您的位置: 专家智库 > >

国家自然科学基金(30371255)

作品数:2 被引量:5H指数:1
相关作者:钱瑾孙立新孙静孙艳马磊更多>>
相关机构:南京医科大学更多>>
发文基金:国家自然科学基金江苏省高校自然科学研究项目江苏省自然科学基金更多>>
相关领域:医药卫生更多>>

文献类型

  • 2篇中文期刊文章

领域

  • 2篇医药卫生

主题

  • 2篇抗药
  • 2篇抗药性
  • 1篇淡色库蚊
  • 1篇蛋白
  • 1篇蛋白酶
  • 1篇定量PCR
  • 1篇原核表达
  • 1篇酶活性
  • 1篇糜蛋白酶
  • 1篇库蚊
  • 1篇活性
  • 1篇活性分析
  • 1篇纯化
  • 1篇RACE

机构

  • 2篇南京医科大学

作者

  • 2篇马磊
  • 2篇孙艳
  • 2篇孙静
  • 2篇孙立新
  • 2篇钱瑾
  • 1篇胡小邦
  • 1篇朱昌亮

传媒

  • 1篇南京医科大学...
  • 1篇中国病原生物...

年份

  • 2篇2006
2 条 记 录,以下是 1-2
排序方式:
蚊抗药性相关糜蛋白酶基因的表达、纯化及活性分析
2006年
目的表达、纯化淡色库蚊溴氰菊酯抗性相关糜蛋白酶(NYD-Ch)基因并进行酶活性分析。方法应用PCR和基因重组技术,构建原核表达载体,表达目的蛋白;用酶促底物法测定表达蛋白NYDCh的酶学活性和最适pH值。结果成功构建重组表达载体pET32a(+)/NYD-Ch,并转化到感受态菌E.coli BL21(DE3)中。SDS-PAGE和Western blot显示,目的蛋白分子质量与理论值相符。NYD-Ch最大活力通过S(Ala)2ProPhe-pNA获得。NYD-Ch活力随pH的增高而增大,在pH8.01~11.0的范围内较高,pH10.0时达最高。抑制剂PMSF、SBTI、TPCK对NYD-Ch酶活力均有明显的抑制作用。结论成功表达了NYD-Ch蛋白,并分析了其酶学活性。本结果为深入研究NYD-Ch与杀虫剂抗性关系奠定基础。
孙艳马磊钱瑾孙静孙立新
关键词:糜蛋白酶原核表达纯化酶活性
淡色库蚊抗药性相关基因——NYD-MLC2基因的克隆与分析被引量:5
2006年
目的:获取淡色库蚊抗药性相关基因NYD-MLC2的cDNA全长序列并鉴定其在抗性品系和敏感品系中的表达差异。方法:根据抑制性差减杂交(SSH)结合cDNA芯片分离获得的淡色库蚊抗药性相关NYD-MLC2基因片段序列设计引物,采用快速扩增cDNA末端法(rapidamplificationofcDNAends,RACE)扩增NYD-MLC2基因3′、5′端,经对位拼接获得全长序列,并进行生物信息学分析;荧光定量PCR验证此基因在抗性和敏感品系的表达差异。结果:获得淡色库蚊NYD-MLC2cDNA全长序列,开放阅读框为630bp(GenBank/NCBIDQ140391),编码210个氨基酸。蛋白质序列分析显示,NYD-MLC2与冈比亚按蚊(Anophelesgambiae)一个未知功能的蛋白同源性最高,为91%;实时荧光定量PCR结果显示,NYD-MLC2在淡色库蚊溴氰菊酯抗性品系中的表达量是敏感品系的4.08倍。结论:获得淡色库蚊抗药性相关NYD-MLC2基因cDNA全长序列,并证实其在淡色库蚊溴氰菊酯抗性品系中高表达,提示NYD-MLC2与淡色库蚊溴氰菊酯抗药性相关,值得进一步研究。
钱瑾孙静孙立新孙艳胡小邦马磊朱昌亮
关键词:淡色库蚊抗药性RACE定量PCR
共1页<1>
聚类工具0