天津市应用基础与前沿技术研究计划(10JCYBJC26500)
- 作品数：7 被引量：12H指数：2
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- 相关机构：武警后勤学院武警医学院武警广东总队医院更多>>
- 发文基金：天津市应用基础与前沿技术研究计划国家自然科学基金更多>>
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- siRNA沉默ZNF580基因对内皮细胞MMP-2的表达及侵袭能力的影响被引量：1
- 2011年
- 【目的】观察ZNF580基因沉默后内皮细胞MMP-2的表达及迁移和侵袭能力的变化,为探讨ZNF580基因功能提供科学依据。【方法】针对ZNF580基因不同部位设计并化学合成3对不同靶向小干扰RNA(siRNA),脂质体介导瞬时转染EA.hy926内皮细胞;应用半定量RT-PCR、Western blotting及明胶酶谱检测转染前后内皮细胞ZNF580和MMP-2 mRNA、蛋白的表达及活性变化;运用划痕愈合实验和Transwell小室模型检测转染前后内皮细胞迁移和侵袭能力的改变。【结果】筛选出最佳干扰序列siRNA序列3;下调ZNF580基因表达后,MMP-2 mRNA的表达及明胶酶的活性均下调(P<0.05),且内皮细胞体外迁移和侵袭能力显著降低(P<0.01)。【结论】ZNF580在内皮细胞运动转移过程中具有重要作用,可能成为肿瘤基因治疗的一个新靶点。
- 韦淑萍孙慧燕牟心红张文成
- 关键词：RNA干扰内皮细胞MMP-2迁移
- ZNF580基因对人脐静脉内皮细胞增殖和迁移的影响被引量：2
- 2011年
- 【目的】研究人C2H2型锌指蛋白基因ZNF580在人脐静脉内皮细胞增殖和迁移中的作用。【方法】利用细胞转染技术获得瞬时过表达ZNF580的EA.hy926内皮细胞,并用半定量RT-PCR、Western blotting法检测ZNF580的表达情况;采用MTT比色法和细胞迁移实验检测ZNF580对内皮细胞功能的影响。【结果】获得瞬时过表达ZNF580的内皮细胞(转染效率为60%),且ZNF580基因过表达内皮细胞增殖和迁移能力分别增强3倍和2.5倍。【结论】ZNF580能够促进内皮细胞增殖和迁移。
- 张文成韦淑萍孙慧燕侯兵呼文亮
- 关键词：锌指基因内皮细胞增殖迁移
- TGF-β/Smad及TGF-β/MAPK介导肿瘤细胞凋亡的机制被引量：6
- 2012年
- 转化生长因子β(the transforming growth factor beta,TGF-β)是一类多功能的细胞因子,它参与调节细胞的增殖、分化、凋亡等多种生命活动。TGF-β在调控肿瘤细胞凋亡中的作用是复杂的。TGF-β/Smad信号转导通路和MAPK信号转导通路是TGF-β介导细胞凋亡的两条重要的下游信号转导途径。本文重点就TGF-β启动激活Smad信号转导途径和(或)MAPK信号转导途径介导肿瘤细胞凋亡的机制和作用展开探讨。
- 陈凯孙慧燕牟心红张文成
- 关键词：转化生长因子Β肿瘤细胞凋亡信号转导
- 大鼠锌指蛋白ZFP580的原核表达与分离纯化
- 2012年
- 【目的】构建ZFP580基因的原核表达质粒,转化大肠杆菌,诱导表达并分离纯化大鼠锌指蛋白ZFP580。【方法】根据ZFP580 cDNA序列的开放阅读框设计引物,利用PCR技术扩增ZFP580的开放阅读框cDNA序列,将PCR扩增的目的片段与载体pET30a分别双酶切、回收纯化后做定向连接,Nco I、Xho I双酶切电泳筛选、鉴定并测序。将构建的重组质粒pET30a-ZFP580转化大肠杆菌BL21(DE3),由异丙基-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达并纯化目的蛋白。【结果】成功扩增ZFP580基因并构建了表达质粒pET30a-ZFP580,测序结果表明与GeneBank公布的序列一致。含有该质粒的大肠杆菌BL21(DE3)经IPTG诱导表达后,产物蛋白分子量约为19 kDa。【结论】成功表达并纯化了大鼠ZFP580蛋白,为进一步研究锌指蛋白ZFP580的功能奠定了基础。
