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5-氮杂-2’-脱氧胞苷和4-苯基丁酸对慢性粒细胞白血病细胞的miR-196b表达水平有协同作用: 2014年; 目的探讨慢性粒细胞白血病细胞中影响miR-196b表达水平的表观遗传学因素。方法分别采用DNA甲基化转移酶抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-2’-dc)、组蛋白去乙酰化酶抑制剂4-苯基丁酸(PBA)和两者联合处理K562细胞,采用实时定量PCR(Real-time PCR)检测miR-196b的表达水平变化。结果 PBA的半数抑制浓度为1.58mmol/L。和正常人骨髓细胞miR-196b的表达水平相比,Aza组、PBA组和阴性对照组miR-196b的表达水平显著降低且基本一致,Aza+PBA组miR-196b的表达水平和正常人表达水平基本一致。结论单独使用5-Aza-2’-dc或PBA不能使K562细胞中miR-196b的表达恢复正常,两者联合使用共同处理K562细胞,可使miR-196b的表达恢复正常,表明K562细胞中miR-196b的表达水平和基因组甲基化及组蛋白乙酰化均有关系。; 刘玥帅春李杰生尹虹宋艳斌马文丽; 关键词：组蛋白乙酰化 K562细胞实时定量聚合酶链反应

miR-196b慢病毒表达载体的构建和功能鉴定被引量：4: 2014年; 目的构建携带miR-196b的慢病毒表达载体,为研究miR-196b在慢性粒细胞白血病中的功能及其对慢粒发生发展的作用奠定基础。方法以人骨髓细胞基因组DNA为模板,PCR法扩增miR-196b的前体序列,慢病毒表达载体plVTHM构建重组载体plVTHM-miR-196b,并包装病毒和进行滴度测定。用病毒液感染K562细胞,通过荧光观察转染效率和报告基因表达效率,用流式细胞仪分选感染后绿色荧光蛋白阳性的K562细胞,再用实时荧光定量PCR测定细胞内miR-196b的表达水平。最后用CCK-8法检测各组细胞的增殖情况。结果成功构建了plVTHM-miR-196b慢病毒表达载体;载体中绿色荧光蛋白有较好的表达活性;与对照组细胞相比,试验组miR-196b表达水平有显著提升(P<0.05);K562细胞稳定过表达miR-196b后增殖水平显著下降(P<0.05)。结论成功构建了miR-196b过表达载体,并在K562细胞内稳定高表达,miR-196b有抑制K562细胞增殖的作用。; 刘玥帅春尹虹宋艳斌马文丽; 关键词：慢病毒表达载体

miR-30a表达载体构建、病毒包装和表达活性的检测被引量：1: 2014年; 目的构建携带miR-30a的慢病毒表达载体，为研究miR-30a在慢性粒细胞白血病中的作用机制及对伊马替尼耐药性的影响奠定基础。方法提取人骨髓细胞基因组DNA，扩增miR．30a的前体序列，克隆到plVTHM慢病毒表达载体上，测序鉴定。重组载体进行病毒包装，感染K562细胞，测定病毒滴度。感染的K562细胞用流式细胞仪分选带有绿色荧光的GFP阳性的细胞，对分选的细胞用实时荧光定量PCR法检测miR-30a在细胞内的表达水平。最后用CCK-8法检测各组细胞的增殖情况。结果重组慢病毒表达载体测序完全正确；病毒滴度检测为6×106TU／mL；选用160μL 病毒液／1mL培养基感染K562细胞；感染的K562细胞中miR-30a的表达水平显著增强（P〈0．05）；过表达miR-30a后K562细胞增殖水平显著下降（P〈0．05）。结论成功构建了miR-30a慢病毒表达载体，并可在K562细胞中稳定表达，且miR-30a有抑制K562细胞增殖的作用。; 刘玥帅春尹虹宋艳斌马文丽; 关键词：慢病毒表达载体

活细胞计数试剂盒在检测5-氮杂-2’-脱氧胞苷对慢性粒细胞白血病细胞的增殖抑制作用中的应用被引量：1: 2014年; 目的探讨活细胞计数试剂盒(CCK-8)在检测5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-2’-dc)对慢性粒细胞白血病细胞的增殖抑制作用中的应用。方法采用CCK-8检测不同浓度5-Aza-2’-dc对K562细胞的增殖抑制作用,并检测其半数抑制浓度对K562细胞的细胞周期和凋亡的影响。结果 5-Aza-2’-dc的半数抑制浓度为15.55nmol/L,采用该浓度处理K562细胞后,G2期发生阻滞,增殖抑制,并出现凋亡峰。结论不同浓度的5-Aza-2’-dc对K562细胞增殖的抑制作用不同,且呈浓度依赖关系。CCK-8检测法可运用于甲基化转移酶抑制剂对人慢性粒细胞白血病细胞增殖的影响。; 刘玥帅春李杰生尹虹宋艳斌马文丽; 关键词：K562 增殖

miRNA-196b过表达对K562细胞增殖、凋亡及survivin、Cox-2表达的影响被引量：5: 2013年; 背景与目的:BCR-ABL融合基因是慢性粒细胞白血病发病的分子病理基础,也是诊断慢性粒细胞白血病、观察疗效、评估预后等的有效指标。miRNA-196b在急性粒细胞白血病中低表达并对疾病的发展起主要作用。在慢性粒细胞白血病中miRNA-196b的靶基因为BCR-ABL,miRNA-196b过表达抑制BCR-ABL融合基因的表达。生存素(survivin)是BCR-ABL的一个下游基因,已在多种肿瘤中发现survivin与环氧化酶-2(Cox-2)协同调节细胞的增殖凋亡。本研究旨在探讨miRNA-196b过表达对K562细胞增殖、凋亡及survivin、Cox-2 mRNA表达的影响。方法:实验分为K562-196b组、空载K562-pLV组与K562组,采用CCK-8法检测细胞增殖;采用AnnexinⅤ-PE检测细胞凋亡;采用实时荧光定量PCR法检测Cox-2、survivin mRNA的表达情况。结果:miRNA-196b过表达可以明显抑制K562细胞增殖;K562-196b组细胞凋亡率显著高于K562组(P<0.05);miRNA-196b组中survivin基因显著低表达(P<0.05),Cox-2基因中无明显变化(P>0.05)。结论:miRNA-196b对K562细胞的增殖抑制和诱导凋亡有显著作用;miRNA-196b过表达可下调survivin基因的表达,为miRNA-196b作为慢性粒细胞性白血病的治疗靶点提供了依据。; 尹虹刘玥郑文岭宋艳斌马文丽; 关键词：K562细胞

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广东省科技计划工业攻关项目(2012B031800135)