中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(13-1)
- 作品数：6 被引量：26H指数：3
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- 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项公益性行业(农业)科研专项广西壮族自治区科技攻关计划更多>>
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- 猪乙型脑炎病毒广西分离株FC792 E基因主要抗原域的原核表达及抗原性鉴定
- 2013年
- 对广西猪JEV FC792株的E基因主要抗原域Ⅰ、Ⅱ基因(Ea基因)进行原核表达及抗原性鉴定,为猪流行性乙型脑炎病毒(JEV)诊断抗原和基因工程疫苗的研制奠定基础。结果:成功构建广西猪JEV FC792株Ea基因的克隆重组质粒pMD18-T-Ea及表达重组质粒pET32a-Ea,经SDS-PAGE及Western blot鉴定表明,JEV FC792株Ea蛋白在Rosetta(DE3)菌中成功进行融合表达,表达出约58 KDa的融合蛋白;经抗原性鉴定表明,表达的融合蛋白Ea能与猪JEV阳性血清抗体发生特异性反应,融合蛋白Ea具有良好的JEV抗原性。
- 卢冰霞李斌秦毅斌赵武梁家幸韦超文何颖苏乾莲梁保忠李莹莹姜佳佳杨盛斌黄伟坚
- 关键词：原核表达
- 猪流行性乙型脑炎RT-LAMP方法的建立与初步应用被引量：3
- 2013年
- [目的]建立1种快速、灵敏、特异的检测猪流行性乙型脑炎病毒(JEV)逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法。[方法]根据JEV E基因序列的保守区6个位点设计了4条特异性LAMP引物,以JEV阳性样品RNA为模板进行一步法扩增,并对反应条件和反应体系进行了优化。[结果]该方法具有较高的灵敏度,其检测极限为0.5 pg;特异性试验表明其具有较高的特异性,对其他病毒性病原体均无扩增反应。与RT-Nested-PCR相比,2种方法检出率的符合率为90.9%。反应结束后可以通过添加化学发光剂进行可视化观察,大大缩短了检测时间。该方法无需特殊仪器,只需在水浴锅中进行,是一种适于基层的简便、灵敏、快速的猪JE的检测方法。[结论]成功建立了猪流行性乙型脑炎RT-LAMP方法,并在临床上进行了初步应用。
- 卢冰霞刘磊秦毅斌赵武梁家幸郭旋黎木兰李斌何颖苏乾莲梁保忠闭炳芬黄伟坚
- 关键词：RT-LAMP敏感性特异性
- 猪乙型脑炎病毒广西分离株FC792的囊膜糖蛋白E基因克隆及生物信息学分析被引量：3
- 2013年
- 为了研究开发快速、敏感、特异的猪乙型脑炎(Japanese encephalitis,JE)诊断试剂和免疫效果良好的猪JE基因工程疫苗,对2011年分离到的广西猪乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)FC792株的E基因进行克隆、测序及生物信息学分析。结果测序获得1500bp的完整FC792株E基因序列,经同源性比对及遗传进化树分析表明,FC792株为基因Ⅲ型JEV毒株,且属于弱毒株。应用在线软件SignalP 4.1对FC792株E蛋白进行信号肽的预测,结果预测到FC792株E蛋白不存在信号肽。应用在线软件NetNGlyc 1.0预测到FC792株E蛋白存在1个N-糖基化位点:154-NYSA,线软件NetPhos 2.0预测到其存在如下磷酸化位点:丝氨酸(Ser)有10个位点;苏氨酸(Thr)有6个位点;酪氨酸(Tyr)有5个位点。应用在线免疫信息学软件预测到FC792株E蛋白有16个B细胞抗原优势表位(分值(score)≥0.85),5个CTL抗原表位,10个Th抗原表位。应用在线软件GOR4预测FC792株E蛋白的二级结构,发现α-螺旋区域占21.20%,延伸链区域占30.40%;无规则卷曲区域占48.40%。应用在线软件SWISS-MODEL对FC792株E蛋白进行三维结构预测的同源模建,结果可见FC792株E蛋白存在大量的无规则卷曲和延伸链区域,并有多个α-螺旋区域,它们螺旋扭转卷曲形成近似左右对称的2个亚基的二聚体空间立体结构。研究结果为今后研制猪JE诊断抗原和猪JE基因工程疫苗提供参考借鉴。
- 李斌卢冰霞秦毅斌赵武梁家幸韦超文何颖苏乾莲陈忠伟闭炳芬段群棚李莹莹姜佳佳梁保忠黄伟坚
- 关键词：乙型脑炎病毒E基因克隆生物信息学
- 猪肾细胞系IBRS-2感染猪细小病毒的检测
- 本研究应用聚合酶链式反应技术对未接种猪细小病毒但出现类似猪细小病毒感染病变的日常培养猪肾细胞系IBRS-2进行检测,结果发现IBRS-2细胞感染了猪细小病毒。检测结果表明猪肾细胞系IBRS-2感染猪细小病毒较为常见,提示...
