国家高技术研究发展计划(2001AA217121)
- 作品数：21 被引量：78H指数：6
- 相关作者：黄爱龙唐霓汪道文况舸邓华聪更多>>
- 相关机构：重庆医科大学附属第二医院华中科技大学中国人民解放军总医院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 几种肿瘤特异性启动子在人肝癌细胞系中的活性比较
- 2010年
- 目的克隆甲胎蛋白（AFP）、survivin（SUR）、人端粒酶逆转录酶（hTERT）基因启动子,检测并评价其在不同肝癌细胞系和正常组织细胞中的转录活性,为肝癌靶向性基因治疗提供依据。方法采用PCR法扩增获得AFP、SUR、hTERT基因的启动子片段,将之克隆到表达虫荧光素酶基因的报告质粒上,检测AFP、SUR、hTERT基因启动子在肝癌细胞系和正常组织中的转录活性,评价其转录活性水平和肿瘤特异性。结果成功克隆了AFP、SUR、hTERT启动子,证实AFP、SUR、hTERT启动子在肝癌细胞中具有肿瘤特异性转录活性,SUR启动子活性最高,其活性水平为AFP启动子的52~98倍;hTERT启动子次之,其活性水平为AFP启动子的14~30倍;AFP启动子活性最低。结论 hTERT和SUR启动子在肝癌细胞系中具有较强的启动活性和显著的肿瘤特异性,可望开发成为新型的肝癌靶向性基因治疗工具。
- 况舸唐霓陶鹏吴莹张君黄爱龙
- 关键词：启动子人端粒酶逆转录酶SURVIVIN基因疗法肝癌
- 果糖诱导大鼠胰岛素抵抗和高血压的机制及人组织型激肽释放酶基因的治疗作用被引量：10
- 2003年
- 目的 研究果糖诱导高血压合并高胰岛素血症、胰岛素抵抗时内皮素 1(ET -1)及其受体 (ETA)、血管紧张素Ⅱ受体 1(AT1)的变化和人组织型激肽释放酶 (HK )基因的治疗作用。方法雄性Sprague -Dawley (SD)大鼠饮用 10 %果糖水诱导形成高血压和胰岛素抵抗动物模型后 ,静脉注入含HKcDNA的重组质粒 (pcDNA HK )。监测血压 ,血清胰岛素及血糖等。 2周时处死动物 ,测定脏器中HK的表达及ET 1、ETA和AT1的表达情况。结果 饮高果糖水 2周后 ,动物血压、血胰岛素水平明显高于正常饮水组 ,静脉注射pcDNA HK后第 3天即可明显降低果糖诱导高血压大鼠的血压 ,最大降压效应在导入基因后第 14天 (达 15mmHg) ,其降压效应持续 3周以上。HK基因导入后第 2周 ,HK治疗组动物ET 1、ETA及AT1明显低于对照组 ,与正常组接近。并且在血压下降的同时 ,血胰岛素浓度亦明显降低。结论 动物高果糖饮水可导致高血压及高胰岛素血症 ,其机理可能与ET 1、ETA和AT1表达增加有关 ,HK基因的导入可能通过降低血管ET 1、ETA和AT1表达而降低血压 ,并纠正高血压伴随的高胰岛素血症 。
- 赵春霞汪培华李宏伟Lee ChaoJulie Chao肖啸汪道文
- 关键词：果糖诱导胰岛素抵抗高血压
- 重组腺病毒IκBαM抑制高糖诱导的血管内皮细胞炎症因子的异常分泌被引量：5
- 2004年
- 构建携有核因子κB抑制物IκBα的突变体IκBαM的重组腺病毒(AdIκBαM),并感染ECV304血管内皮细胞,采用Westem blot、电泳迁移率变动分析和逆转录-聚合酶链反应等方法研究核因子κB在高浓度葡萄糖刺激的ECV304细胞分泌功能中所起的作用以及阻断其活性对内皮细胞分泌功能的影响。结果发现,高糖能诱导ECV304细胞IκBα的降解和核因子κB的激活,同时上调炎症因子细胞间粘附分子1、单核细胞趋化蛋白1和内皮素1 mRNA表达水平,而感染AdIκBαM的ECV304/IκBαM细胞则能拮抗高糖所致的IκBα降解与核因子κB激活,同时下调这些炎症因子的异常分泌水平。结果提示,核因子κB的激活在高糖所致的内皮细胞分泌功能改变中起中轴作用,抑制核因子κB的活化,有助于改善血管内皮细胞功能。
- 肖彧君李春霖刘冰熔黄爱龙邓华聪
- 关键词：IΚBΑ炎症因子
- 人组织型激肽释放酶基因对大鼠糖尿病肾病的影响及其机制被引量：6
- 2008年
