公共文化服务平台

共 9 条记录，以下是 1-9

全选清除导出

排序方式：

反向遗传学在呼吸道合胞病毒减毒活疫苗研究中的应用被引量：4: 2011年; 人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,RSV)是引起婴幼儿下呼吸道感染的最重要的病毒病原,减毒RSV活疫苗能模拟自然感染充分活化机体固有免疫系统,并诱导产生体液免疫和细胞免疫,不会产生疾病增强作用,经黏膜途径应用,能突破母传抗体的干扰,因而受到广泛关注,反向遗传学(reverse genetics)在减轻野生型RSV毒力和增强其免疫原性等方面具有传统减毒技术不可比拟的优势,所以综述了反向遗传学在RSV减毒活疫苗研究中的应用。; 付远辉何金生洪涛; 关键词：呼吸道合胞病毒反向遗传学减毒活疫苗

以减毒鼠伤寒沙门菌为载体的人呼吸道合胞病毒F蛋白DNA疫苗滴鼻免疫抗体分析被引量：4: 2011年; 【目的】以减毒鼠伤寒沙门菌(Salmonella typhimurium aroA strain SL7207,SL7207)为载体携带可表达呼吸道合胞病毒(Human respiratory syncytial vrius,RSV)密码子优化的融合蛋白(Fusion glycoprotein,F)的真核表达质粒,探讨不同黏膜免疫途径及密码子优化对免疫效果的影响。【方法】通过对RSV野生型F基因(Fwt)进行密码子优化,获得密码子优化的F基因(Fsyn),并构建可表达Fsyn的真核表达质粒pcDNA3.1/Fsyn,转化SL7207得到SL7207/pcDNA3.1/Fsyn。分别经滴鼻和灌胃途径,免疫BALB/c小鼠,采用间接ELISA方法比较免疫效果。【结果】与灌胃组相比,滴鼻组诱导小鼠产生了更高水平的血清IgG和黏膜SIgA,获得了更好的免疫效果(P<0.05)。与野生型相比,密码子优化的F蛋白具有更好的免疫原性(P<0.05)。【结论】经滴鼻途径免疫和密码子优化能够提高以SL7207为载体的RSV DNA疫苗免疫效果。; 程明何金生付远辉乔伟焦月盈; 关键词：人呼吸道合胞病毒黏膜免疫

人呼吸道合胞病毒活疫苗研究进展被引量：14: 2011年; 人呼吸道合胞病毒是引起婴幼儿支气管炎和肺炎的主要原因,也可导致免疫缺陷病人及老年人群显著发病和死亡.人呼吸道合胞病毒疫苗已被世界卫生组织(World Health Organization,WHO)列为全球最优先发展的疫苗之一.经过50多年的研究,尤其是随着重组技术和反向遗传学的出现,对RSV疫苗的研究取得了重要进展,但尚未有疫苗上市.目前主要集中于亚单位疫苗及活疫苗等,其中活疫苗包括减毒活疫苗和活病毒载体疫苗,因其最有可能用于预防婴幼儿RSV感染,而受到了较大关注.以rA2cp248/404/1030ΔSH为代表的RSV减毒活疫苗临床试验显示,其有较好的安全性及免疫保护作用,不产生疾病增强作用是极有潜力的候选疫苗.因此,本文将重点介绍RSV活疫苗研究的主要进展和发展方向.; 何金生付远辉洪涛; 关键词：人呼吸道合胞病毒减毒活疫苗反向遗传学

免疫磁珠纯化人呼吸道合胞病毒F蛋白方法的建立被引量：1: 2011年; 目的利用免疫磁珠分离技术(IMS)建立快速纯化人呼吸道合胞病毒(RSV)融合蛋白(F)的方法。方法表达RSV F的重组腺病毒FGAd/F感染293细胞,收获细胞裂解液,利用兔抗人RSV多抗包被表面活化的免疫磁珠富集和纯化F蛋白,同时建立夹心ELISA,检测纯化的F蛋白浓度以及F蛋白的回收率。结果采用IMS成功纯化分子量为145～170 ku区间的二聚体RSV F蛋白,SDS-PAGE分析结果显示F蛋白得到很好的纯化,纯化所得RSV F蛋白浓度为116 mg/L,回收率为41.1%。结论利用IMS可有效地富集和纯化RSV F蛋白。; 方璇何金生唐亚宁付远辉王小波郑妍鹏; 关键词：免疫磁化分离