- 李斌梁家幸苏乾莲赵武秦毅斌何颖卢冰霞段群棚李莹莹姜佳佳梁保忠
- 关键词：聚合酶链式反应猪细小病毒
- 文献传递
- 猪乙型脑炎病毒广西分离株FC792的囊膜糖蛋白E基因克隆及生物信息学分析
- 为了研究开发快速、敏感、特异的猪乙型脑炎(Japanese encephalitis,JE)诊断试剂和免疫效果良好的猪JE基因工程疫苗,对2011年分离到的广西猪乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis ...
- 李斌卢冰霞秦毅斌赵武梁家幸韦超文何颖苏乾莲陈忠伟闭炳芬段群棚李莹莹姜佳佳梁保忠黄伟坚
- 关键词：乙型脑炎病毒E基因克隆生物信息学
- 文献传递
- 猪流行性乙型脑炎RT-LAMP方法的建立与初步应用
- 【目的】建立一种快速、灵敏、特异的检测猪流行性乙型脑炎病毒(JEV)逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法。【方法】根据JEVE基因序列的保守区6个位点设计了4条特异性LAMP引物,以JEV阳性样品RNA为模板进...
- 卢冰霞刘磊秦毅斌赵武梁家幸郭旋黎木兰李斌何颖苏乾莲梁保忠闭炳芬黄伟坚
- 关键词：RT-LAMP敏感性特异性
- 文献传递
- 猪乙型脑炎病毒广西分离株FC792E基因主要抗原域的原核表达及抗原性鉴定
- 为了猪流行性乙型脑炎病毒(JEV)诊断抗原和基因工程疫苗的研制做准备,对广西猪JEVFC792株的E基因主要抗原域Ⅰ、Ⅱ基因(Ea基因)进行原核表达及抗原性鉴定。结果表明,成功构建广西猪JEV FC792株Ea基因的克隆...
- 卢冰霞李斌秦毅斌赵武梁家幸韦超文何颖苏乾莲梁保忠李莹莹姜佳佳杨盛斌黄伟坚
- 关键词：原核表达
- 文献传递
- 猪肾细胞系IBRS-2感染猪细小病毒的检测
- 2013年
- 本研究应用聚合酶链式反应技术对未接种猪细小病毒,但出现类似猪细小病毒感染病变的日常培养猪肾细胞系IBRS-2进行检测,结果发现IBRS-2细胞感染了猪细小病毒。检测结果表明猪肾细胞系IBRS-2感染猪细小病毒较为常见,提示在IBRS-2细胞培养过程中要注意预防猪细小病毒的感染。
- 李斌梁家幸苏乾莲赵武秦毅斌何颖卢冰霞段群棚李莹莹姜佳佳梁保忠
- 关键词：聚合酶链式反应猪细小病毒
- 猪乙型脑炎病毒广西分离株FC792的囊膜糖蛋白E基因克隆及生物信息学分析
- 为了研究开发快速、敏感、特异的猪乙型脑炎(Japanese encephalitis,JE)诊断试剂和免疫效果良好的猪JE基因工程疫苗,对2011年分离到的广西猪乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis ...
- 李斌卢冰霞秦毅斌赵武梁家幸韦超文何颖苏乾莲陈忠伟闭炳芬段群棚李莹莹姜佳佳梁保忠黄伟坚
- 关键词：乙型脑炎病毒E基因克隆生物信息学
- 猪流行性腹泻病毒变异毒株与经典毒株RT-PCR鉴别检测方法的建立及应用被引量：19
- 2014年
- 为建立猪流行性腹泻病毒(PEDV)变异毒株的快速RT-PCR检测方法,根据GenBank中PEDV S基因序列设计合成1对特异性扩增引物,通过优化反应条件,建立了检测PEDV变异毒株的RT-PCR方法。结果显示,建立的RT-PCR鉴别检测方法能特异性区分疫苗株CV777和PEDV变异毒株,仅能扩增出PEDV变异毒株826bp的目的片段,与猪传染性胃肠炎病毒、A群猪轮状病毒、猪嵴病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、伪狂犬病病毒、猪瘟病毒及猪细小病毒均无交叉反应。敏感性试验结果显示,该方法能检测到的最低核酸质量为11.3pg。利用该方法对采集自广西部分地区的123份临床腹泻样品进行检测,临床腹泻样品中PEDV阳性率为67.5%,变异毒株占总PEDV毒株的86.7%(72/83)。结果表明,该RT-PCR鉴别诊断方法特异性强、灵敏度高、操作简单,为猪流行性腹泻的流行病学及病原诊断研究提供了可供借鉴的技术手段。
- 秦毅斌卢冰霞赵武何颖李莹莹李斌梁家幸梁保忠苏乾莲蒋冬福周英宁
- 关键词：猪流行性腹泻病毒RT-PCR
