国家自然科学基金(30371418)
- 作品数：6 被引量：19H指数：3
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- 重组人纤维连接蛋白羧基端细胞结合域单克隆抗体的制备与鉴定
- 2004年
- 目的:制备人纤维连接蛋白(fibronectin,FN)羧基端细胞结合域的单克隆抗体,并以该抗体检测心脏瓣膜基质蛋白中FN蛋白的表达情况。方法:用RT-PcR方法获取人FN羧基端细胞结合域基因序列,通过pET32质粒表达获得TRX融合蛋白。并以纯化的融合蛋白作为抗原免疫BALB／c小鼠后,按常规方法制备成单克隆抗体,获得分泌抗FN单克隆抗体的杂交瘤细胞株。结果:蛋白电泳结果显示,所获TRX融合蛋白条带与理论计算值相符,免疫动物后获得2株分泌抗FN羧基端细胞结合域不同位点单克隆抗体的杂交瘤细胞株,抗体亚型为IgC2a,免疫组化显示该抗体能特异性地结合人心脏瓣膜基质中的FN。结论:成功制备了分泌抗FN单克隆抗体,为FN结构、功能和机制的研究提供了有效工具。
- 黄盛东陆方林陈和忠龚德军徐志云
- 关键词：纤维连接蛋白
- 重组纤维连接蛋白羧基端细胞结合域对骨髓基质干细胞黏附力的影响被引量：6
- 2005年
- 目的:研究增强骨髓基质干细胞黏附力的方法。方法:去细胞猪主动脉瓣叶分别用纤维连接蛋白(Fn)和重组纤维连接蛋白羧基端细胞结合域(FnCTD64)及牛血清白蛋白(BSA)浸泡预涂处理12 h,对照组未预涂蛋白。采用间隔24 h、3次种植的方法种植骨髓基质干细胞(BMSCs),于种植后第8天进行细胞计数及MTT法检测比较去细胞瓣叶上黏附、增殖的细胞数量,同时取瓣叶进行组织学检测观察瓣叶表面BMSCs覆盖情况。结果:采用预涂Fn和FnCTD64后的去细胞猪主动脉瓣叶,预涂Fn组的细胞计数为(9.085±0.622)×104,MTT的吸光值为0.537±0.022;预涂FnCTD64组的细胞计数为(9.111±0.607)×104,MTT的吸光值为0.540±0.025;预涂BSA组的细胞计数为(4.593±0.464)×104,MTT的吸光值为0.360±0.018;对照组的细胞计数为(4.460±0.441)×104,MTT的吸光值为0.353±0.019;前两组明显高于后两组(P<0.01)。预涂Fn组和FnCTD64组无显著性差异。瓣叶经H-E染色,可见预涂Fn和FnCTD64组细胞覆盖情况优于预涂BSA组和对照组。结论:Fn和FnCTD64能明显增加BMSCs在去细胞猪主动脉瓣叶表面的黏附和增殖。
- 徐瑞剑黄盛东徐志云龚德军张宝仁徐驯海
- 关键词：骨髓基质干细胞细胞黏附
- 重组腺病毒介导的血管生成素改善缺血性心脏病的实验研究被引量：4
- 2007年
- 目的观察重组腺病毒介导的血管生成素促进慢性缺血心肌血管生成,并改善心肌血流灌注和心功能的有效性。方法置Ameriod环建立猪慢性心肌缺血模型,并随机分为3组,血管生成素腺病毒组,空病毒组,对照组。分别心内注射腺病毒介导的血管生成素基因、空病毒和生理盐水。通过冠状动脉造影、心脏超声、核磁心肌灌注成像、病理学观察等评价血管生成素的治疗效果。结果置环后的猪均为有效的动物模型。注射血管生成素的缺血心肌模型侧支血管增生明显,血管计数增加,Rentrop分数、面积变化分数改善,梗死区缩小,缺血区血管密度增高尤其是内皮细胞、平滑肌细胞增加,凋亡细胞减少、细胞之间的黏附性增加。结论腺病毒介导的血管生成素基因治疗缺血性心脏病可明显改善心功能,使局部血液循环明显改善。
