国家自然科学基金(30960385)
- 作品数：12 被引量：60H指数：5
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- 肾缺血对缺氧诱导microRNAs及VEGF-NOTCH信号分子的影响被引量：5
- 2011年
- 目的 观察肾缺血性损伤后,缺氧诱导microRNAs及VEGF-NOTCH信号分子的表达变化,探讨肾缺血损伤后血管新生的可能调控途径.方法 选择雄性Balb/c小鼠20只,采用夹闭双侧肾蒂方法制备急性缺血肾损伤模型,假手术组设为对照组.通过观察缺血恢复后24 h小鼠肾功能及肾组织病理学改变确定模型成功.实时定量RT-PCR检测缺血恢复后4 h,24 h时缺氧诱导miRNA-210,miRNA-92a,VEGF,Flk-1及Notch1 mRNA表达水平;Western-blot检测缺血恢复后24 h,72 h时Flk-1蛋白的变化;免疫组织化学染色检测CD31表达,判断缺血组织微血管内皮细胞增生状况.结果 肾缺血恢复24 h小鼠肌酐、尿素氮明显升高（P＜0.05）,光镜下观察大量小管上皮细胞肿胀、空泡变性坏死,肾小管管腔扩张,见上皮细胞碎片和管型,表明成功建立肾缺血损伤模型.肾缺血恢复4 h,24 h后,与正常组比较,肾组织miRNA-210上调倍数分别为（2.02±0.29）,（5.58±0.16）;miRNA-92a的表达上调倍数分别为（3.23±0.74）,（1.53±0.33）,P＜0.05;VEGF,Flk-1及Notch1 mRNA表达水平均升高（P＜0.05）.缺血恢复后24 h,72 h时,Flk-1蛋白水平显著升高（P＜0.05）,肾组织微血管密度明显增加.结论 肾缺血性损伤后可出现代偿性血管新生,且缺氧诱导miRNA如miRNA-92a,miRNA-210表达上调,与血管新生相关的信号分子VEGF及Notch1表达均升高,提示miRNA/VEGF-Notch1可能是肾缺血性损伤后血管新生的主要调控通路,从而为探讨缺血性损伤后血管新生的机制提供了依据.
- 刘芬吴珏娄远蕾阮琼芳李勇崔苏萍汪泱
- 关键词：血管新生VEGFNOTCH基因
- miRNA与缺血性疾病中的血管新生被引量：1
- 2011年
- MicroRNAs（miRNAs）是存在于真核生物中一类长度约为20~24 nt的非编码小分子单链RNA,可调控多种基因的表达。研究发现,缺血性损伤组织中一系列的miRNAs表达发生了明显变化,且其改变可显著影响缺血组织的血管新生。
- 吴珏刘芬汪泱
- 关键词：MIRNAS血管新生缺血
- 人诱导性多能干细胞的培养及鉴定被引量：7
- 2010年
- 目的建立稳定的人诱导性多能干细胞(iPS细胞)培养体系。方法取第3～5代的小鼠胚胎成纤维细胞,丝裂霉素C处理后用作饲养层。人iPS细胞接种于饲养层上生长,胶原酶消化或机械法传代。倒置显微镜下观察iPS细胞生长状态;观察拟胚体形成能力;RT-PCR检测iPS细胞多能性基因的表达情况。结果(1)小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)为贴壁生长细胞,呈梭形或多角形。细胞增殖旺盛。(2)生长在饲养层上的人iPS细胞呈典型的克隆状生长。克隆呈圆形或椭圆形,边界清晰。克隆内细胞排列紧密,细胞体积小,核大,细胞核/质比高。RT-PCR结果显示人iPS细胞强表达多能性基因Oct4,Nanog,Sox2;去除饲养层后悬浮培养能形成拟胚体(EB)。结论本实验的培养体系适合人iPS细胞的培养,人iPS细胞能稳定增殖,保持自我更新及分化潜能。
