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A549肺癌细胞株中肿瘤干细胞与克隆形成的关系被引量：18: 2006年; 目的观察克隆形态是否与肿瘤细胞的不断自我更新相关。方法将A549细胞株单细胞悬液接种到96孔板,观察克隆形成率和克隆形态及传代情况,测量克隆大小,并计数细胞数目。分别观察早期、中间和晚期的黏附细胞数目,检测其细胞增殖活性和细胞免疫表型。结果A549细胞可形成3种类型的克隆集落,其中,Holoclone型占总克隆数的4％,克隆体积大,可连续传代20代以上,并可分化为其他2种类型的集落,增殖活性不随时间延长而降低,并表达干细胞标记。结论A549中Holoclone型集落存在不断自我更新的肿瘤干细胞。; 黄盛东刘晓红白辰光龚德军袁扬刘延玲; 关键词：肺癌干细胞克隆

沉默血管内皮生长因子及促血管生成素-2基因抑制裸鼠人肺腺癌移植瘤生长的实验研究被引量：3: 2011年; 目的研究沉默血管内皮生长因子(VEGF)及促血管生成素-2(Ang-2)基因表达对裸鼠人肺腺癌移植瘤生物学特性的影响。方法利用基因重组技术构建H1启动子驱动表达针对VEGF及Ang-2siRNA的重组腺病毒Ad-VEGFshRNA及Ad-Ang-2shRNA。制备裸鼠人肺腺癌A549细胞移植瘤模型,观察RNA干扰后(RNAi)对肿瘤生物学特性的影响。结果重组腺病毒接种裸鼠30d后,Ad-VEGFshRNA、Ad-Ang-2shRNA干扰组与对照组比较,肿瘤体积及重量均明显减小,差异均有统计学意义(P<0.01),并且Ad-VEGFshRNA及Ad-Ang-2shRNA联合干扰组与Ad-VEGFshRNA、Ad-Ang-2shRNA干扰组比较能够更有效地抑制肿瘤细胞的生长,差异有统计学意义(P<0.05);而Ad-VEGFshRNA组与Ad-Ang-2shRNA组比较差异无统计学意义(P>0.05)。免疫组织化学染色显示:Ad-VEGFshRNA、Ad-Ang-2shRNA干扰组细胞增殖减慢,凋亡增加,微血管密度明显少于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。并且Ad-VEGF shRNA及Ad-Ang-2shRNA联合干扰组与单基因干扰比较,能够更有效地抑制肿瘤细胞增殖,促进凋亡,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 VEGF及Ang-2基因靶向RNA干扰在体内有明显抑制肺腺癌细胞生长的作用,联合抑制VEGF及Ang-2基因的表达能够更有效地抑制肺腺癌的生长。; 李白翎张冠鑫侯霄雷龚德军袁扬刘晓红黄盛东徐志云; 关键词：腺癌血管生成素2 腺病毒科

应用p75^NTR分选食管肿瘤干细胞并鉴定其生物学特性被引量：15: 2009年; 目的:应用p75NTR进行人食管肿瘤干细胞的分选,并对其生物学特性进行鉴定。方法:对人食管癌标本癌细胞及食管癌细胞株TE-1、Eca109进行培养,应用流式细胞仪检测p75NTR在人食管癌细胞(esophageal cancer cells,ECCs)中的表达,应用磁珠分选(MACS)法进行p75NTR阳性细胞与阴性细胞的分选,观察p75NTR阳性细胞的增殖、分化及软琼脂克隆形成能力,并进行裸鼠接种以观察其致瘤能力;应用化疗药物作用于ECCs后检测其中p75NTR阳性细胞与阴性细胞存活率,以评价p75NTR阳性细胞对化疗药物的耐受性。结果:8个食管肿瘤细胞系(株)中,除SHEC-1、SHEC-5未检测到p75NTR阳性细胞外,其余6个细胞系(株)SHEC-4、SHEC-6、SHEC-7、SHEC-8、Eca109、TE-1中均检测到p75NTR阳性细胞,阳性细胞比例分别为2.71%、0.32%、3.35%、1.13%、2.15%、0.45%。与阴性及未分选细胞相比,MACS分选后的p75NTR阳性细胞具有较强的增殖能力,具有分化产生其他表型细胞的能力,在软琼脂中具有较强的克隆形成能力(P<0.01);行裸鼠接种时,p75NTR阳性细胞表现出较强的致瘤性,其中SHEC-7细胞只需2×103个即可致瘤,其致瘤能力是未分选细胞的50倍。化疗药物分别作用于p75NTR阳性细胞与阴性细胞48h后,p75NTR阳性细胞的存活比例明显高于阴性细胞(P<0.05)。结论:人食管肿瘤细胞中p75NTR阳性细胞具有自我更新、分化、增殖能力,对化疗药物具有较强的耐受性,并具有较强的致瘤能力,具有肿瘤干细胞的特性。; 孙志刚黄盛东张宝仁徐志云刘晓红龚德军袁扬; 关键词：食管肿瘤肿瘤干细胞 P75^NTR 细胞分选致癌性试验肿瘤抗药性

