国家高技术研究发展计划(2006AA10A206)
- 作品数：44 被引量：209H指数：8
- 相关作者：焦新安张培君赵战勤贺云霞孙慧玲更多>>
- 相关机构：华中农业大学扬州大学首都师范大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 大肠杆菌Ee株SLT-IIeB与FedF基因在大肠杆菌中融合表达\及抗血清的中和特性
- 根据猪水肿病大肠杆菌Ee株主要免疫原性片段SLT-IIeB和FedF的基因序列,利用PCR技术克隆目的片段,并将SLT-IIeB和FedF基因依序串联于谷胱甘肽-S-转移酶(GST)表达系统的GST下游,在大肠杆菌中成功...
- 刘国平吴斌林艺远胡长敏郭爱珍金梅林陈焕春
- 文献传递
- 副猪嗜血杆菌外膜蛋白TbpB基因的克隆和表达
- 2011年
- 为了克隆和表达副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)外膜蛋白TbpB基因,试验采用基因工程的方法对已发布的HPS外膜蛋白P5序列进行相关序列分析,设计并合成引物,以HPS血清5型基因组为模板,通过PCR扩增HPS外膜蛋白P5编码基因,获得长为1 116 bp的预期基因片段。该基因编码372个氨基酸的蛋白质,预测分子质量约为41 ku,将该基因片段定向克隆至表达载体pGE X-6p-1中。结果表明:诱导表达后分子质量约为67 ku,与副猪嗜血杆菌阳性血清发生了特异性反应。说明该蛋白与抗体发生了反应,有一定免疫原性。
- 叶飞张培君田德雨孙慧玲王宏俊龚玉梅贺云霞
- 关键词：副猪嗜血杆菌克隆
- 抗菌肽CAP18在大肠杆菌中表达、纯化及活性的初步鉴定被引量：2
- 2008年
- 根据抗菌肽CAP18活性片段的氨基酸序列,采用SOE技术,设计合成了CAP18的编码基因,将其克隆至pMD18-T载体,进行序列测定后亚克隆至pET-32a(+)表达载体中,在E.coli BL21(DE3)中表达融合蛋白CAP18。经Ni2+亲和层析后回收CAP18融合蛋白,纯度达到了85%以上。对纯化的融合蛋白进行酶切,用液体生长抑制方法检测切割后样品的活性,结果表明重组抗菌肽CAP18对大肠杆菌具有抑制活性。
- 徐灵龙石星明王云峰史春林王玫孙妍童光志
- 关键词：融合基因抑菌活性
- 副猪嗜血杆菌15个血清型标准分离株对小鼠毒力的研究被引量：10
- 2011年
- 为了确定Balb/c小鼠是否适合作为副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)的试验动物模型,试验用1～15血清型HPS标准菌株感染Balb/c小鼠,每只小鼠接种量为1.0×109 cfu。结果表明:用血清型1,2,5,10,12,13,14接种的5只小鼠均死亡4只,用血清型4,15接种的5只小鼠分别死亡2,3只,用血清型3,6,7,8,9,11接种的5只小鼠均没有死亡;各血清型的毒力与猪体试验的结果基本相符。说明Balb/c小鼠适合作为副猪嗜血杆菌的试验动物模型。
- 贺云霞徐慧叶飞孙慧玲王宏俊龚玉梅张莉黄秀芬张培君
- 关键词：副猪嗜血杆菌标准菌株小鼠毒力
- 禽致病性大肠杆菌未知功能基因突变株的构建及致病特性分析
- 2015年
- 采用抑制差减杂交技术(SSH)对禽致病性大肠杆菌(APEC)高致病株E037(血清型O78)与非致病菌株K-12 MG1655进行基因组差异片段克隆与分析。从E037株中共检出17个特异性差异片段,选取其中的编号为88#的基因进行突变株的构建。通过PCR扩增出88#的目的基因片段,并插入到T-easy载体的多克隆位点中,随之克隆到p MEG-375自杀性载体中,构建自杀性载体p MEG375-88#,将突变载体转化到受体APEC E037中,根据同源重组原理,筛选出E03788#基因插入突变株E037-1。对21日龄白来航SPF鸡右胸气囊分别接种E037、E037-1株0.1 mL(108cfu/mL),在6,24和48 h分别扑杀SPF鸡,无菌采集血液、心脏、肝、脾、左肺、肾进行细菌学检查,同时进行病变观察。结果显示:接种鸡6 h后,E037-1在肝、脾和肺中的细菌数比E037明显降低,差异极显著(P<0.01);接种鸡24 h后,E037-1在心脏、肝、脾和肺中的细菌数与E037比较有所降低,差异显著(P<0.05);接种鸡48 h后,E037-1在心、肝中的细菌数比E037明显降低,差异极显著(P<0.01),说明E037-1突变株的致病性明显下降。结果显示88#基因可能是APEC的致病相关基因,其功能值得进一步研究。
- 刘静徐亚亚卢炜陈祥高崧
- 关键词：禽致病性大肠杆菌抑制差减杂交
- 稳定携带新城疫病毒DNA疫苗减毒沙门氏菌的构建及其免疫原性
- 采用PCR技术从重组质粒pVAX1-F中扩增出新城疫病毒JS5株的融合蛋白(F)基因,将其克隆入真核表达质粒pmcDNA3.1+中,获得重组表达质粒pmcDNA3.1-F。通过电穿孔转化法将重组质粒转入减毒鼠伤寒沙门氏菌...