抗人呼吸道合胞病毒融合糖蛋白单克隆抗体的制备及体外鉴定被引量：2: 2012年; 目的:获得能稳定分泌抗人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,RSV)融合糖蛋白(fusion glycoprotein,F)单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb)的杂交瘤细胞株,以期用于RSV感染的早期诊断和被动免疫治疗研究。方法:通过杂交瘤技术制备可特异性识别RSV F的单抗,体外鉴定生物学特性。结果:获得了可分泌抗RSV F蛋白的杂交瘤细胞株F8,体外连续传代培养2个月,能稳定分泌抗体F8,培养上清效价为1∶1000,亲和常数(Ka)为6.8×108L/mol。F8属IgG1型抗体,可特异性识别RSV F1亚单位的AA 205-222。免疫酶法蚀斑减少中和实验证实F8具有体外中和活性及融合抑制活性。结论:获得具有中和活性的抗RSV F蛋白的单克隆抗体,为RSV感染的早期诊断及被动免疫治疗等奠定了基础。; 张梅王小波付远辉方璇王鑫张莹何金生; 关键词：人呼吸道合胞病毒单克隆抗体杂交瘤技术

呼吸道合胞病毒感染滴度测定方法的建立与比较被引量：1: 2010年; 目的建立稳定的呼吸道合胞病毒（RSV）感染滴度测定的实时荧光定量PCR（Realtime Quantitative PCR，Q-PCR）检测方法和酶免疫斑点法（Enzyme Immunospots，EIS），并与半数定量方法（50％tissue culture infectious doses，TCID50）进行比较。方法分别采用Q-PCR、EIS和TCID50分析RSV感染的细胞和RSV攻毒后小鼠肺脏标本中的病毒滴度。结果RSV感染细胞的上清中，三种分析方法检测的病毒滴度值之比为：Q—PCR和EIS（pfu）的比约为10：1，EIS（pfu）和TCID50（TCID50换算成pfu）比约为10：1；RSV攻毒后小鼠肺脏标本中，三种分析方法检测的病毒滴度值之比为，Q—PCR和EIS（pfu）比约为1000：1，EIS（pfu）和TCID50（TCID50换算成pfu）比约为5：1。结论成功建立了RSV感染滴度测定的Q-PCR和EIS分析方法，通过与TCID50方法的比较分析，我们认为EIS法分析RSV滴度具有成本低和较高的灵敏度，有较好的应用前景。; 王小波何金生付远辉郑娴娴方璇; 关键词：呼吸道合胞病毒滴定分析法聚合酶链反应半数抑制浓度

呼吸道合胞病毒载体疫苗研究进展被引量：4: 2012年; 人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,RSV)是引起婴幼儿下呼吸道感染的最重要的病毒病原,RSV载体疫苗可在人细胞内从头合成,形成的蛋白质构象与RSV自然感染后表达的完全相同,不会导致抗原表位的丧失或变化,形成的免疫力更利于抵抗随后的自然感染;经黏膜途径免疫不会产生疾病增强作用,且能突破母传抗体的干扰,因而受到广泛关注。对近年来RSV载体疫苗的研究进展进行了综述。; 付远辉何金生洪涛; 关键词：呼吸道合胞病毒载体疫苗

