国家自然科学基金(30471693)
- 作品数：20 被引量：57H指数：5
- 相关作者：秦仁义王敏杜志勇田锐刘文松更多>>
- 相关机构：华中科技大学荆门市第一人民医院上海交通大学医学院附属瑞金医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人胰腺癌干细胞差异性基因的表达被引量：5
- 2009年
- 目的分选、鉴定人胰腺癌干细胞，运用基因芯片技术分析其差异性基因的表达。方法运用流式分选技术分选胰腺癌干细胞（CD24^＋CD44^＋ESA^＋），NOD／SCID鼠移植瘤试验进行肿瘤干细胞特性鉴定。采用Affymetrix U133 plus2．0人类全基因组表达谱芯片对胰腺癌干细胞和非干细胞进行差异基因筛选。结果分选得到人胰腺癌CD24^＋CD44^＋ESA^＋亚群细胞，占所有细胞的0．8％；5×10’个CD24^＋CD44^＋ESA^＋细胞就能成瘤（2／4），而阴性细胞1×10’才能成瘤（1／4）；CD24^＋CD44^＋ESA^＋具有一定的自我更新和分化能力。基因芯片杂交获得6553（11．99％）条差异基因，胰腺癌干细胞中5255（9．61％）条上调表达，1298（2．37％）条下调表达。其中差异基因涉及细胞凋亡、细胞周期、代谢、细胞线粒体结构和耐药等多个方面。结论胰腺癌干细胞具有自身特征性基因表达谱，为进一步从干细胞层面研究胰腺癌发病机制及靶向治疗奠定基础。
- 黄焕军王敏秦仁义申铭江建新朱峰田锐
- 关键词：胰腺癌干细胞基因芯片
- 肿瘤干细胞的研究现况被引量：4
- 2007年
- 刘文松秦仁义
- 关键词：肿瘤干细胞白血病乳腺肿瘤脑肿瘤SP细胞
- 高侵袭性胰腺癌Panc-1细胞系中干细胞筛选结果分析被引量：1
- 2009年
- 目的探讨高侵袭性胰腺癌细胞中是否有比例较高的胰腺癌干细胞。方法采用Transwell小室肿瘤侵袭模型筛选、分离出胰腺癌细胞系Panc-1中的高侵袭性癌细胞(Panc-1-H)和低侵袭性癌细胞(Panc-1-L),FCM检测上述两种细胞的胰腺癌干细胞表面标记物CD24、CD44、ESA。结果Panc-1-H、Panc-1-L中胰腺癌干细胞所占比例相近,随着侵袭时间延长,胰腺癌干细胞比例无改变,P均>0.05。结论高侵袭性胰腺癌细胞中不含有较高比例的胰腺癌干细胞。
- 沈俊王敏刘文松江建新秦仁义
- 关键词：胰腺癌肿瘤干细胞
- 化疗诱导胰腺癌细胞凋亡survivin mRNA表达的变化的研究
- 2007年
- 目的：研究紫杉醇体外化疗对胰腺癌细胞凋亡抑制蛋白Survivin基因表达的影响。方法培养人胰腺癌细胞株SW1990，加入不同浓度的紫杉醇（PA），在各时间段MTY法测细胞抑制率，根据结果选择低浓度的PA，分别在加药后24h、48h、72h用流式细胞仪检测细胞凋亡率和PT-PCR检测survivin mRNA表达。结果：SW1990胰腺癌的抑制率随着紫杉醇的药物浓度和作用时间的增加而增高。给予低浓度的PA诱导后，在加药后24h、48h和72h胰腺癌细胞凋亡率分别是（14．73±1.09）％，（18．36±0．86）％，（23．85±0．96）％；其survivin mRNA则分别提高了1．1倍、2．6倍和4．1倍。结论：紫杉醇化疗可促使胰腺癌细胞内Survivin的表达增加，抵抗化疗诱导的细胞凋亡。
- 刘文松秦仁义胡均
- 关键词：胰腺肿瘤细胞凋亡微管相关蛋白质类
- 靶向Survivin的siRNA联合吉西他滨抑制胰腺癌细胞增殖被引量：1
- 2009年
