河南省自然科学基金(0411042400)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
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- 融合基因pEGFP-C3-B7．2-hTERT诱导小鼠免疫应答及抑制肝癌移植瘤被引量：1
- 2008年
- 目的:构建融合DNA疫苗pEGFP-C3-B7.2-hTERT,观察其诱导小鼠免疫应答的能力和抗小鼠肝癌H22细胞移植成瘤的作用。方法:通过RT-PCR扩增B7.2和hTERTcDNA,以pEGFP-C3为载体构建pEGFP-C3-B7.2-hTERT融合基因质粒,肌肉注射接种C57BL/6小鼠,间隔7d,共3次,以注射接种pEGFP-C3-B7.2、pEGFP-C3-hTERT、pEGFP-C3和PBS为对照。检测免疫小鼠脾淋巴细胞CTL杀伤活性、脾细胞培养上清IL-2和IFN-γ水平、外周血淋巴细胞亚群变化及血清中抗hTERT抗体水平。将融合基因pEGFP-C3-B7.2-hTERT免疫已负荷肝癌细胞H22/hTERT或H22/B7.2的小鼠,观察小鼠成瘤时间、生存时间。结果:琼脂糖凝胶电泳、酶切及序列测定证实,成功构建了融合基因质粒pEGFP-C3-B7.2-hTERT。融合基因免疫小鼠的脾淋巴细胞对B7.2-hTERT阳性靶细胞的杀伤活性明显高于各对照组(P<0.01),每只pEGFP-C3-B7.2-hTERT免疫小鼠都产生了抗体,免疫鼠外周血CD4+、CD8+T细胞和脾细胞培养上清中Th1类细胞因子IFN-γ、IL-2水平较各对照组明显升高(均P<0.01)。pEGFP-C3-B7.2-hTERT融合基因质粒免疫已负荷肝癌细胞H22/hTERT或H22/B7.2的小鼠后,小鼠60d未成瘤,其他各组22d时所有小鼠均已成瘤,60d时均死亡。结论:DNA疫苗pEGFP-C3-B7.2-hTERT在体内能诱导出明显的B7.2-hTERT特异性的抗肿瘤免疫应答,且能抑制体内已经存在的少量肿瘤细胞的成瘤。
- 艾敏杨胜利姜爱华
- 关键词：DNA疫苗B7.2HTERT免疫应答移植瘤
- pEGFP-C3-B7.2-MAGE-1融合蛋白诱导特应性抗肿瘤免疫应答的研究
- 2007年
- 目的:构建重组表达载体pEGFP-C3-B7.2-MAGE-1,研究人B7.2/MAGE-1基因修饰的食管癌细胞作为瘤苗的抗肿瘤作用。方法:通过RT-PCR扩增B7.2和MAGE-1的cDNA,以pEGFP-C3为载体,构建pEGFP-C3-B7.2-MAGE-1重组载体,通过脂质体转染技术转染人食管癌细胞株EC9706,外周血来源的树突状细胞(DC)负载肿瘤抗原后,与自体T淋巴细胞共培养3天,获得细胞毒性T淋巴细胞(CTL),用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测CTL对转染和未转染pEGFP-C3-B7.2-MAGE-1的食管癌细胞EC9706的杀伤活性。结果:CTL对转染pEGFP-C3-B7.2-MAGE-1的肿瘤细胞的杀伤活性大于转染pEGFP-C3和未转染细胞的杀伤活性(P<0.05)。结论:成功构建了真核共表达载体pEGFP-C3-B7.2-MAGE-1,人B7.2/MAGE-1基因修饰的EC9706肿瘤细胞瘤苗,可诱导出明显的抗EC9706细胞的免疫效应。
- 艾敏赵国强张巧杨胜利
- 关键词：B7.2MAGE-1真核表达载体肿瘤免疫