- 牟心红李海生梁林张文成
- 关键词：原核表达
- ZNF580在1-磷酸鞘氨醇诱导内皮细胞迁移和增殖中的作用被引量：4
- 2012年
- 目的:研究人锌指蛋白ZNF580在1-磷酸鞘氨醇(sphingosine 1-phosphate,S1P)诱导内皮细胞迁移和增殖中的作用,为探讨ZNF580功能提供科学依据。方法:RT-PCR检测S1P受体在EA.hy926细胞的表达情况;不同浓度(0～10μmol/L)S1P刺激EA.hy926细胞不同时间(0～12 h)后,RT-PCR和Western blotting检测S1P对ZNF580表达的影响;利用p38 MAPK信号通路特异性抑制剂SB203580研究S1P是否通过此信号通路影响ZNF580的表达;脂质体转染法获得瞬时过表达和瞬时低表达ZNF580的EA.hy926细胞;Transwell实验及MTT比色法分析ZNF580对内皮细胞迁移和增殖活性的影响。结果:EA.hy926细胞表达S1P1、S1P3和S1P5三种受体,其cDNA的特异性扩增产物分别为352 bp、701 bp和236 bp;S1P刺激EA.hy926细胞后,ZNF580的表达呈现剂量和时间依赖性增高;SB203580能够抑制S1P诱导的ZNF580的上调作用;ZNF580过表达(低表达)后内皮细胞迁移和增殖活性明显增强(减弱)。结论:S1P通过p38 MAPK信号通路影响ZNF580的表达;ZNF580在内皮细胞迁移和增殖过程中起着重要的调控作用。
- 韦淑萍孙慧燕刘未张文成
- 关键词：1-磷酸鞘氨醇内皮细胞
- 血管生成素及其受体Tie2在婴幼儿血管瘤表达的研究
- 2014年
- 目的研究婴幼儿血管瘤血管内皮细胞血管生成素及其受体Tie2的表达情况，初步探讨婴幼儿血管瘤生长异常的病理生理学机制，为其治疗奠定理论基础。方法以40例血管瘤患儿手术切除的血管瘤组织为研究对象，其中增生期和消退期标本各20例，另取正常皮肤组织（包茎患儿包皮环切术切除的包皮组织）20例作为正常对照。应用半定量PCR技术检测血管生成素-1（Angl）、血管生成素一2（Ang2）及其受体Tie2 mRNA表达情况；应用Western blotting技术检测Ang1、Ang2及其受体Tie2蛋白表达情况。结果Rt—PCR和Westem blotting结果均显示：在增生期和消退期瘤体中，Ang1 mRNA和蛋白的表达量明显低于正常包皮组织，P〈0．05；Ang2和Tie2 mRNA和蛋白的的表达量明显高于正常包皮组织，P〈0．05；三者的表达在增生期和消退期瘤体之间没有统计学差异，P〉0．05。结论婴幼儿血管瘤中存在Ang1、Ang2和Tie2的异常表达，可能参与了血管瘤的发生与发展机制。
- 王辉刘茵王正晖韦淑萍
- 关键词：血管瘤血管生成素TIE2受体
- ZNF580过表达对内皮细胞血管内皮生长因子的表达及增殖能力的影响被引量：1
- 2013年
- 【目的】研究人锌指蛋白新基因ZNF580过表达对人脐静脉内皮细胞株EA.hy926血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达及增殖能力的变化,为探讨ZNF580基因功能提供科学依据。【方法】重组质粒pEGFP-ZNF580经LipofectamineTM2000脂质体转染法转染EA.hy926细胞,48h后荧光显微镜下观察ZNF580-EGFP在内皮细胞中的表达情况;应用半定量RT-PCR、Western blotting及ELISE法检测转染前后内皮细胞ZNF580和VEGFmRNA、蛋白表达的变化;运用MTT实验检测转染前后内皮细胞增殖能力的改变。【结果】荧光显微镜下示融合蛋白ZNF580-EGFP在EA.hy926细胞核中表达;ZNF580基因过表达后,内皮细胞VEGFmRNA及蛋白的表达均上调(P<0.05),且其增殖能力显著升高(P<0.01)。【结论】ZNF580可以调控EA.hy926细胞VEGF的表达,且ZNF580在内皮细胞增殖过程中具有重要的调节作用。
- 韦淑萍侯兵孙慧燕张文成
- 关键词：锌指蛋白内皮细胞血管内皮生长因子增殖
