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荧光定量RT-PCR检测猪瘟兔化弱毒疫苗方法的建立: 猪瘟是危害养猪业的重要传染病,猪瘟主要依靠猪瘟兔化弱毒疫苗预防,目前各厂家不同批次弱毒苗的质量效果,主要通过注射疫苗后,检测免疫抗体来验证,耗时费事。本研究设计合成了两对引物(一对质粒标准品引物和一对荧光定量PCR引物)...; 范斌马志亮刘岳杨洁柴俊刘旭川张以芳; 关键词：猪瘟兔化弱毒疫苗荧光定量RT-PCR; 文献传递

猪瘟病毒诱变型E2基因重组干酪乳杆菌的构建及免疫学特性: 猪瘟是由猪瘟病毒(Classic Swine Fever Virus,CSFV)引起的一种急性、热性、高度接触性传染病。猪瘟病毒E2蛋白是它主要的保护性抗原蛋白,能够诱导机体产生中和抗体,因此常选择猪瘟病毒E2蛋白作为检...; 孙绍美张书光张云娟柴俊刘旭川张以芳; 关键词：猪瘟病毒 E2基因干酪乳杆菌免疫学特性; 文献传递

CARD15基因StyⅠ酶切多态性与奶牛结核病易感性的相关性分析被引量：3: 2015年; 本试验旨在探讨CARD15基因StyⅠ酶切位点多态性与云南高原奶牛结核病易感性的关联。选择云南昆明、玉溪、大理等地结核病阳性奶牛103头,结核病阴性奶牛98头,共201头为研究对象,应用创造酶切位点原理设计引物,通过PCR-RFLP与PCR直接测序法相结合的检测方法,获得CARD15基因StyⅠ酶切位点的基因型及等位基因频率,分析该位点与云南高原奶牛结核病易感性的关系。结果显示,CARD15基因的StyⅠ酶切位点存在AA、AG、GG 3种基因型,在结核病例组中AA、AG、GG基因型频率为0.03、0.42和0.55,A、G等位基因频率为0.24和0.76;在结核对照组中AA、AG、GG基因型频率为0.01、0.05和0.94,A、G等位基因频率为0.04和0.96;对多态性位点的遗传模式进行分析,最佳遗传模式为显性遗传(dominant),在此遗传模式下基因型AG-AA在病例组的频率44.7%,明显高于对照组的频率6.1%,OR(95%CI)=0.08(OR<1),在病例组与对照组的分布之间有极显著差异(P<0.0001)。结果表明,云南高原奶牛CARD15基因StyⅠ酶切位点多态性与结核病的发生有显著关联性,且基因型AG-AA可能是结核易感型。; 秦波柳桐徐聪董国栋王生奎涂文姬史宪伟张以芳; 关键词：奶牛结核病单核苷酸多态性

牛干扰素-γ基因的克隆、序列分析及表达研究被引量：1: 2014年; 为了使干扰素-γ(interferonγ,IFN-γ)在牛结核等疾病的诊断和防制方面取得更有效的应用,试验采用RT-PCR法从云南本地黄牛外周血淋巴细胞总RNA中扩增牛IFN-γ(BoIFN-γ)基因,测序并进行序列分析;然后亚克隆至pET-28a,转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达。序列分析结果表明,克隆的IFN-γ基因与GenBank中荷斯坦牛IFN-γ序列同源性达99.60%。表达产物经SDS-PAGE分析,在大小约23ku处可见目的蛋白表达条带,与预期结果一致;用ELISA检测,表达的蛋白具有明显的生物学活性,在菌体中的含量为244ng/mL。本试验结果为牛IFN-γ蛋白的进一步研究和应用奠定了基础。; 杨洁张书光李长青刘世高柴俊刘旭川史宪伟张以芳; 关键词：原核表达生物学活性

嗜水气单胞菌的分离与16S rDNA鉴定被引量：1: 2014年; [目的]分离并鉴定鱼嗜水气单胞菌,并构建系统发育分析。[方法]从云南某鱼场采集发病鱼的病变组织进行细菌分离与培养,并对分离菌株进行初步鉴定、16S rDNA鉴定和系统发育分析。[结果]分离培养到1株细菌,命名为Ah1305。经表型鉴定、生化试验及16S rDNA系统发育分析,鉴定为嗜水气单胞菌。[结论]该研究可为快捷、准确检测鱼嗜水气单胞引起的疾病提供参考。; 柳桐王生奎孙亭亭马志亮秦波张以芳信爱国; 关键词：嗜水气单胞菌 RDNA

乳扇制品中乳酸杆菌的分离鉴定及16S rRNA序列同源性分析被引量：2: 2015年; 目的乳扇是云南大理白族的一种传统乳制品,明确大理乳扇制品中乳杆菌的多样性及优势种群分布,为科学利用奠定基础。方法采用表型鉴定及16S r RNA鉴定方法,对10个家庭作坊的大理乳扇制品中的乳杆菌进行了分离鉴定。结果共分离到50株乳杆菌,通过表型鉴定为8个种,包括植物乳杆菌10株、德氏乳杆菌7株、发酵乳杆菌6株、干酪乳杆菌6株、棒状乳杆菌4株、鼠乳杆菌2株、弯曲乳杆菌3株和食果糖乳杆菌2株;06422和06430两株表型鉴定未能定种,进一步通过16S r RNA鉴定为植物乳杆菌和马酒乳杆菌,06422株与植物乳杆菌L.arizonensin、L.pentosus和L.plantarum P158的同源性分别是100%、100%和99.9%,与乳杆菌属其它种的同源性为83.4%(L.gallinarum)至93.5%(L.brevis),06430株与L.kefiranofaciens.subsp.Kefirgranum的16S r RNA同源性是99.9%,与乳杆菌属其它种的同源性为83.7%(L.plantarum P158)至96.3%(L.acidophilus)。结论大理乳扇制品中有9种乳杆菌,其优势种群为植物乳杆菌、德氏乳杆菌、发酵乳杆菌和干酪乳杆菌等四种。; 崔照琼郤翠仙周玉照柴俊刘旭川张以芳; 关键词：乳酸杆菌 RRNA

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