- 目的:探讨人组织型激肽释放酶基因(human tissue kallikrein,HK)对糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)的影响及其机制。方法:48只雄性Wistar大鼠随机分为普通饲料组(即正常组)和高脂高糖饲料组。高脂高糖饲料组以小剂量链脲佐菌素加高脂高糖饮食诱导2型糖尿病(diabete mellitus,DM)模型,造模后随机分为两组,分别经尾静脉导入重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated viruses,rAAV)介导的HK基因(HK组)以及报告基因beta-半乳糖苷酶(beta-galac-tosidase,LacZ)(LacZ组),观察12周后处死实验动物,留取心、肝、肾等组织。Western blot检测HK在各组织的表达。PAS染色观察肾小球硬化情况,天狼猩红染色观察肾脏纤维化情况。24h尿微量白蛋白(microalbuminuria,mAlb)与尿渗透压检测评定肾功能,免疫组织化学以及Western blot检测肾脏转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的表达。结果:rAAV介导的HK可在2型DM大鼠的肝脏、肾脏、心脏表达,而且相较于LacZ组且表达增强;PAS染色显示:LacZ组肾脏出现中度的肾小球系膜细胞及基质增生,血管周围间质细胞浸润,血管壁增厚,以及肾小囊滴状病变和毛细血管纤维帽。另外肾小管大量的空泡变性,肾小管腔内出现较多蛋白质管型,HK组较LacZ组明显好转;天狼星红染色显示:LacZ组肾脏间质、血管壁胶原沉积,肾小球细动脉管壁增厚,而HK组病变较轻(P<0.05);24hmAlb排泄量LacZ组比正常组明显增加(P<0.05),HK组较LacZ组排泄量显著下降(P<0.05)。LacZ组与正常组比较,尿渗透压明显下降(P<0.05),HK组较LacZ组显著上升(P<0.05);TGF-β1主要表达于LacZ组的肾小管上皮细胞,HK组较LacZ组TGF-β1明显下调(P<0.05)。结论:HK基因明显改善DN,保护肾功能,原因可能与下调肾脏TGF-β1的表达有关。
- 徐西振涂玲郑常龙赵刚汪道文
- 关键词：糖尿病肾病转化生长因子-Β1
- 重组腺病毒IκBαM在血管内皮细胞ECV-304中的表达及对NF-κB活性的抑制
- 2004年
- 目的 检测重组腺病毒IκBαM(AdIκBαM)在血管内皮细胞ECV - 30 4中的表达及肿瘤坏死因子 (TNF -α)诱导下IκBαM的变化与对NF -κB活性的抑制作用。方法 用携有NF -κB抑制物IκBα突变体的AdIκBαM感染ECV - 30 4细胞 ,用West ernblot及EMSA法检测IκBαM的表达及NF -κB活性的变化情况。结果 AdIκBαM在ECV - 30 4细胞中表达且不被TNF -α诱导降解 ,感染IκBαM的ECV - 30 4 /IκBαM细胞在TNF -α刺激下NF -κB无激活 ,而未感染IκBαM的ECV - 30 4细胞经TNF -α刺激后可有NF -κB的过度活化。结论 AdIκBαM能高效扩增并有效感染ECV - 30 4血管内皮细胞 ,且不会被TNF -α诱导而降解 ,能有效抑制血管内皮细胞NF -κB的过度活化 ,抑制NF -κB活性可能保护血管内皮细胞免于TNF
- 肖彧君邓华聪黄爱龙
- 关键词：核转录因子-ΚB肿瘤坏死因子血管内皮细胞
- 端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子的克隆及在人肝癌细胞的肿瘤特异性分析被引量：4
- 2005年
- 目的:克隆hTERT基因启动子并检测其在不同肝癌细胞系和正常组织细胞中的转录活性,为肝癌靶向性基因治疗提供依据。方法:采用PCR法扩增获得hTERT基因的启动子片段,将之克隆到表达虫荧光素酶基因的报告质粒上,通过测定荧光素酶报告基因的表达,检测hTERT基因启动子在肝癌细胞系和正常组织中的转录活性,并将之与甲胎蛋白(alpha—fetalprotein,AFP)基因启动子活性相比较,评价其作为肝癌基因治疗中应用的肿瘤特异性启动子的可行性。结果:成功克隆了hTERT启动子,证实hTERT启动子在肝癌细胞中具有相当强的转录活性,其活性水平为AFP启动子的14～30倍;在原代培养的成纤维细胞中其启动子未表现转录活性。结论:hTERT启动子在肝癌细胞系中具有较强的启动活性和显著的肿瘤特异性,可望开发成为新型的肝癌靶向性基因治疗工具。
