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广西壮族自治区自然科学基金(0447025)

作品数:5 被引量:7H指数:2
相关作者:李学军李永敢宋善俊孙碧红魏华萍更多>>
相关机构:广西壮族自治区人民医院华中科技大学哈尔滨血液病肿瘤研究所更多>>
发文基金:广西壮族自治区自然科学基金更多>>
相关领域:医药卫生更多>>

文献类型

  • 5篇中文期刊文章

领域

  • 5篇医药卫生

主题

  • 3篇凝血
  • 2篇真核
  • 2篇真核表达
  • 2篇凝血酶
  • 2篇凝血酶原
  • 2篇凝血酶原酶
  • 2篇克隆
  • 2篇活性
  • 2篇基因
  • 2篇核表达
  • 2篇FGL2
  • 2篇促凝
  • 2篇促凝活性
  • 1篇血栓
  • 1篇血栓形成
  • 1篇原核表达
  • 1篇质粒
  • 1篇生物信息
  • 1篇生物信息学
  • 1篇生物信息学分...

机构

  • 5篇广西壮族自治...
  • 3篇华中科技大学
  • 1篇哈尔滨血液病...

作者

  • 5篇李学军
  • 4篇李永敢
  • 3篇宋善俊
  • 3篇孙碧红
  • 1篇阳文捷
  • 1篇夏凌辉
  • 1篇魏文宁
  • 1篇许力
  • 1篇魏华萍
  • 1篇张灏

传媒

  • 2篇华中科技大学...
  • 1篇医学综述
  • 1篇临床血液学杂...
  • 1篇重庆医学

年份

  • 1篇2012
  • 1篇2011
  • 1篇2010
  • 1篇2009
  • 1篇2007
5 条 记 录,以下是 1-5
排序方式:
人fgl2凝血酶原酶cDNA的克隆、序列分析及真核表达载体的构建
2010年
目的:克隆人fgl2凝血酶原酶cDNA,分析其序列组成,构建真核表达载体。方法:从外周血单个核细胞中提取总RNA后,应用RT-PCR方法扩增fgl2凝血酶原酶cDNA,目的基因与pcDNA3真核表达载体连接,经酶切和测序鉴定,应用软件分析其序列。结果:克隆了人fgl2凝血酶原酶cDNA全长序列,所扩增的cD-NA序列与genebank中发布的序列一致,构建的pcDNA3-fgl2真核表达载体与所设计的完全一致。结论:成功地克隆了人fgl2凝血酶原酶cDNA,构建了其真核表达载体,为研究其生物学功能奠定了基础。
李学军夏凌辉宋善俊孙碧红李永敢
关键词:基因克隆真核表达
人fgl2凝血酶原酶FRED结构域的原核表达、纯化及其凝血活性的鉴定被引量:5
2009年
目的建立人fgl2凝血酶原酶纤维蛋白原相关结构域(fibrinogen-related domain,FRED)的原核表达系统,并鉴定表达蛋白的凝血活性。方法应用RT-PCR从外周血单个核细胞扩增fgl2凝血酶原酶FRED基因,克隆到原核表达载体pET22b(+),以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导重组蛋白表达,重组蛋白经SDS-PAGE电泳和免疫印迹鉴定并用His-Tag柱纯化,以促凝活性(procoagulant activity,PCA)检测鉴定其凝血功能。结果扩增了人fgl2凝血酶原酶FRED基因,成功构建了重组pET-FRED原核表达质粒,表达的融合蛋白具有直接促凝血活性。结论建立了人fgl2凝血酶原酶FRED的高效原核表达系统,FRED可能为fgl2凝血酶原酶促凝血的活性区域。
李学军宋善俊李永敢阳文捷许力魏华萍
关键词:原核表达促凝活性
hfgl2凝血酶原酶基因5′端调控序列的克隆及生物信息学分析
2012年
目的扩增人纤维蛋白原样蛋白2(hfgl2)凝血酶原酶基因5′端调控序列,构建荧光素酶报告基因表达载体,对hfgl2基因5′侧翼启动子序列进行生物信息学分析,预测可能的调控区域及顺式作用元件。方法用聚合酶链反应(PCR)法从人外周血单个核细胞基因组DNA中扩增hfgl2凝血酶原酶基因5′端调控序列,PCR产物酶切后克隆至pGL3-Basic载体,重组质粒行酶切及测序鉴定,使用在线分析软件对5′端调控序列中的转录因子结合位点及启动子序列进行预测。结果扩增了长度为1 567bp的hfgl2凝血酶原酶基因5′端序列,酶切及测序鉴定证实构建的pGL3-hfgl2质粒插入片段正确无误,分析显示该基因序列共含有138个、31种顺式作用元件。结论构建hfgl2基因近端启动子转录调控序列荧光素酶报告基因的表达载体为研究hfgl2的转录调控奠定了基础。
李学军张灏李永敢孙碧红
关键词:转录启动子质粒转录调控顺式作用元件
人fgl2凝血酶原酶基因的真核表达及其凝血功能研究被引量:3
2011年
目的将人fgl2凝血酶原酶基因进行真核表达,了解表达蛋白的分布特点,初步研究其凝血活性。方法将pcDNA3-fgl2重组质粒转化大肠埃希菌,利用脂质体转染至HL-60细胞;RT-PCR法检测其fgl2凝血酶原酶mRNA的表达,间接免疫荧光法标记fgl2凝血酶原酶蛋白,应用激光共聚焦显微镜观察其分布,流式细胞仪检测fgl2凝血酶原酶蛋白在细胞膜的表达;并通过检测转染细胞的促凝活性(PCA)分析其凝血功能。结果 pcDNA3-fgl2真核表达质粒在HL-60细胞中进行了瞬时表达,转染细胞可见明显的fgl2凝血酶原酶mRNA条带。激光共聚焦显微镜观察到转染细胞胞质中可见明显的绿色荧光,流式细胞仪在转染细胞胞膜上未检测到明显的蛋白表达。转染pcDNA3-fgl2重组质粒细胞的PCA明显增高且依赖于凝血酶原。结论成功地将fgl2凝血酶原酶基因在HL-60细胞中进行了瞬时表达;fgl2凝血酶原酶主要在胞质中表达,细胞膜上无分布并可能分泌到细胞外;凝血功能分析显示fgl2凝血酶原酶具有直接激活凝血酶原的功能。
李学军宋善俊魏文宁李永敢孙碧红
关键词:真核表达促凝活性激光共聚焦显微镜
凝血因子fgl2凝血酶原酶研究现状
2007年
fgl2凝血酶原酶是一种直接激活凝血酶原的凝血因子。反式因子通过与小鼠fgl2凝血酶原酶基因启动子中正性调控结构域结合而对其表达进行调控,人fgl2凝血酶原酶基因的表达调控可能之相似。作为一种免疫-凝血的中介物,fgl2凝血酶原酶在病毒引起的肝损伤、自发性流产及移植排斥反应等病理过程中发挥重要的作用。
李学军
关键词:基因表达血栓形成
共1页<1>
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