江苏省博士后科研资助计划项目(2004B)
- 作品数：5 被引量：21H指数：3
- 相关作者：高建平景抗震程文张征宇葛京平更多>>
- 相关机构：南京军区南京总医院华中科技大学更多>>
- 发文基金：江苏省博士后科研资助计划项目江苏省“六大人才高峰”高层次人才项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- RNA干扰人端粒酶逆转录酶基因对膀胱尿路上皮癌BIU-87细胞株端粒酶活性抑制的研究被引量：3
- 2008年
- 目的:探讨RNA干扰技术使人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因沉默,对膀胱尿路上皮癌BIU-87细胞株端粒酶活性的抑制作用。方法:针对hTERT基因设计构建多种siRNA表达载体,并转染至膀胱肿瘤BIU-87细胞,通过实时荧光定量、单四唑(MTT)检测端粒酶活性,观察siRNA表达载体对hTERT基因表达的影响。结果:实时荧光定量和MTT检测证明,所构建的载体能导致不同程度的hTERT基因沉默,并成功地抑制BIU-87细胞的生长。结论:RNA干扰膀胱尿路上皮癌细胞(BIU-87)端粒酶hTERT基因,能影响端粒酶基因的表达,为进一步研究端粒酶活性在膀胱尿路上皮癌中的作用奠定了基础。
- 景抗震高建平程文张征宇葛京平
- 关键词：RNA干扰人端粒酶逆转录酶基因端粒酶膀胱尿路上皮癌
- RNA干扰hTR基因对膀胱尿路上皮癌BIU-87细胞株端粒酶活性的影响被引量：10
- 2009年
- 目的:探索RNA干扰(RNAi)hTR基因对膀胱尿路上皮癌BIU-87细胞株端粒酶活性的影响,为膀胱尿路上皮癌基因治疗提供新的途径及依据。方法:构建以hTR基因为靶点的RNA干扰装置PhTR-siRNA,对其进行筛选和鉴定;检测PhTR-siRNA对BIU-87细胞的生物学效应,包括抑制BIU-87细胞的生长情况、端粒酶活性检测、实时定量PCR(RealTime-PCR)验证hTR变化。结果:PhTR-siRNA干扰hTR基因后膀胱尿路上皮癌BIU-87细胞株的生长受到抑制,明显抑制端粒酶活性,实时定量PCR验证hTR基因明显减少。结论:RNA干扰hTR基因能明显抑制膀胱尿路上皮癌BIU-87细胞株的生长,可作为一种膀胱尿路上皮癌的基因治疗方法。
- 徐锋苏筠程文高建平张征宇葛京平景抗震位志峰
- 关键词：端粒酶RNA干扰HTR基因膀胱尿路上皮癌
- 膀胱癌基因治疗的回顾及展望被引量：6
- 2007年
- 多发、难治和术后复发率高是膀胱癌的特点。目前癌症的治疗以手术切除和放、化疗为主,但均无法取得理想的效果,近年来新兴的基因治疗被寄予了厚望。恶性肿瘤的基因治疗已成为当前临床肿瘤研究的热点,作者就膀胱癌的基因治疗情况作一回顾及展望。
- 景抗震高建平程文
- 关键词：膀胱癌基因治疗癌症
- 联合RNA干扰TR及TERT对膀胱移行细胞癌BIU-87细胞株端粒酶活性及其增殖的影响被引量：4
- 2009年
- 目的探索联合RNA干扰TR及TERT[小型干扰RNA（siRNA）、人端粒酶RNA（hTR）及人端粒酶逆转录酶（hTERT）]基因对膀胱移行细胞癌细胞株BIU-87端粒酶活性及其增殖的影响。方法根据hTRmRNA和hTERTmRNA的序列，分别设计合成3对不同的且能干扰TR和TERT基因表达的siRNA并筛选出最高效抑制序列（pRNAT—TR—Ⅲ、pRNAT-TERT-Ⅲ），构建以hTR、hTERT基因为靶点的联合RNA干扰装置pRNAT．TR—Ⅲ、pRNAT—TERT—Ⅲ（脂质体法）并将其转染BIU-87细胞株，采用荧光定量PCR分析hTR及hTERTmRNA表达，TRAP-ELISA检测端粒酶活性，MTT法检测细胞增殖。