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DNA-EGS1386胞内诱导核酶P抑制人巨细胞病毒UL49基因的表达被引量：1: 2009年; 外部引导序列(EGSs)是一类与mRNA靶序列互补并能引导核酶P切割靶mRNA的小分子RNA。本实验构建稳定表达UL49基因的HeLa细胞系,设计合成了针对于人巨细胞病毒(HCMV)UL49基因的12ntDNA性质的EGS1386,通过转染稳定表达UL49基因的细胞系,荧光定量PCR和Western blotting检测细胞内目的基因UL49的表达情况。结果显示在DNA-EGS1386作用下UL49基因的表达量降低了50%,表明DNA-EGS1386可以有效引导人的核酶P切割目标mRNA。因此,DNA-EGS可以发展成为一种新的基因沉默技术和潜在的抗病毒试剂。; 崔延伟曾志锋李弘剑李月琴周琪杨丹邹奕杨光周天鸿; 关键词：基因沉默

核酶M1GS-T6对HCMV UL97基因RNA片段体外切割作用被引量：3: 2007年; 目的:研究M1GS核酶对HCMV UL97 mRNA的体外切割作用。方法:针对HCMV UL97 mRNA T6位点设计与之互补的引导序列(Guide Sequence,GS),将其共价结合至大肠杆菌核酶P催化亚基(M1 RNA)的3′末端,构建M1GS-T6核酶,并用其对UL97基因亚克隆片段转录产物进行体外靶向切割实验。结果:核酶M1GS-T6具备特异性切割靶分子UL97mRNA的能力。结论:核酶M1GS-T6具备特异性切割活性,为进一步研究HCMV病毒基因功能和治疗提供了新的途径。; 张欣李弘剑李月琴何华坤邹奕周天鸿

人巨细胞病毒UL23基因编码蛋白的B细胞表位预测: 2009年; 目的预测人巨细胞病毒UL23基因编码蛋白的B细胞表位。方法应用互联网软件分析Hopp&Woods亲水性(Hydrophilicity)、可及性(Accessibility)、极性(Polarity)及柔韧性(Flexibility)、Welling抗原性(Antigenicity)和二级结构(Secondary structures)等参数,用吴玉章等建立的B细胞表位预测法综合评价。结果多种预测法重复了人巨细胞病毒UL23开放阅读框编码蛋白的N端第27～43、104～119、125～160位氨基酸区域内或附近,该区域含有β转角和无规卷曲结构,极可能是B细胞识别表位。结论为应用合成肽或原核表达大片断蛋白制备抗人巨细胞病毒UL23基因编码蛋白的抗体提供了依据。; 朱峰李弘剑李月琴何智强李实骞张欣周天鸿; 关键词：人巨细胞病毒 B细胞表位

腺病毒介导的人巨细胞病毒UL49基因小鼠模型的建立被引量：1: 2010年; 建立表达HCMVUL49基因的转基因小鼠,为抗病毒药物研究提供有效的实验动物模型。将UL49-GFP基因插入腺病毒穿梭质粒pDC316中,构建重组质粒pDC316-UL49-GFP,与腺病毒骨架质粒pBHGloxΔE1,3Cre通过脂质体介导共转染293细胞,重组产生腺病毒Ad-UL49-GFP,经PCR和Western blot鉴定正确后,大量扩增、纯化,制备高滴度重组腺病毒。纯化腺病毒经尾静脉注射感染小鼠,通过荧光定量PCR和Western blot方法,检测UL49基因在小鼠体内组织分布和表达时相。结果显示UL49基因在小鼠的心、肝、脾、肺、肾组织均有表达,并且表达量由高到低顺序依次是:肝、脾、肾、心、肺,在腺病毒感染第3天在各靶器官表达水平较高,此后逐渐下降,第14天时仅存在肝和脾中。表明表达UL49基因的小鼠模型构建成功。小鼠模型的成功建立为下一步筛选以UL49基因为靶的抗病毒药物奠定了基础。; 杨丹崔延伟李弘剑李月琴周琪曾志锋张欣杨光周天鸿; 关键词：人类巨细胞病毒腺病毒载体动物模型

酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-UL49的构建、表达与鉴定被引量：2: 2009年; 目的构建人巨细胞病毒UL49基因的诱饵表达载体,以利于筛选与pUL49相互作用的蛋白。方法PCR扩增UL49全序列,克隆入pGBKT7,将构建好的pGBKT7-UL49转化到酵母细胞AH109;用蛋白印迹法分析诱饵蛋白的表达,检测诱饵蛋白有无毒性和自激活效应。结果克隆成功pGBKT7-UL49;pG-BKT7-UL49成功转化到AH109,转化细胞AH109[pGBKT7-UL49]表达诱饵蛋白pUL49,pUL49对转化细胞无细胞毒性、无自激活。结论成功构建了酵母诱饵表达载体pGBKT7-UL49,为进一步筛选与pUL49相互作用的蛋白提供了实验基础。; 朱峰李月琴周天鸿何智强李实骞邹奕李弘剑; 关键词：酵母双杂交人巨细胞病毒质粒构建诱饵蛋白

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广东省科技计划工业攻关项目(2006B35502002)