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国家教育部博士点基金([2007]226)
作品数:
1
被引量:3
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2008
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有丝分裂关卡基因致染色体数目异常自然流产胚胎发生的机制
被引量:3
2008年
目的探讨有丝分裂关卡基因(hBUB1)在染色体数目异常自然流产胚胎发生中的可能机制。方法采用实时定量逆转录(RT)-PCR和免疫印迹法(WB)检测染色体数目异常组和正常对照组的自然流产胚胎组织中目的基因在mRNA和蛋白水平的表达;构建针对hBUB1基因的短发卡状(shRNA)表达载体,用细胞免疫化学、WB和实时定量RT-PCR方法评价其对胚胎细胞内源性hBUB1表达的干扰效果;用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)试验测定细胞增殖抑制率;用流式细胞术解析细胞周期分布。结果hBUB1蛋白在染色体数目异常组中的表达显著低于正常对照组(阳性表达率分别为8%和93.5%,P〈0.05)。shRNA的重组质粒表达载体能明显抑制胚胎细胞中hBUB1基因的表达(干扰前后mRNA水平分别为0.196±0.067和0.042±0.006,P〈0.05)。胚胎细胞转染有效干扰质粒48h后,染色体数目异常组细胞增殖抑制率达62%,显著高于正常对照组(4%,P〈0.05)。有效干扰质粒引起G2/M期细胞从对照组的40.2%和41.3%降低至21.3%。结论hBUB1基因表达下调可导致细胞增殖的抑制和周期的改变,在染色体数目异常自然流产胚胎发生中可能起很重要的作用,这将为寻找可靠的临床检测指标奠定基础。
施琼
袁泰先
王箭
翁亚光
王应雄
徐远久
刘子杰
蔡燕
关键词:
胚胎
染色体畸变
蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶
逆转录聚合酶链反应
免疫印迹法
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