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国家重点实验室开放基金(AML200910)

作品数:3 被引量:5H指数:2
相关作者:张衡王革非李康生李卫中陈幼莹更多>>
相关机构:汕头大学更多>>
发文基金:国家重点实验室开放基金国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
相关领域:生物学医药卫生更多>>

文献类型

  • 3篇中文期刊文章

领域

  • 3篇生物学
  • 2篇医药卫生

主题

  • 3篇病毒
  • 2篇流感
  • 1篇全基因组
  • 1篇羧基端
  • 1篇细胞
  • 1篇细胞核
  • 1篇细胞核内
  • 1篇流感病毒
  • 1篇克隆
  • 1篇基因
  • 1篇基因组
  • 1篇核仁
  • 1篇NS1
  • 1篇NS1蛋白
  • 1篇RNA病毒
  • 1篇A型流感
  • 1篇A型流感病毒
  • 1篇H5N1

机构

  • 3篇汕头大学

作者

  • 3篇陈幼莹
  • 3篇李卫中
  • 3篇李康生
  • 3篇王革非
  • 3篇张衡
  • 2篇曾祥兴
  • 2篇张驰
  • 2篇曾俊
  • 1篇张丹桂
  • 1篇陈小璇

传媒

  • 1篇生物化学与生...
  • 1篇癌变.畸变....
  • 1篇微生物学免疫...

年份

  • 3篇2010
3 条 记 录,以下是 1-3
排序方式:
负链RNA病毒反向遗传通用载体的构建与鉴定
2010年
目的:用于负链RNA病毒的重组技术称为反向遗传技术,其核心需要构建一个具有双向启动子的反向遗传通用载体,可以分别正向转录翻译病毒复制所需酶系和负向转录病毒负链RNA。为此,构建负链RNA病毒反向遗传通用的载体。方法:为提高转染和表达效率,首先改造pcDNA3载体,通过酶切删除pcDNA3载体中非必需序列,在保留Amp抗性的前提下,通过酶切去除pcDNA3载体中非必需的Kan抗性表达盒与CMV启动子前区。利用长引物合成含有反向polI启动子与多克隆位点的基因片段。将合成后的片段酶切、补平粘端、连接,反向插入至经改造后的pcDNA3载体中,构建反向遗传通用表达载体。采用PCR检测、酶切鉴定以及DNA测序进行验证。结果:PCR检测、酶切鉴定以及DNA测序结果表明,载体构建正确,合成及插入序列与预期设计完全一致。结论:成功构建具有CMV与polI双向启动子的反向遗传通用载体,为建立负链RNA病毒反向遗传平台提供了研究基础。
王革非张驰曾祥兴张衡陈幼莹李卫中李康生
关键词:RNA病毒
禽流感病毒H5N1全基因组克隆与分析被引量:2
2010年
为明确广东地区分离的一株禽流感病毒H5N1的遗传背景,建立流感病毒反向遗传的平台。对该株禽流感病毒进行了空斑纯化与组织细胞培养,检测其在MDCK细胞中的增殖特性;利用H5N1病毒通用引物,通过RT-PCR对该病毒全基因组的8条片段进行全长克隆及测序分析;将H5N1的8条全长基因组片段分别插入反向遗传通用载体中,构建禽流感病毒H5N1的感染性克隆。结果表明,该H5N1毒株在MDCK细胞中可不依赖胰酶进行有效增殖与复制,可使MDCK细胞出现典型细胞病变,具有高致病性禽流感病毒的细胞增殖特征。RT-PCR克隆得到该H5N1毒株的PB2、PB1、PA、HA、NP、NA、M和NS八条全长片段,经测序分析确认该毒株的基因序列,其内部编码序列出现多处突变,其中HA连接肽为多个连续碱性氨基酸,表明该毒株可不依赖胰酶进行有效复制,与细胞培养结果一致,未出现抗药性的遗传突变。PCR与测序证明,插入H5N1八个全长基因组片段的载体序列完全正确,表明成功构建了该毒株的感染性克隆。为明确病毒遗传信息,建立流感病毒反向遗传的平台,为进一步研究禽流感病毒相关疫苗提供了研究基础。
王革非李卫中张衡曾俊陈幼莹陈小璇李康生
关键词:流感病毒H5N1克隆
A型流感病毒NS1蛋白羧基端PL结构域影响NS1在细胞核内的定位被引量:3
2010年
A型流感病毒NS1蛋白羧基端4个氨基酸可以与PDZ结构域(the domain of PSD95,Dig and ZO-1)相结合,称为PL结构域(PDZ ligand domain).对不同亚型或毒株的流感病毒而言,其NS1蛋白PL结构域的组成存在比较大的差异.有研究发现这种差异能够影响NS1与宿主细胞蛋白的相互作用进而影响病毒的致病力.为进一步探讨PL结构域对NS1蛋白生物学特性的影响,首先构建出4种不同亚型流感病毒(H1N1、H3N2、H5N1、H9N2)来源的NS1绿色荧光蛋白表达质粒.在此基础上,对野生型H3N2病毒NS1表达质粒进行人工改造,将其PL结构域缺失或者替换为其他亚型流感病毒的PL结构域,制备出4种重组NS1蛋白表达质粒.通过比较上述不同NS1蛋白在HeLa细胞中的定位情况发现,只有野生型H3N2病毒的NS1蛋白可以定位于核仁当中,而野生型H1N1、H5N1、H9N2病毒的NS1蛋白以及PL结构域缺失或替代的H3N2病毒NS1蛋白都不能定位于核仁.而通过比较上述NS1蛋白在流感病毒易感的MDCK细胞中的定位,进一步发现所有这些蛋白均不定位于核仁.上述结果表明:PL结构域的不同可以明显影响NS1蛋白在HeLa细胞核内的定位和分布,这有可能造成其生物学功能的差异.同时,NS1蛋白在细胞核内的定位还与宿主细胞的来源有着密切关系.
张丹桂李卫中王革非张衡曾俊陈幼莹张驰曾祥兴李康生
关键词:A型流感病毒NS1蛋白核仁
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