- 黄盛东刘晓红白辰光袁扬龚德军徐志云
- 关键词：血管生成素类腺病毒科基因疗法
- 用骨髓基质干细胞分化的内皮细胞体外构建组织工程心脏瓣膜被引量：2
- 2006年
- 目的:探讨用骨髓基质干细胞(BMSCs)诱导分化产生的内皮细胞和去细胞异种天然瓣膜支架体外构建组织工程心脏瓣膜(TEHV)的可行性。方法:以含EGF、bFGF、IGF和肝素的M199培养液培养绵羊原代BMSCs,并以VEGF诱导BMSCs向内皮细胞分化。采用去污剂和酶消化法制作去细胞猪主动脉瓣支架,通过静态种植方法构建TEHV。经H-E染色、免疫组化、扫描电镜及透射电镜检查观察TEHV的组织学和超微结构。结果:诱导分化产生的内皮细胞在去细胞瓣叶支架及整体瓣膜支架上呈单层生长,形成完整的内皮细胞单层。瓣叶表面细胞呈梭形,CD34及Ⅷ因子相关抗原免疫组化染色阳性。结论:BMSCs诱导分化产生的内皮细胞具有与成熟内皮细胞相同的生物学特性。采用BMSCs诱导分化内皮细胞构建TEHV更为简便可行。
- 杨立信徐志云张宝仁黄盛东
- 关键词：骨髓基质干细胞细胞分化内皮细胞心脏瓣膜
- 应用人骨髓间质干细胞与脱细胞猪主动脉瓣膜支架体外构建组织工程心脏瓣膜被引量：4
- 2007年
- 目的:应用动物来源的细胞构建组织工程化心脏瓣膜的研究较多,本实验特征在于观察人骨髓间质干细胞与脱细胞猪主动脉瓣膜支架体外构建组织工程心脏瓣膜,并探讨其作为种子细胞的可行性。方法:实验于2005-12/2006-10在解放军第二军医大学长海医院全军胸心外科研究所完成,研究方案获伦理委员会批准。①实验材料:取开胸术中切除的肋骨骨髓,术前已经患者知情同意。新鲜猪心脏瓣膜取自上海复新屠宰场。②实验方法:Ficoll密度梯度离心从肋骨骨髓中获取骨髓单个核细胞,体外扩增培养后鉴定。采用去污剂和酶消化法将猪主动脉瓣叶行脱细胞处理,种植人骨髓间质干细胞。③实验评估:采用EnVision二步法染色鉴定人骨髓间质干细胞形态及细胞表型;采用苏木精-伊红染色、维多利亚蓝染色和VanGieson氏染色法观察细胞在脱细胞猪主动脉瓣叶支架上的生长特点;扫描电镜观察静态构建组织工程心脏瓣膜的形态。结果:①人骨髓间质干细胞形态及细胞表型鉴定:人骨髓间质干细胞为梭形,抗平滑肌抗体和波形蛋白染色阳性,CD31及Ⅷ因子染色阴性。②脱细胞猪主动脉瓣膜支架的组织学观察:猪去细胞瓣膜支架去细胞完全,弹力纤维及胶原纤维保持完整,种植的人骨髓间质干细胞在脱细胞瓣叶表面形成完整的细胞层。③构建组织工程心脏瓣膜的形态学观察:扫描电镜示瓣膜表面细胞层完整,细胞呈梭形复层生长。结论:人骨髓间质干细胞体外具有自然分化为肌成纤维细胞的特性,在去细胞猪主动脉瓣膜上生长良好,可作为一种有前途的种子细胞构建组织工程心脏瓣膜。
- 刘洪涛黄盛东张宝仁徐志云
- 关键词：骨髓间质干细胞心脏瓣膜
- 骨髓诱导分化内皮细胞构建组织工程心脏瓣膜的实验研究被引量：3
- 2006年
- 杨立信徐志云黄盛东刘延玲张宝仁
- 关键词：组织工程心脏瓣膜骨髓基质干细胞诱导分化细胞构建