- 目的构建靶向Survivin基因的siRNA真核表达载体，观察其对吉西他滨化疗抑制胰腺癌Panc-1细胞增殖的影响。方法构建靶向Survivin基因的siRNA真核表达载体psiRNA—Survivin，行酶切和测序鉴定。用重组质粒转染Panc-1细胞并筛选稳定转染的细胞株，绘制细胞生长曲线。采用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）、Westernblot检测Survivin的mRNA和蛋白表达变化。以吉西他滨分别作用于对照组和转染组Panc-1细胞24h，噻唑蓝（MTr）比色法检测细胞的增殖，流式细胞仪检测细胞的凋亡。结果酶切和测序鉴定表明，成功构建了psiRNA-Survivin重组质粒。重组质粒稳定转染胰腺癌细胞株后，Survivin的mRNA和蛋白表达分别下调了79．2％和83．6％（P〈0．05），生长曲线明显变平缓，并能显著增强吉西他滨对Panc-1细胞的增殖抑制[（24．6±4．5）％／（38．7±5．2）％]和凋亡诱导作用[（16．7±2．5）％／（26．8±3．4）％，P〈0．05）。结论构建Survivin的siRNA表达载体可明显下调Survivin的表达，抑制Panc-1细胞增殖，并能提高细胞对吉西他滨的化疗敏感性。
- 刘文松燕海姣秦仁义
- 关键词：胰腺肿瘤SURVIVINSIRNA
- 胰腺癌放、化疗抵抗诱导上皮间质转化被引量：5
- 2009年
- 目的探讨对放、化疗抵抗的胰腺癌细胞发生上皮间质转化(EMT)的意义。方法采用健择化疗同期进行放疗对多株人胰腺癌细胞系进行干预,持续2周左右,杀死约9 0%左右的各细胞系细胞,获得放疗、化疗抵抗的胰腺癌细胞。高倍显微镜下观察细胞形态学变化。transwell小室试验检测细胞侵袭力。利用W estern-blot检测上皮表型标志物E-cadherin(E-cad)和间质表型标志物波形蛋白(vim-entin)的表达。结果放、化疗抵抗的胰腺癌细胞发生与EMT相符的形态学改变:细胞呈纺锤体状,极性消失,并出现伪足;放、化疗抵抗的3株胰腺癌细胞侵袭力增强,其穿过小孔的数目增加(均P(0.05);E-cad表达下降,vimentin表达上调。结论放、化疗抵抗的人胰腺癌细胞发生EMT,其与胰腺癌治疗抵抗有关。
- 杜志勇魏翠凤田锐王敏江建新秦仁义
- 关键词：胰腺肿瘤上皮间质转化
- Oct-4在不同侵袭转移能力的人胆管癌细胞系中的表达
- 2008年
- 目的探讨干细胞因子Oct-4在不同侵袭转移能力的人胆管癌QBC939亚克隆细胞系中的表达。方法运用体外侵袭实验筛选出1个高侵袭转移潜力和1个低侵袭转移潜力的细胞亚系,并对两者的生物学特性进行比较、分析和鉴定。运用RT-PCR,Western-blot的方法检测干细胞因子Oct-4在两个亚克隆细胞系的差异表达。结果分离得到高和低转移能力的人胆管癌QBC939亚克隆细胞系QBC-H和QBC-L,体外侵袭指数分别为263±5.9和154±6.6(P<0.05)。干细胞因子Oct-4 mR-NA和蛋白在QBC-H的表达均高于QBC-L,两者差异有显著性(P<0.05)。结论干细胞因子Oct-4的表达强度与胆管癌QBC939的侵袭转移能力密切相关;
- 王敏秦仁义肖娟陈敏胡均杜志勇刘文松
- 关键词：OCT-4肿瘤侵润细胞亚系
- 选择性环氧合酶-2抑制剂Celebrex对人胆囊癌GBC-SD细胞系VEGF表达的影响被引量：1
- 2007年
