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上海市浦江人才计划项目(07pj14090)
作品数:
1
被引量:7
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相关作者:
王丽华
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2009
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原代卵巢上皮性癌干细胞样细胞的分离、培养及鉴定
被引量:7
2009年
目的研究无血清培养基悬浮培养原代卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞,筛选并鉴定卵巢癌干细胞样细胞。方法卵巢癌组织取自1例卵巢浆液性囊腺癌Ⅲ期、细胞分化2级的患者,分离的原代细胞培养于无血清培养液[添加表皮生长因子(EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、白血病抑制因子(LIF)和胰岛素等细胞因子]得到球样细胞团细胞,并采用常规含血清的培养液进行培养得到贴壁细胞。应用定量PCR技术检测球样细胞躅细胞表达干细胞标志基因的情况,应用四甲基偶氮唑监比色法、Hoechst 33342染色的流式细胞仪检测球样细胞团细胞的耐药性,并检测球样细胞团细胞的裸鼠体内致瘤性。结果在无血清添加细胞因子的培养条件下,原代卵巢癌细胞形成球样细胞团,这些细胞能够存活、增殖、具有自我更新的功能。球样细胞团细胞Nanog、Oct-4、Sox-2、nestin、CD133、CD117及ABCG2等下细胞标志基因的mRNA表达量为分化贴壁细胞的14~400倍。球样细胞团细胞还具有对顺铂和紫杉醇更强的耐药性,将顺铂与紫杉醇同时作用于贴壁细胞及球样细胞团细胞48及72h后,球样细胞团细胞抑制率为31%、29%,显著低于分化细胞(抑制率为61%、73%),分别比较,差异均有统计学意义(P〈0.05)。球样细胞团细胞巾Hoechst33342染色阳性的细胞比例为21.83%,而贴壁细胞为83.04%,两者比较,差异有统计学意义(P〈0.01)。500个球样细胞团细胞可在裸鼠体内成瘤,肿瘤组织的病理特征与原发肿瘤相似,且高表达上皮性肿瘤标志物CA125和细胞角蛋白7。结论采用无血清悬浮培养法从原代卵巢癌组织中获取的球样细胞团细胞,可能含有比例较高的具有增殖和分化能力的卵巢癌下细胞样细胞,并具有干细胞的功能。
赖东梅
刘特
黄勇
王丽华
张健
程蔚蔚
关键词:
卵巢肿瘤
肿瘤干细胞
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