- 潘志明程宁宁游猛崔一晨黄金林焦新安刘秀梵
- 关键词：新城疫DNA疫苗减毒鼠伤寒沙门氏菌质粒稳定性免疫效力
- 文献传递
- 支气管败血波氏杆菌dnt基因的克隆、表达及活性鉴定被引量：3
- 2010年
- 通过PCR扩增获得支气管败血波氏杆菌的全长4 395 bpdnt基因,并利用pET-28a/BL21系统对其进行了融合表达。Western-blot检测结果表明,表达产物具有良好的免疫学活性。使用His-band purification kit纯化后,得到纯度为93.2%的融合蛋白HIS6-DNT。在乳鼠皮肤坏死试验中,表达产物HIS6-DNT和天然DNT均能导致乳鼠皮肤产生坏死性病变。在乳鼠皮肤坏死阻断试验中,兔抗HIS6-DNT血清能中和天然DNT,使其失去对乳鼠皮肤的坏死毒性。试验结果表明,重组蛋白具有天然DNT的生物学毒性和免疫原性,所产生的抗体具有中和活性,为DNT的结构和功能研究奠定了基础。
- 赵战勤薛云裴洁王臣丁轲程相朝
- 关键词：支气管败血波氏杆菌
- 猪格拉泽氏病研究新进展
- 副猪嗜血杆菌是(HPS)可引起猪的格拉泽氏病(Glasser’s disease),常与猪流感病毒并发,引起断奶前后仔猪以多发性浆膜炎、关节炎、脑膜炎等临床特征,给养猪业带来很大的损失。本文就近年来副猪嗜血杆菌病的病原学...
- 叶飞贺云霞徐慧孙慧玲王宏俊龚玉梅张培君
- 关键词：副猪嗜血杆菌病原学流行病学致病机理
- 猪水肿病新型亚单位菌苗对小鼠的效力研究被引量：1
- 2016年
- 利用大肠杆菌表达猪水肿病大肠杆菌的水肿毒素SLT-IIe B,提取表达产物包涵体,再加入自行分离的我国流行的猪水肿病大肠杆菌Ee株(O139),和油乳佐剂乳化后制成亚单位菌苗,免疫昆明鼠,间隔2 w加强免疫1次。每次免疫后采血检测毒素的ELISA抗体和Ee株的凝集效价,第2次免疫2 w后用5LD50的猪水肿病大肠杆菌Ee株进行攻毒。结果显示,亚单位菌苗组与灭活菌苗组ELISA抗体水平有显著性差异,两种疫苗对Ee的保护力分别为90%和70%。本研究表明新型亚单位菌苗模式对同型菌株具有较好的保护力,为进一步研制高效的亚单位菌苗打下基础。
- 胡利群刘俞君郭利伟杨小林刘国平
- 关键词：小鼠保护力
- 百日咳杆菌粘附素中针对支气管败血波氏杆菌的保护性抗原肽的筛选被引量：2
- 2010年
- 【目的】本研究通过百日咳杆菌黏附素（PRN）基因的分段克隆表达及其在BALB/c小鼠的主动和被动免疫保护试验筛选PRN中的保护性抗原肽。【方法和结果】利用大肠杆菌进行PRN的完整蛋白、N端和C端多肽及其RⅠ和RⅡ区域多肽（双拷贝）的表达,命名为GST-PRN、GST-PN、GST-PC、GST-2PRⅠ和GST-2PRⅡ。Westernblot检测证实5种表达产物均具有良好的反应原性。在主动免疫保护试验中,5种表达产物均能诱导小鼠产生较高的PRN抗体水平;当使用3LD50的支气管败血波氏杆菌（Bb）强毒株HH0809进行鼻腔攻击后,GST-2PRⅠ的保护率为66.7%（6/9）,其余4者的保护率均为100%（9/9）;当使用10LD50的HH0809攻击时,其保护率分别为77.8%（7/9）、33.3%（3/9）、66.7%（6/9）、10%（1/10）和60%（6/10）。在被动免疫保护试验中,当使用10LD50的HH0809进行腹腔攻击时,GST-2PRⅠ抗血清对小鼠的保护率为20%（2/10）,其余4者的保护率均为100%（10/10）;但经天然PRN吸附后的5种兔抗血清均无任何保护力（0/5）。【结论】本研究表明PRN的N端和C端表达多肽均具有较强的针对Bb的保护力,且C端强于N端;而C端RⅡ区域的保护力也显著强于N端RⅠ区域。
- 赵战勤王臣薛云丁轲张春杰程相朝李银聚刘一尘吴庭才
- 关键词：支气管败血波氏杆菌保护性抗原