- 目的探讨选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂Celebrex对人胆囊癌GBC-SD细胞系血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法采用RT-PCR、免疫细胞化学技术以及Western blot联合检测Celebrex对GBC-SD细胞系VEGF mRNA和蛋白表达的影响,并观察量效和时效关系。结果随着药物浓度的增加(0、40、80、120、160μmol/L)和作用时间的延长(0、12、24、48、72h),VEGF mRNA和蛋白表达均呈现出了相应的下降趋势。结论Celebrex可以有效地抑制人胆囊癌GBC-SD细胞系VEGF的表达。
- 胡均王敏程旋刘文松陈敏秦仁义
- 关键词：胆囊癌环氧合酶抑制剂血管内皮生长因子
- 反义缺氧诱导因子-1α对胰腺癌细胞BxPC-3化疗敏感性的影响被引量：10
- 2006年
- 目的观察反义缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)对胰腺癌细胞BxPC-3化疗敏感性的影响。方法实验分组:(1)缺氧条件下(0.5%O2)体外培养4 h,未转染反义HIF-1α质粒的BxPC-3细胞设为缺氧对照组;(2)常氧条件下体外培养,未转染反义HIF-1α质粒的BxPC-3细胞设为常氧对照组;(3)缺氧条件下(0.5%O2)体外培养4 h,稳定转染反义HIF-1α质粒的BxPC-3细胞设为实验组。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹(W estern B lot)检测各组的HIF-1α和survivin表达情况。流式细胞术和MTT比色法检测不同剂量的化疗药物(5-氟尿嘧啶、阿霉素、吉西他宾)对各组的凋亡率和生长抑制率的影响。结果实验组HIF-1α和survivin的表达明显降低(P<0.0 5),与对照组相比,实验组的凋亡率、抑制率与剂量成正比,高剂量引起高抑制(P<0.0 5)。结论反义HIF-1α可能通过阻断survivin的表达而增强胰腺癌对化疗的敏感性。据此可望通过阻断HIF-1α的表达为胰腺癌基因治疗提供一种新途径。
- 常青秦仁义高军冯延平黄涛
- 关键词：化疗敏感性基因疗法
- 人胰腺癌细胞系表达干细胞标志物研究被引量：4
- 2008年
- 目的观察胚胎干细胞和胰腺相关干细胞标志物在胰腺癌细胞系中基因和蛋白水平的表达，探讨胰腺癌起源。方法应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测胚胎干细胞标志物Oct4、abcg2、c-kit以及c-kit配体干细胞因子（SCF）和胰腺相关干细胞标志物角蛋白19（ck19）、巢蛋白（nestin）、波形蛋白（vimentin）、胰十二指肠同源盒基因-1（PDX-1）等在胰腺癌细胞系sw1990、BxPC3、pc3和jf305中基因水平（mRNA）的表达；利用免疫细胞化学（ICC）方法检测Oct4、abcg2、c-kit和ck19、nestin在上述细胞系中蛋白水平的表达。同时结合异硫氰荧光素（FITC）标记抗体进行流式分选检测上述指标在胰腺癌细胞中的表达率。结果除BxPC3、pc3和jf305不表达c-kit以外，上述4种胰腺癌细胞系在mRNA水平表达其余所有的标志物；在蛋白水平，上述4种细胞均表达Oct4、abcg2、ck19、nestin，而除sw1990以外的3株胰腺癌细胞株不表达c-kit。结论人胰腺癌细胞系表达胚胎干细胞标志物Oct4、abcg2和胰腺干细胞标志物ck19、nestin、vimentin、PDX-1，部分表达c-kit。胰腺癌可能来源于成体胰腺干细胞或胰腺前体细胞。
- 杜志勇魏翠凤胡君王敏田锐秦仁义
- 关键词：胰腺癌胰腺干细胞标志物
