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重庆市自然科学基金(2009BB5397)

作品数：1 被引量：2H指数：1
相关作者：吴凯峰刘鑫张雪梅王虹胥文春更多>>
相关机构：重庆医科大学更多>>
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相关领域：医药卫生更多>>

文献类型

  • 1篇中文期刊文章

领域

  • 1篇医药卫生

主题

  • 1篇溶血素
  • 1篇突变体
  • 1篇球菌
  • 1篇重叠PCR
  • 1篇减毒
  • 1篇肺炎
  • 1篇肺炎链球菌
  • 1篇肺炎链球菌溶...

机构

  • 1篇重庆医科大学

作者

  • 1篇崔亚利
  • 1篇庞丹
  • 1篇胥文春
  • 1篇王虹
  • 1篇张雪梅
  • 1篇刘鑫
  • 1篇吴凯峰

传媒

  • 1篇医学分子生物...

年份

  • 1篇2010
共 1 条 记 录，以下是 1-1
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排序方式：
一种减毒肺炎链球菌溶血素突变体的构建与表达被引量：2
2010年
目的使用重叠PCR方法构建构建△Al46Ply突变体，原核可溶性表达△Al46Ply蛋白，并明确其毒力变化情况；分析肺炎链球菌溶血素（pneumolysin，Ply）在不同血清型肺炎链球菌（streptococcus pneumoniae，SPN）中的表达情况。方法以SPND39型基因组DNA为模板设计合成构建突变体pry基因所需引物；利用重叠PCR方法扩增合成△Al46ply突变体。通过溶血实验分析其溶血活性，利用中和试验验证△A146Ply诱导产生的特异性抗体中和野生Ply毒素溶血能力，并利用Western印迹检测5株不同血清型肺炎链球菌流行菌株中Ply蛋白表达情况。结果突变体基因测序结果显示，Plyl46位密码子GCT3个碱基被缺失，△Al46ply突变体构建成功，并实现了△Al46Ply的可溶性表达，得到纯度〉90％的重组蛋白。△A146Ply蛋白浓度为100000ng／ml亦未表现出溶血活性。△Al46Ply蛋白诱导产生的特异性抗体能够中和野生Ply毒素的溶血活性。Western印迹结果显示，△Al46Ply诱导产生的多克隆抗体可与国内临床常见4株肺炎链球菌有交叉反应。结论△Al46Ply蛋白是一种安全的肺炎链球菌疫苗候选分子，可刺激机体产生具有中和作用的特异性抗体。
吴凯峰张薇薇崔亚利张雪梅胥文春庞丹刘鑫王虹
关键词：肺炎链球菌溶血素重叠PCR突变体
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