间接免疫荧光法筛选抗呼吸道合胞病毒单克隆抗体及其性质的初步鉴定: 2012年; 目的利用活体骨髓瘤细胞与杂交瘤技术,采用间接免疫荧光分析法(IFA)筛选出更多可识别人呼吸道合胞病毒(RSV)的单克隆抗体,并对其体外性质进行鉴定,以期为RSV的被动免疫治疗以及临床诊断奠定基础。方法以RSV通过滴鼻途径免疫小鼠,同时采用实体瘤技术体内制备骨髓瘤细胞。取免疫后小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合,利用IFA方法筛选经有限稀释法亚克隆获得的可稳定分泌抗RSV单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株。通过间接ELISA和Western blot等方法初步分析McAb对RSV蛋白的特异性结合能力,通过免疫酶法(IE)蚀斑减少中和实验和融合抑制实验分析McAb体外保护作用。结果获得4株稳定分泌抗RSV单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别为2A7、3E10、1F10及3G4,经间接ELISA以及Westernblot初步鉴定,获得的4株单克隆抗体可特异性识别RSV蛋白,McAbs 2A7和3E10可分别识别融合糖蛋白(F)蛋白二聚体和单体,McAbs 1F10和3G4可识别黏附糖蛋白(G)蛋白。其中McAbs 2A7与1F10可以在体外抑制RSV对HEp-2细胞的感染,具有中和活性,同时具有融合抑制活性。结论利用IFA法成功筛选了能特异性识别RSV的4种单克隆抗体,初步鉴定显示两种单抗可分别识别F蛋白二聚体和单体,另两种单抗可识别G蛋白。IE法蚀斑减少实验显示两种单抗在体外具有中和活性和融合抑制活性,表明获得的单抗对RSV感染具有一定的预防作用。; 张梅何金生; 关键词：人呼吸道合胞病毒间接免疫荧光单克隆抗体中和活性

以果蝇表达载体系统构建可稳定表达抗菌性多肽Trappin-2的S2细胞株: 2013年; 目的采用果蝇S2表达系统,构建可与S2细胞基因组整合的分别含有Trappin-2和EGFP的重组质粒,筛选出两种抗性稳定可表达Trappin-2和EGFP的多克隆S2细胞株,为后期研究Trappin-2黏膜佐剂等生物学活性奠定基础。方法首先对pMT/Bip/V5-His A果蝇表达载体进行改造,去掉pMT/Bip/V5-His A的Bip信号肽,改造成为pMT/V5-His A,采用RT-PCR方法从A549细胞中得到含信号肽的、完整的Trappin-2基因,在引物的5'端引入NotⅠ酶切位点及Kozak序列;引物的3'端引入XhoⅠ酶切位点和双终止密码子。利用DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pMT/V5-His A中,得到重组表达质粒pMT-Trappin-2(简称pMT-T2)真核表达载体。为了观察、比较转染效率和表达水平,同时构建了带有增强型绿色荧光蛋白(EG-FP)的载体pMT/V5-His A-EGFP(简称pMT/EG-FP)。采用脂质体介导的转染技术将鉴定正确的两种质粒pMT-T2和pMT-EGFP分别与抗性筛选质粒pCoHygro(简称pro)共转入果蝇S2细胞中,用含有300 mg/ml潮霉素B的完全培养基进行筛选,经过3～4周,筛选出两种抗性稳定多克隆S2细胞株,用终浓度为500μmol/L的CuSO4诱导表达48 h后,分别通过荧光显微镜、RT-PCR和Western blot分析目的蛋白在S2细胞中的表达水平。结果采用RT-PCR方法从A549细胞中得到Trappin-2基因,通过NotⅠ和XhoⅠ双酶切位点将Trappin-2克隆入改造好的pMT/V5-His A载体上,构建了pMT-T2和pMT-EGFP质粒,应用脂质体转染技术将真核表达载体和抗性筛选质粒pro共转染果蝇S2细胞,通过潮霉素B反复筛选,3～4周后,成功筛选到两种稳定的抗性多克隆细胞株,分别命名为S2-Trappin-2和S2-EGFP,用CuSO4分别诱导两个细胞株,在荧光显微镜下可观察到S2-EGFP主要表现为胞浆绿色荧光,RT-PCR结果证实Trappin-2在S2细胞中可稳定表达,Western blot分析S2-Trappin-2细胞培养上清可见分子量约10 ku的特异性条带,成功建立可稳定高表达Trappin-2和EGFP蛋白的果�; 赵秀玲何金生; 关键词：真核表达载体蛋白增强型绿色荧光蛋白

全选清除导出

共1页<1>

北京市自然科学基金(7092053)

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户反馈

北京市自然科学基金(7092053)

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户登录

用户反馈