- 况舸黄爱龙唐霓
- 关键词：人端粒酶逆转录酶
- 人组织激肽释放酶基因对2型糖尿病大鼠血压的影响及机制被引量：6
- 2006年
- 目的:探讨人组织激肽释放酶(HK)基因对2型糖尿病大鼠血压的影响及其机制。方法:高脂高糖饮食加小剂量链脲佐菌素建立2型糖尿病动物模型。以重组腺相关病毒为载体介导HK基因(HK组)或对照基因LacZ(LacZ组)在糖尿病大鼠体内表达,观察实验动物血压变化及离体主动脉对乙酰胆碱(Ach)依赖性血管舒张反应和一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)、内皮素受体A(ETA-R)表达。结果:(1)HK组第2周开始出现血压下降,并一直持续到实验结束(12周时),而LacZ组血压无明显下降。(2)LacZ组离体主动脉对乙酰胆碱(Ach)依赖性血管舒张反应明显低于HK组。(3)HK组大鼠主动脉NO2-/NO3-浓度明显高于LacZ组,而ET-1和ETA-RmRNA明显低于LacZ组。结论:重组腺相关病毒介导HK基因表达明显降低2型糖尿病大鼠血压,改善内皮依赖性血管舒张功能,原因可能与增加动脉NO释放,减少ET-1和ETA-R的表达有关。
- 袁刚王涛赵春霞肖啸汪道文
- 关键词：糖尿病高血压内皮依赖性血管舒张一氧化氮内皮缩血管肽1
- SARS-CoVS基因的克隆及其shRNA表达载体的构建
- 2005年
- 目的构建绿色荧光蛋白与SARSCoVS基因的融合表达载体pEGFPC1S及针对SARSCoVS基因的shRNA表达载体pshRNAS,以观察shRNA对SARSCoVS蛋白表达的影响。方法人工合成SARSCoVS基因片段及其shRNA引物,两端设计酶切位点,分别与载体pEGFPC1和pTZU6+1连接,转化大肠杆菌DH5а和JM109,酶切及测序鉴定。结果酶切电泳显示pEGFPC1S插入片段大小为1416bp,测序结果显示pshRNAS中插入的shRNA引物序列正确。结论成功构建融合表达载体pEGFPC1S及针对SARSCoVS基因的shRNA表达载体pshRNAS。
- 陶鹏张君唐霓陈道荣卢年芳黄爱龙
- 关键词：SARS-COV克隆SHRNA
- 人组织型激肽释放酶基因降低果糖诱导高血压大鼠的血压并改善高胰岛素血症被引量：6
- 2002年
- 目的:研究人组织型激肽释放酶(HK)基因导入对果糖诱导高血压和胰岛素对抗的作用。方法:雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠饮用10％的果糖水诱导制成高血压动物模型,2周后静脉注入含人组织型激肽释放酶cDNA的重组质粒。然后监测血压,并取血,测定血糖、血胆固醇、血甘油三脂及血胰岛素水平。结果:一次静脉注射含人组织型激肽释放酶基因的重组质粒第3天即可明显降低果糖诱导高血压大鼠的血压,最大降压效应在导入基因后第14天,其降压效应持续3周以上。实验组动物在血压下降的同时,血糖、血胰岛素浓度亦明显降低,并在动物主要脏器中检测到HK蛋白质的表达显著增加。结论:人组织型激肽释放酶基因的导入可能有助于降低血压,并纠正了高血压伴随的高胰岛素血症,结果提示人组织型激肽释放酶基因治疗高血压病尤其是合并糖尿病或胰岛素对抗者的可行性。
- 赵春霞汪培华李宏伟肖啸Lee Chao汪道文
- 关键词：激肽释放酶高血压
- 肿瘤靶向性腺病毒研究进展
- 2005年
- 腺病毒是目前恶性肿瘤基因治疗中应用最广泛的基因转移载体,但由于其缺乏靶向性而严重限制了其介导基因治疗的临床应用。开发具有肿瘤靶向性的病毒载体是腺病毒载体的发展方向与研究热点,而对腺病毒衣壳进行改造使其能够靶向性感染肿瘤细胞是靶向性腺病毒研究的重点。现综述近年来腺病毒载体的研究进展。
- 况舸黄爱龙
- 关键词：腺病毒科肿瘤基因疗法靶向
