水平[(0.5±0.1)比(1±0.3),t=3.873,P<0.01]明显下降;糖异生[(2.5±0.5)比(1.0±0.2),t=6.823,P<0.01]及其调节基因PEPCK[(2.8±0.7)比(1.0±0.3),t=5.789,P<0.01]、G6Pase mRNA水平[(2.5±0.5)比(1.0±0.2),t=6.822,P<0.01]明显升高;GK mRNA水平[(0.6±0.1)比(0.9±0.3),t=2.324,P<0.05]明显下降。结论HCV核心蛋白下调AMPK活性及表达,改变其下游调节糖代谢相关基因表达,降低葡萄糖摄取能力,增加糖异生,导致肝细胞葡萄糖代谢紊乱。
- 孙丽杰赵勇华李树臣于建武康鹏刘伟
- 关键词：丙型肝炎病毒核心蛋白糖异生