结果分别及联合RNA干扰hTR及hTERT基因后，pRNAT—TERT—Ⅲ，pRNAT—TR-Ⅲ及pRNAT—TERT-Ⅲ、pRNAT—TR-Ⅲ的联合干扰可以特异性抑制BIU-87细胞株中TERT和TR表达（分别减少pRNAT—TERT-ⅢTERTmRNA：67％、pRNAT—TR-ⅢTRmRNA：41％、pRNAT—TERT—Ⅲ、pRNAT—TR—ⅢTRmRNA：57％、pRNAT—TERT-Ⅲ、pRNAT—TR—Ⅲ TERTmRNA：70％，P〈0．05）。且膀胱移行细胞癌细胞株BIU-87的生长和端粒酶活性均明显受到抑制，以联合RNA干扰尤为明显（pRNAT—TERT-Ⅲ：1．80±0．014，pRNAT—TR—Ⅲ：1．95±0．016，pRNAT—TERT-Ⅲ、pRNAT—TR-Ⅲ：1．25±0．012，P〈0．05）。结论联合RNA干扰hTERT及hTR基因能更明显抑制膀胱移行细胞癌BIU-87细胞株的生长，为其临床应用奠定了基础。
- 程文苏筠马宏青位志峰高建平张征宇葛京平景抗震徐锋
- 关键词：端粒酶逆转录酶膀胱移行细胞癌
- 联合RNAi膀胱移行细胞癌BIU-87细胞株端粒酶活性及其增殖影响的机制
- 2010年
- 目的 观察基因芯片分析联合小型干扰（siRNA）人端粒酶RNA（hTR）及人端粒酶逆转录酶（hTERT）基因对膀胱移行细胞癌BIU-87细胞株端粒酶活性抑制的影响.方法 根据siRNA设计原则和TERT、TR基因mRNA编码序列,分别设计合成3对不同的且能干扰TR和TERT基因表达的siRNA序列并筛选出最高效抑制序列（pRNAT-TERT-Ⅲ：GTACAGGTTTCACGCATGT基因的第3229位、pRNAT-TR-Ⅲ：CGAAGGTGCCTTGGAATAT基因的第306位）.构建以hTR、hTERT基因为靶点的联合RNA干扰（RNAi）装置pRNAT-TR-Ⅲ＋pRNAT-TERT-Ⅲ（脂质体法）并将其转染膀胱移行细胞癌BIU-87细胞株,采用荧光定量聚合酶链反应（PCR）分析hTR和hTERT mRNA表达（以目的基因与GAPDH拷贝数比值进行相对定量分析）,端粒重复序列扩增-酶联免疫吸附试验（TRAP-ELISA）检测端粒酶活性（测其A值）,噻唑蓝（MTT）比色法检测BIU-87细胞的生长抑制（按MTT法检测转染细胞的存活率）,并对联合RNAi前后进行基因芯片分析,采用RNA抽提、RNA质量检测、cRNA标记与合成、芯片杂交、化学发光检测、图像采集和数据分析,并进一步采用逆转录（RT）-PCR验证部分差异表达基因.结果 联合RNA干扰hTR及hTERT基因后,pRNAT-TERT-Ⅲ＋pRNAT-TR-Ⅲ的联合RNAi可以特异性抑制膀胱移行细胞癌BIU-87细胞株中TERT和TR表达（pRNAT-TERT-Ⅲ＋pRNAT-TR-ⅢTERT：0.300±0.033,P＜0.05;TR：0.430±0.028,P＜0.05）.且联合RNAi后膀胱移行细胞癌BIU-87细胞株的生长和端粒酶活性均明显受到抑制（pRNAT-TERT-Ⅲ＋pRNAT-TR-Ⅲ：1.250±0.012,P＜0.05）.联合siRNA前后进行基因芯片分析发现21个基因下调（ATM、BAX、BCL2、BCL2L1、BIRC5、CD44、CTNNB1、E2F1、JUN、MCAM、MTA1、MYC、NFKB1、NFKBIA、NME4、PNN、PRKDC、SERPINE1、THBS1、TNFRSF1A、UCC1）.结论 联合RNA干扰hTERT及hTR基因能明显抑制膀胱移行细胞癌BIU-87细胞株的生长;联合siRNA抑制膀胱移行细胞癌BIU-87细胞株的生�
- 程文高建平张征宇葛京平景抗震解鹏位志峰徐锋
- 关键词：端粒酶膀胱移行细胞癌
