国家自然科学基金(81070478)
- 作品数：6 被引量：4H指数：1
- 相关作者：马廉谢丽春赖秀蓝刘思征杨汉华更多>>
- 相关机构：汕头大学医学院第二附属医院深圳大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省医学科学技术研究基金汕头市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人脐血及脐带间充质干细胞的分离培养及表面标记分析被引量：1
- 2012年
- 目的探讨从人脐带血及脐带分离和培养间充质干细胞(MSCs)的方法,并分析MSCs的表面标记。方法人脐带血按常规方法制备单个核细胞,利用MSCs贴壁生长的特性,经培养、换液、传代纯化MSCs;分离脐带华尔通胶(Wharton's jelly),采用组织块贴壁法获得脐带MSCs并传代。将传代的MSCs冻存,1个月后再复苏,观察复苏后MSCs的生长情况。利用FACScan流式细胞仪检测脐带血及脐带细胞表面抗原。结果经过传代后,贴壁细胞形态趋于同一。人脐血及脐带MSCs体外生长形态相似,类似成纤维细胞,可以稳定增殖和传代。经冷冻保存,复苏后仍能较好生长。人脐血及脐带来源的MSCs表面标记CD29、CD44、CD59高表达,而表面标记CD14、CD33、CD34和CD45低表达。结论人脐带血及脐带均可分离出MSCs,在体外能扩增纯化及冻存复苏,为组织工程提供丰富的细胞来源。
- 冯学永马廉霍霞蒋纪恺刘小珊
- 关键词：脐带血脐带间充质干细胞
- 诱导多能干细胞的研究进展
- 2013年
- 诱导多能干细胞(iPSC)是一种具有胚胎干细胞(ESC)样多胚层分化潜能细胞。相对ESC而言,iPSC无伦理道德方面的担忧。本文就iPSC的诱导方案、形成机制及其应用进展作一综述。
- 刘思征马廉
- 关键词：诱导多能干细胞重编程胚胎干细胞
- 间充质干细胞的临床应用及产业化前景被引量：1
- 2016年
- 间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）是一类广泛存在于骨髓、脐带、胎盘和脂肪等组织的成体干细胞。国际细胞治疗协会对MSCs的鉴定标准是：在标准培养条件下能粘附生长,表达CD105、CD73和CD90,不表达CD45、CD34、CD14或CD11b、CD79a或CD19,
- 赖秀蓝马廉
- 关键词：间充质干细胞成体干细胞成软骨脐带血细胞生物学特性自我复制
- 人脐带间充质干细胞与sertoli细胞共培养下向男性生殖细胞分化的研究被引量：1
- 2016年
- 目的探讨用睾丸支持细胞(SCs)模拟的睾丸微环境,通过共培养技术诱导人脐带间充质干细胞(HUMSCs)向男性生殖细胞分化的可能性,为男性不育治疗寻求一种新的途径。方法采用差异贴壁法分离、培养、扩增出HUMSCs,从新生昆明小鼠的睾丸中分离培养出SCs,制备SCs饲养层,将HUMSC:s加入SCs饲养层中共培养,显微镜观察诱导前及诱导后第7 d、14 d细胞的形态学变化;RT-PCR、细胞免疫荧光检测男性生殖细胞相关标记DAZL、VASA及Stella的表达。结果 HUMSCs在共培养体系中逐渐失去细小成纤维样的形状,形成类似精原细胞样的圆形细胞菌落,诱导7 d、14 d后,RT-PCR、细胞免疫荧光均可以检测到男性生殖细胞特异性标记VASA、DAZL及Stella的表达。结论在睾丸SCs模拟的睾丸微环境,HUMSCs不仅发生形态学的变化,而且能表达生殖细胞的特异生物学特性,表明在特定的微环境中,细胞与细胞间的相互接触是微环境中控制HUMSCs向男性生殖细胞方向分化的必不可少的因素。SCs与HUMSCs的直接接触诱导其向男性生殖细胞分化的诱导研究,为迫切需要的男性不育治疗提供了一个新的实验参考系统。
- 谢丽春杨汉华赖秀蓝陈晓东陈业增刘思征马廉
- 关键词：人脐带间充质干细胞男性生殖细胞睾丸支持细胞
- 重组慢病毒载体的构建及其感染人脐带间充质干细胞的研究
- 2014年
- 目的 利用包装制备的重组慢病毒载体感染人脐带间充质干细胞,为后续的细胞重编程奠定基础.方法 利用组织块贴壁法分离、培养、扩增出人脐带间充质干细胞（HUMSC）.携带目的基因（oct4、sox2、klf4、c-myc）及绿色荧光蛋白的质粒经验证、扩增后,转染HEK-293T细胞,制备携带上述基因的慢病毒上清液.荧光显微镜下梯度稀释法检测病毒滴度.慢病毒液感染3～5代生长良好的HUMSC,荧光显微镜及流式细胞术检测病毒感染力,RT-PCR及定量PCR检测目的基因mRNA水平.结果 成功验证、扩增携带目的基因的质粒.制备的新鲜病毒液滴度达5×108U/mL,冻存后降为5×106 U/ml.重组慢病毒感染HUMSC的感染力高于80％,4种目的基因的表达均明显高于对照.结论 重组慢病毒载体可以在体外高效的转染HUMSC,并稳定表达目的基因,是HUMSC重编程的有效基因转移载体.
- 刘思征赖秀蓝陈元国贺谷雨Martín Maldonado林丽敏谢丽春吴卫照黄天华蔡志伟刘必刚马廉
- 关键词：重组慢病毒载体人脐带间充质干细胞细胞重编程
- 六个转录因子将人脐带间充质干细胞高效重编程为诱导性多能干细胞的实验研究被引量：1
- 2014年
- 目的建立人脐带间充质干细胞（HuMSCs）来源的诱导性多能干细胞（iPSC）系。方法以慢病毒载体将OCT4、SOX2、KLF4、c—Myc、NANOG、LIN-286个转录因子转入HuMSCs使其重编程为iPSC。通过形态学观察、多能细胞特异性标志检测、碱性磷酸酶（AKP）染色、核型分析、拟胚体形成、体内成瘤实验鉴定获得的iPSC。结果慢病毒感染后第4天，HuMSCs逐渐变成类圆形，第10天开始出现不规则细胞团，第14天出现较大的细胞团，约1．25％的细胞重编程为iPSC。建系后iPSC呈典型的克隆状生长，边缘清晰，内部细胞细小，排列紧密；AKP染色阳性；表达多能性相关基因及胚胎干细胞特异性蛋白；细胞核型正常（46，XY）；体内外均能向3个胚层方向分化。结论慢病毒携带OCT4、SOX2、KLF4、c-Myc、NANOG、LIN-286个因子能将HuMSCs高效诱导为完全重编程的iPSC。
- 杨汉华陈元国赖秀蓝谢丽春郑泽鑫蒋学武马廉
- 关键词：脐带间充质干细胞诱导性多能干细胞转录因子慢病毒载体
