山东省自然科学基金(Q99015)
- 作品数：8 被引量：15H指数：3
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- 病毒编码的miRNA:基因表达新的调控因子
- 2007年
- 微小RNA(microRNA,miRNA)是一类长约22个核苷酸的RNA,在数量、序列、结构、表达和功能上具有多样性。目前,通过生物信息学手段和分子克隆方法,已发现了3518种miRNA,在控制细胞的生长发育、分化、凋亡等过程中发挥着十分重要的作用。最近研究发现疱疹病毒、多瘤病毒、逆转录病毒的某些病毒基因组也能够编码miRNA,这些miRNA在调控病毒基因自身表达以及病毒与宿主相互作用方面可能起重要的作用。某些病毒甚至能够利用宿主体内的miRNA调控其自身表达。找出病毒可能编码的miRNA,探索其对病毒感染、复制、表达的作用,有助于病毒分子生物学的研究,也会为研发防治病毒的新方法和新途径提供新的思路。
- 戚鹏韩金祥鲁艳芹
- 关键词：MIRNA基因调控生物信息学CDNA克隆
- 逆转录病毒靶向介导HDV核酶体外抑制HBV表达被引量：4
- 2007年
- 目的包装携带HDV核酶的肝细胞靶向性逆转录病毒载体,并检测体外HDV核酶对乙型肝炎病毒表达的影响。方法采用脂质体法,分别包装出携带针对HBV不同基因组区域的HDV核酶的肝细胞靶向性重组逆转录病毒,感染HepG2215细胞,ELISA及荧光定量PCR检测HDV核酶对乙型肝炎病毒表达的抑制作用。结果pMSCV-U6-PreS2-Rz和pM-SCV-U6-C-Rz对乙型肝炎病毒表面抗原抑制率明显高于其他HDV核酶和对照组,分别达80%和85%,且高于脂质体转染介导的同种核酶对乙型肝炎病毒表面抗原表达的抑制率。结论靶向性重组逆转录病毒能够携带HDV核酶进入HepG2215细胞,并且对乙型肝炎病毒的表达有较高的抑制作用,为抗病毒治疗的研究奠定了基础。
- 戚鹏韩金祥鲁艳芹王传玺
- 关键词：HDV核酶乙型肝炎病毒
- 抗乙型肝炎病毒HDV核酶的研究新进展
- 2005年
- 乙型肝炎病毒 (HBV)是严重威胁人类健康的一种病毒 ,特别是在我国约有 1 2亿人为HBV携带者 ,占世界的 1 3。对已感染HBV者 ,常用的化学及免疫疗法通常无效。今年来 ,研究者试图利用反义技术 ,通过在基因表达水平上抑制HBV的复制 ,来达到治疗HBV感染的目的。核酶是具有RNA裂解活性的RNA分子 ,能特异地结合并切割靶RNA分子。HDV核酶是唯一在人体细胞天然具有裂解活性的核酶类型 ,研究将HDV核酶作为HBV的反义抑制剂可能有着其独特的优势。本文就HDV核酶靶位点的筛选、病毒载体导入系统、靶向性分子的构建等热点问题的研究新进展予以综述。
- 王传玺韩金祥鲁艳芹
- 关键词：HDV核酶HBV携带者抗乙型肝炎病毒RNA分子靶位点基因表达水平
- 丁型肝炎病毒核酶的结构特点与催化作用机制被引量：3
- 2003年
- 丁型肝炎病毒 (HDV)核酶是小核酶的一种 ,在分子结构和作用机制等方面都有许多不同于其它核酶的特性。以其晶体结构的揭示为基础 ,近几年对其立体构型及催化机制方面的研究取得了很大进展 ,尤其是发现HDV核酶的胞嘧啶侧链在生理条件下能发挥一般酸碱催化作用(generalacid basecatalysis) ,引起了极大关注。对HDV核酶结构和催化机制的研究 ,将使核酶被有目的地改造 ,并极大地推动它在应用方面的研究。
