湖北省自然科学基金(4-306)
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 相关作者：王泽华于利利王静李智敏胡沙更多>>
- 相关机构：华中科技大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- Livin异构体特异性shRNA对宫颈癌Hela细胞凋亡的影响被引量：2
- 2008年
- 目的:应用构建成功的Livin异构体(BIRC71,BIRC72)短发夹RNA(short hairpin HNA,shRNA)真核表达载体转染Hela细胞,探讨其对Livin基因的沉默效应及诱导Hela细胞凋亡的作用。方法:采用脂质体转染法转染Hela细胞,荧光实时定量PCR、Western blotting检测转染前后宫颈癌Hela细胞Livin基因拷贝数和蛋白表达的变化,将shRNA表达载体流式细胞术检测不同时间(24、48、72h)的细胞凋亡率。结果:真核表达载体的转染效率48 h较24、72 h高;转染pGenesil-1- BIRC71、pGenesil-1-BIRC72后Hela细胞中Livin拷贝数明显减少(P<0.05),蛋白质表达水平显著降低(P<0.05);流式细胞术检测24、48、72 h凋亡率,转染Livin shRNA组细胞的凋亡率显著高于对照组(P<0.05),随时间延长(24→72 h)凋亡率相应增加。结论:靶向Livin的shRNA真核表达载体可以有效特异地阻断Livin基因的表达。
- 于利利王泽华
- 关键词：LIVIN基因短发夹RNA宫颈癌
- Egr1信号途径参与NDRG1表达调节的机制研究
- 2010年
- 目的:研究人宫颈癌细胞中早期生长反应基因1(Egr1)信号途径参与N-myc下游调节基因1(NDRG1)表达调节的机制。方法:以人宫颈癌细胞株SiHa为研究对象,利用siRNA干扰技术使Egr1基因沉默,用RT-PCR和W estern blot检测转染前后Egr1表达的变化。通过RT-PCR和W estern blot检测细胞在低氧条件下,以及转染siRNA-Egr1后在低氧或低氧模拟物(DFX)条件下,Egr1与NDRG1表达的变化。结果:siRNA能有效地抑制Egr1基因表达(P<0.001)。低氧条件下,Egr1、NDRG1的蛋白水平均明显升高(P<0.001)。转染siRNA-Egr1 48h后,细胞在低氧条件下作用1h,Egr1 mRNA表达显著下降(P<0.05)。细胞转染siRNA-Egr1 48h后,在低氧及DFX条件下作用24h,结果显示DFX使NDRG1 mRNA的表达显著高于低氧条件(P<0.05)。同时也显示siRNA-Egr1能够使NDRG1 mRNA水平明显减少(P<0.05)。结论:体内环境因素如低氧、DFX等上调NDRG1基因的表达,通过Egr1信号途径参与NDRG1在宫颈癌细胞中表达的调节。
- 王静胡沙李智敏于利利王泽华
- 关键词：NDRG1宫颈肿瘤SIRNA转染
