国家教育部博士点基金(2003023002)
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
- 相关作者：韩忠朝马凤霞刘拥军韩之波卢士红更多>>
- 相关机构：中国医学科学院北京协和医学院更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 重组凝血酶敏感蛋白-1N端片段对CD36表达阴性的ECV304细胞增殖的抑制
- 2006年
- 目的:构建凝血酶敏感蛋白-1N端片段(TSF)的原核表达体系,测定重组蛋白的活性。方法:从人脐静脉内皮细胞cDNA中扩增得到thbs1基因片段,克隆到pET32c(+)载体系统并转化 BL21大肠杆菌,表达纯化得到TSF。MTT法体外测定目的蛋白对ECV304细胞增殖的抑制作用。免疫荧光标记流式细胞仪测定CD36的表达。结果:获得了原核表达的重组TSF蛋白。目的蛋白对CD36阴性的ECV304细胞有增殖抑制作用。结论:低剂量重组TSF蛋白是一个具有临床应用前景的抗肿瘤治疗的辅助方法。
- 王黎芳周毓玲顾洁韩忠朝
- 关键词：表达纯化
- 人促血液血管细胞生成素的原核表达及兔抗体的制备被引量：2
- 2006年
- 目的:表达人促血液血管细胞生成素(hemangiopoi-etin,HAPO)蛋白并制备兔抗HAPO抗体。方法:利用硫氧还原蛋白TrxA融合表达载体(pET32c),表达可溶性HAPO。表达的HAPO融合蛋白经亲和层析快速纯化,并通过Westernblot进行鉴定。以纯化的人HAPO免疫新西兰大白兔,制备抗体并测定其效价。结果:获得高效表达并纯化的HAPO蛋白。制备的兔抗人HAPO抗体的免疫双扩散的效价为1∶8。结论:建立了HAPO基因的原核表达载体和快速纯化体系并制备出兔抗HAPO的抗体,为研制检测HAPO的ELISA试剂盒奠定了基础。
- 任倩刘拥军徐斌韩之波卢士红马凤霞陈钟韩忠朝
- 关键词：抗体制备
- 人促血液血管细胞生成素的高效表达和快速纯化
- 2005年
- 目的构建人促血液血管细胞生成素(HAPO)的表达载体,获得纯化的HAPO蛋白并研究其生物学功能。方法通过PCR方法扩增人HAPO基因,克隆于不同的原核表达载体,ITPG诱导融合蛋白表达。NTA层析柱纯化融合蛋白,再经肠激酶裂解融合蛋白,阳离子交换层析纯化,得到纯化的重组蛋白。用培养的MO7e和ECV-304细胞检测蛋白活性。结果HAPO可在pET32C中,获得稳定高效的可溶性表达。在E coli BL21(DE3)中,HAPO表达量可占菌体总蛋白的10%左右。重组蛋白80%是以可溶性蛋白形式存在。NTA层析柱纯化得到的HAPO融合蛋白,再经肠激酶裂解,阳离子交换层析纯化,得到90%以上纯度的重组HAPO蛋白,并且具有良好的生物学活性。结论得到具有90%以上纯度的重组HAPO蛋白,而且,对MO7e和ECV-304细胞具有促增殖的作用。我们获得了纯化的人重组HAPO蛋白,为进一步研究其功能及临床应用打下基础。
- 任倩刘拥军徐斌韩之波卢士红马凤霞韩忠朝
- 关键词：融合蛋白纯化层析纯化细胞生成素ECV-304细胞
