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杭州市科技计划项目(20100633804)
作品数:
1
被引量:1
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相关作者:
范大鹏
陈光
余道军
吴盛海
徐丽慧
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相关机构:
杭州市红十字会医院
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发文基金:
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相关领域:
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作者
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陈光
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范大鹏
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年份
1篇
2012
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基于DPO的四重荧光PCR检测常见分枝杆菌方法的建立与应用
被引量:1
2012年
目的利用多重荧光PCR技术,建立一种快速、准确、特异的检测常见分枝杆菌的方法。方法以分枝杆菌16SrRNA作为检测靶基因,设计双启动寡核苷酸(DPO)引物和TaqMan探针,探针的5’端分别用FAM、ROX、HEX和JOE进行荧光标记,3’端标记淬灭荧光。通过对4种分枝杆菌标准株基因组DNA的扩增,评价多重荧光PCR方法的特异性和灵敏度。采用建立的多重荧光PCR方法,采用该方法检测2010年6至12月杭州市红十字会医院68例结核科住院患者清晨痰液标本,结果与细菌培养和抗酸染色镜检进行比较。采用,检验比较3种方法的阳性率。结果该方法可准确、特异地鉴定结核分枝杆菌和3种常见非结核分枝杆菌,检测灵敏度均为1×10^cfu/ml。对68份痰液标本进行检测,结果显示31份检测结果阳性,阳性率45.6%,明显高于涂片染色镜检(阳性率14.7%),差异具有统计学意义(x2=15.4,P〈0.05),其中28例为结核分枝杆菌,1例为鸟分枝杆菌,2例为胞内分枝杆菌,与细菌培养鉴定方法一致。1例培养阳性而PCR检测结果阴性标本经16SrRNA扩增测序鉴定为龟分枝杆菌。结论本研究建立的多重荧光PCR方法敏感、特异、快速,能有效检测结核分枝杆菌和常见非结核分枝杆菌,可用于分枝杆菌感染者的实验室快速诊断。
陈光
吴盛海
余道军
徐丽慧
范大鹏
王贤军
关键词:
分枝杆菌属
多重聚合酶链反应
DNA引物
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