湖北省科技攻关计划(2003AA101C22)
- 作品数：3 被引量：24H指数：3
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- 枯草芽孢杆菌寡聚-1,6-葡萄糖苷酶基因在毕赤酵母中的表达研究被引量：7
- 2005年
- 根据枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)寡聚-1,6-葡萄糖苷酶基因序列设计引物,以pHBM003为模板,扩增得到寡聚-1,6-葡萄糖苷酶基因,克隆至毕氏酵母(Pichia pastoris)表达载体pHBM905上,获得重组毕氏酵母表达载体pHBM9053.将此质粒分别转化毕氏酵母GS115、KM71和SMD1168菌株,筛选获得重组毕赤酵母GS115(pHBM9053)、KM71(pHBM9053)和SMD1168(pHBM9053);然后进行摇瓶诱导培养,这3株毕氏酵母分别在诱导培养60 h、48 h和24 h后,酶活力达到最高,对应为2.233 u/mL、0.34 u/mL和1.235 u/mL;GS115(pHBM9053)所产寡聚-1,6-葡萄糖苷酶的最适反应温度为75 ℃,最适反应pH值为6,在30～75 ℃、pH 8～9范围内较稳定.
- 蒋思婧张维林马立新
- 关键词：枯草芽孢杆菌毕赤酵母基因表达
- 一种载体构建的新方法:一步克隆法被引量：14
- 2007年
- 报道一种载体构建的新方法,在PCR引物设计时,相连片断设计15 bp同源序列,PCR克隆目的片段后,产生多个首尾具同源末端的片段,然后进行多片段定向连接、转化和重组子鉴定.以4片段拼接的叶绿体单交换质体载体pSMGA(pBluescriptⅡSK(+)-man-gfp-aadA)的构建为例,应用上述方法构建仅需做一次连接、转化即可.该方法设计操作相对简便,无需中间载体的构建,减少连接和转化次数.利用该法构建了10多个6 kb以内的载体,证明这是一种简便、通用、高效并值得推广的构建小载体的方法.
- 欧阳平李玉严红马立新
- 关键词：水稻
- 克鲁维酵母中外切菊粉酶基因在毕赤酵母中的表达研究被引量：3
- 2006年
- 用PCR的方法从克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)ATCC12424中克隆出外切菊粉酶基因.将该基因克隆到毕赤酵母表达载体pHBM905C、pHBM906上,构建了外切菊粉酶毕赤酵母表达载体pHBM1200、pHBM1201.将两者转化毕赤酵母GS115,得到重组菌株GS115(pHBM1200)、GS115(pHBM1201),将这两种重组菌株进行摇瓶发酵,测得带α-信号肽的菌株GS115(pHBM1200)表达的外切菊粉酶最高酶活为89.43 U/mL,带自身信号肽的菌株GS115(pHBM1201)表达的外切菊粉酶最高酶活为14.828 U/mL.SDS-PAGE电泳表明,外切菊粉酶的表观分子量为90 kD.将外切菊粉酶用去糖基化酶endoH处理后,SDS-PAGE电泳表明,分子量为60 kD,和预计的分子量一致.
- 祝林陈晶晶舒望云王博马立新
- 关键词：克鲁维酵母毕赤酵母基因表达