- 孟斌温博贵韩金祥
- 关键词：结构特点核酶
- 靶向肝细胞重组逆转录病毒载体的构建
- 2007年
- 目的:包装5种携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的重组逆转录病毒,筛选肝细胞靶向性好的病毒载体。方法:在前期构建的融合表达质粒基础上,构建4种新的表达质粒,采用脂质体法将这5种质粒分别与质粒pL-EGFP共转染已稳定表达Gag-Pol蛋白的NIH3T3包装细胞系中,48 h后收获病毒上清,分别感染肝源性HepG2215细胞及非肝源性293T细胞,48 h后提取细胞总RNA,荧光定量PCR比较重组病毒的靶向性。结果:酶切鉴定结果表明4种新的表达质粒构建成功,包装的病毒滴度约为105cfu/ml,以pcDNA3.1(-)-envm-preS1-S2质粒包装的病毒有较好的肝细胞靶向性。结论:包装的肝细胞靶向性好的重组逆转录病毒载体,为包装携带HDV核酶的病毒载体以及HDV核酶抑制乙型肝炎病毒复制表达的研究奠定了基础。
- 戚鹏韩金祥鲁艳芹王传玺
- 关键词：肝细胞逆转录病毒科DNA突变分析聚合酶链反应
- 丁型肝炎病毒核酶反式切割HBV mRNA片段的实验研究被引量：6
- 2003年
- 目的 探讨反式作用丁型肝炎病毒 (HDV)核酶体外切割乙型肝炎病毒 (HBV)mRNA片段的可行性。方法 将化学合成的核酶cDNA克隆到含有T7启动子的载体PGEM 4Z中。利用体外转录技术转录出核酶及底物 ,研究其体外切割活性。利用E H作图法进行核酶的酶促动力学研究。结果 在体外实验中显示两酶均能成功的将底物切割 ,37℃温浴 90min的切割百分率为 5 0 %和5 1%。利用E H作图法进行的酶促动力学研究中求得Rc1、Rc2的Km值分别为 0 6 1μmol L、0 5 8μmol L,Kcat值分别为 :0 6 4·min 1 、0 6 0·min 1 。结论 反式作用HDV核酶对非HDV底物 HBVmRNA片段的成功切割为寻找新的HBV的反义抑制手段开辟了途径。
- 潘光锦韩金祥
- 关键词：丁型肝炎病毒核酶HBV乙型肝炎病毒体外切割
- 基因转移技术中几种常见的病毒载体被引量：3
- 2004年
- 在疾病的基因治疗过程中 ,需要用直接或间接的方法把目的基因导入细胞 ,使目的基因得到表达 ,或封闭、剪切致病基因的mRNA介导其特异性地降解 ,而达到治疗疾病的目的。介绍目前病毒载体基因转移技术中最常用的载体如逆转录病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒 (adeno associatedvirus,AAV)
- 王传玺韩金祥鲁艳芹
- 关键词：病毒载体基因治疗
- 肝细胞靶向性系统表达载体的构建被引量：4
- 2004年
- 在肝脏疾病的基因治疗过程中,为把目的基因定向导入靶细胞,构建了具有靶向性的逆转录病毒的包装细胞,即应用RT-PCR方法分别反转录并扩增env、pres2基因,将它们分别克隆至pGEM-T载体上,经测序正确后,将一目的基因亚克隆在pcDNA3.1(-)表达载体上,然后将另一目的片段从T载体上切下,克隆至经同样酶切的重组表达载体中。从而成功地构建了肝细胞靶向性系统的表达载体pcDNA3.1(-)-env-pres2和pcDNA3.1(-)-pres2-env。
- 王传玺韩金祥鲁艳芹高雪芹张翠
- 关键词：靶向性PCDNA3包装细胞逆转录病毒T载体目的基因