- 冯年花谢安娄远蕾阮琼芳郭菲吴珏邓志锋汪泱
- 关键词：细胞培养饲养层
- miRNA-92a在缺血再灌注肾损伤中的表达变化被引量：14
- 2010年
- 目的观察miRNA-92a在缺血再灌注(I/R)损伤4h、24h后小鼠肾组织的表达变化,探讨肾脏缺血损伤后血管生成的可能机制。方法采用双侧夹闭小鼠肾蒂的方法制备急性缺血再灌注肾损伤模型,术后灌注24h后收集血清和肾脏标本,分别检测肾功能及观察肾组织病理学改变。实时定量逆转录聚合酶链反应(real-time RT-PCR)的方法检测小鼠I/R损伤4h和24h组中miRNA-92a的表达水平。结果(1)采用血清肌酐(Scr)和尿素氮(UN)评估肾功能,肾脏I/R24h组与假手术组(sham)比较有显著性差异(P<0.05);HE染色观察肾组织病理改变明显,肾缺血再灌注模型成功。(2)而I/R4h和24h后,miRNA-92a的表达上调,其上调倍数分别为3.23±0.74,1.53±0.33(P<0.05)。结论小鼠I/R损伤中miRNA-92a表达显著上调,miRNA-92a可能参与缺血再灌注肾组织损伤的血管再生的调控过程。
- 吴珏刘芬阮琼芳娄远蕾郭菲杨阳汪泱
- 关键词：微小RNA小鼠肾脏缺血再灌注损伤
- 人诱导性多能干细胞定向分化为神经干细胞的实验研究被引量：7
- 2010年
- 目的观察人诱导性多能干细胞(iPS细胞)定向分化为神经干细胞(NSCs)的潜能。方法用维甲酸(RA)诱导人iPS细胞向NSCs分化。倒置显微镜下观察iPS细胞的形态变化,RT-PCR检测NANOG、OCT4、SOX2的表达;免疫组织化学方法检测Nestin、SOX2、β-TubulinШ和GFAP的表达。结果 RA诱导后第4天,贴壁的拟胚体出现了早期神经祖细胞特有的神经管样结构并不断增多,细胞表达神经巢蛋白Nestin,而对照组未观察到神经管样结构。神经管样结构内的细胞能分化为β-TubulinШ阳性的神经元,但GFAP阳性的星形胶质细胞少见。结论人iPS细胞具有定向分化为NSCs的潜能,并能模拟神经发育过程。
- 冯年花谢安娄远蕾阮琼芳郭菲汪泱
- 关键词：诱导性多能干细胞神经干细胞维甲酸分化
- 糖尿病肾病患者血清miRNA-93的表达变化及意义被引量：11
- 2012年
- 目的探讨miRNA-93在糖尿病肾病患者血清的表达情况及其临床意义。方法用实时荧光定量PCR技术分别检测20例糖尿病肾病患者血清和健康对照组血清中miRNA-93的表达变化。分析其与临床病理参数的关系;运用TargetScan等靶基因预测分析软件预测miRNA-93靶基因。结果与健康对照组相比,糖尿病肾病患者血清中miRNA-93低表达(P<0.05);尿毒症组患者血清中miRNA-93较非尿毒症组低表达(P<0.05);生物信息学分析显示为糖尿病肾病中miRNA-93的靶基因为VEGFA、MTHFR、ADRA2B、SDC2、APOB、PPARG。结论 miRNA-93在糖尿病肾病患者血清中低表达,可能通过调控其下游靶基因在糖尿病肾病发生过程中起重要作用。
- 杨阳张运津谢安汪泱娄远蕾
- 关键词：糖尿病肾病实时荧光定量PCR靶基因
- 后肾细胞微环境诱导胚胎干细胞向肾系细胞分化的实验研究被引量：1
- 2011年
- 目的:探讨胚胎后肾细胞微环境诱导胚胎干细胞(ESCs)分化为肾系细胞的作用。方法:小鼠D3系胚胎干细胞通过悬滴法制备拟胚体(EBs),将EBs细胞与取自孕12.5 d小鼠胚胎的后肾细胞通过间接共培养以诱导其分化,即为共培养诱导组,设EBs细胞自然分化为对照组;采用免疫荧光染色法检测共培养第3、5、7 d后的EBs细胞Pax2、WT-1蛋白表达情况,通过逆转录PCR法检测诱导3 d后的EBs细胞Pax2、WT-1、Lim1、Sall1、Emx2、GDNF、Wnt4、BMP7、Nephl、Nephrin、KSP和CD24 mRNA的表达情况。结果:EBs细胞在诱导的第3 d即出现了全部肾发育相关基因的表达,其中共培养组Pax2、WT-1、Emx2、GDNF、Nephl、Nephrin、KSP和CD24的表达强于对照组;免疫荧光结果显示在诱导3 d后的EBs细胞中可观察到Pax2阳性细胞,阳性细胞数在共培养第5、7 d增多;诱导5 d后可观察到WT-1阳性细胞,对照组未见Pax2或WT-1蛋白阳性细胞出现。结论:后肾细胞微环境可促进ESCs分化为肾系细胞。
- 汪泱张立行王共先谢安娄远蕾阮琼芳崔苏萍杨阳
- 关键词：胚胎干细胞
- 小鼠肾缺血性损伤微小RNA表达谱的变化被引量：1
- 2011年
- 目的建立缺血肾组织微小RNA（miRNA）差异表达谱。方法夹闭小鼠双侧肾蒂45min制备急性肾缺血模型，随机分为假手术、缺血恢复4、24h组。通过观察血清肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）及肾病理改变判断模型成功。采用AgilentmiRNA基因芯片技术构建缺血肾组织miRNA表达谱，实时定量聚合酶链反应（qRT-PCR）验证miRNA-210、miRNA-92a表达变化。结果miRNA表达谱出现明显改变，76个miRNAs出现两倍以上的表达变化，其中40个miRNAs下调，36个miRNAs上调。肾缺血恢复4、24h后，miRNA-210表达分别上调（2．02±0．29）、（5．58±0．16）倍；miR-92a分别上调（3．23±0．74）、（1．53±0．33）倍（P〈0．05），与miRNA微阵列结果一致。结论肾缺血损伤后，miRNA表达谱发生改变，提示miRNA可能参与缺血性肾损伤病理生理过程的调控。
- 刘芬阮琼芳吴珏娄远蕾崔苏萍汪泱
- 关键词：肾缺血表达谱MIRNA芯片
- miRNA与阿尔兹海默氏病被引量：3
- 2010年
- microRNA（miRNA）是一类新发现的、非编码的、大小为22左右nt的单链小分子RNA,通常在转录后水平调控基因表达。1993年Lee等人发现第一个miRNA以来,已经有大约1000种左右的miRNA被发现。近来研究显示miRNA在许多疾病，如肿瘤、神经退行性疾病和糖尿病中都扮演着重要角色。
- 杨阳甘福生汪泱
- 关键词：MIRNA神经退行性疾病小分子RNA调控基因表达糖尿病
- 多囊肾患者家系血清miRNA-15a和miRNA-17表达水平的比较被引量：4
- 2011年
- 目的观察比较miRNA-15a和miRNA-17在多囊肾患者家系中的表达水平,探讨miRNA与多囊肾病发生发展的可能关系。方法采用实时定量PCR技术检测多囊肾患者及其家系成员与正常人血清中miRNA-15a和miRNA-17的表达水平。结果所检测的多囊肾患者家系中已出现肾功能损害的多囊肾患者血清miRNA-15a的表达水平明显高于正常人及肾功能正常的多囊肾患者;而miRNA-17在多囊肾患者家系未表达。结论多囊肾患者血清miRNA-15a表达水平与正常人不同,提示miRNA在多囊肾的发生发展过程中可能起重要调控作用,值得深入研究。
- 陈钦开王满庭杨柳阮琼芳杨阳谢安汪泱
- 关键词：MIRNA多囊肾病实时定量PCR