重组腺相关病毒介导的RNA干扰抑制血管生长素表达对肺腺癌细胞成瘤能力的影响被引量：2: 2009年; 目的通过腺相关病毒（AAV）介导的RNA干扰（RNAi）抑制肺腺癌细胞A549血管生长素（ANG）表达，观察其对癌细胞生长和成瘤能力的影响。方法构建H1启动子驱动的表达针对ANG的小干扰RNA（siRNA）重组腺相关病毒（AAV-shANG），转染A549细胞，同时以正常A549细胞以及转染AAV—Null的A549细胞作为对照，观察重组腺相关病毒介导的RNAi抑制ANG表达对A549细胞生长、致瘤、肿瘤细胞增殖、凋亡及肿瘤微血管密度的影响。用t检验分析各组间差别，所有数据均用x^-±s表示。结果体外实验结果表明重组腺相关病毒AAV—shANG成功构建，重组腺相关病毒转染A549细胞72h后ANG蛋白表达水平明显低于A549细胞组及AAV—Null组；转基因A549细胞细胞周期分析结果提示，正常A549细胞、AAV—Null转染细胞和AAV—shANG转染细胞的增殖指数（P1）分别为0．32±0．29、0．35±0．38和0．31±0．43，差异不明显。体内实验结果表明，AAV—shANG转染细胞组胸腺缺陷小鼠的成瘤体积、瘤质量均明显低于两对照组。各组微血管密度分别为9．4±1．5、9．8±2．1和5．7±1．9，提示AAV—shANG转染细胞组与正常A549细胞和AAV—Null转染细胞组有明显差异。各组凋亡细胞的百分率分别为（7．7±3．1）％、（8．5±5．4）％和（17．1±8．6）％。AAV—shANG转染细胞组凋亡细胞的百分率明显高于正常A549细胞组和AAV—Null转染细胞组，各组细胞增殖核抗原（PCNA）阳性表达率分别为（84.8±9．7）％、（85．8±9．8）％、（70．4±10．1）％，AAV—shANG转染细胞组PCNA表达率低于两对照组。结论AVV—siRNA表达能显著抑制肿瘤细胞ANG表达及肿瘤细胞增殖，促进肿瘤细胞凋亡，抑制肿瘤生长。; 李白翎张冠鑫侯霄雷谈梦伟袁扬刘晓红龚德军黄盛东; 关键词：腺病毒科腺癌血管生长素

肿瘤干细胞研究现状被引量：6: 2008年; 近年来,对肿瘤干细胞的研究已经成为热点。研究发现一小部分肿瘤细胞具有干细胞特性,即具有自我更新、无限增殖与分化潜能,这部分细胞就是肿瘤干细胞。目前已经在多种肿瘤中发现并鉴定出肿瘤干细胞,包括白血病、乳腺癌、脑肿瘤、肝癌、结肠癌等。本文就肿瘤干细胞的概念、存在证据、研究方法以及临床应用前景作一综述。; 孙志刚黄盛东张宝仁; 关键词：肿瘤干细胞细胞分离细胞培养细胞鉴定

重组腺病毒介导的血管生成素改善缺血性心脏病的实验研究被引量：4: 2007年; 目的观察重组腺病毒介导的血管生成素促进慢性缺血心肌血管生成,并改善心肌血流灌注和心功能的有效性。方法置Ameriod环建立猪慢性心肌缺血模型,并随机分为3组,血管生成素腺病毒组,空病毒组,对照组。分别心内注射腺病毒介导的血管生成素基因、空病毒和生理盐水。通过冠状动脉造影、心脏超声、核磁心肌灌注成像、病理学观察等评价血管生成素的治疗效果。结果置环后的猪均为有效的动物模型。注射血管生成素的缺血心肌模型侧支血管增生明显,血管计数增加,Rentrop分数、面积变化分数改善,梗死区缩小,缺血区血管密度增高尤其是内皮细胞、平滑肌细胞增加,凋亡细胞减少、细胞之间的黏附性增加。结论腺病毒介导的血管生成素基因治疗缺血性心脏病可明显改善心功能,使局部血液循环明显改善。; 黄盛东刘晓红白辰光袁扬龚德军徐志云; 关键词：血管生成素类腺病毒科基因疗法

沉默血管生成素-2表达对人肺腺癌细胞生物学特性的影响: 2011年; 背景与目的促血管生成素-2(Ang-2)是一类调节血管生成的重要细胞因子,与肿瘤的发生发展有密切的联系。本研究通过腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)介导的RNA干扰(RNA interference,RNAi)抑制肺腺癌细胞A549 Ang-2的表达,观察其对癌细胞生物学特性的影响。方法构建H1启动子驱动的表达针对Ang-2的小干扰RNA(siRNA)重组腺相关病毒(AAV-Ang-2shRNA),转染A549细胞,同时以正常A549细胞及其转染空病毒(AAV-Null)的A549细胞作为对照,观察RNAi沉默Ang-2表达在体外及体内对A549细胞生长、致瘤、增殖、凋亡及肿瘤微血管密度的影响。结果体外实验结果表明重组腺相关病毒转染A549细胞48 h后Ang-2蛋白表达比对照组明显降低(P<0.001);细胞生长明显减慢(P<0.001)。RNA干扰后A549细胞细胞周期分析结果提示A549细胞对照组、AAV-Null对照组和AAV-Ang-2shRNA实验组的增殖指数(proliferation index,PI)分别为0.51±0.43、0.48±0.29和0.26±0.31。AAV-Ang-2shRNA实验组与对照组比较,PI明显减少(P=0.001)。体内实验结果表明,AAV-Ang-2shRNA实验组在胸腺缺陷小鼠成瘤体积、瘤质量均明显低于两对照组(P<0.01)。各组微血管密度分析结果分别为46.4±13.1、44.2±13.6和34.9±12.8;AAV-Ang-2shRNA实验组肿瘤组织内新生血管数目明显低于对照组(P<0.001)。各组凋亡指数(apoptosis index,AI)分别为(5.98±3.11)%、(7.51±4.42)%及(17.06±7.43)%。AAV-Ang-2shRNA组比PBS组、AAV-Null组凋亡百分率明显增高(P=0.005,P=0.007)。各组细胞增殖核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)阳性表达率分别为(92.75±9.7)%、(85.8±11.8)%、(69.8±16.5)%;AAV-Ang-2shRNA组PCNA指数低于两对照组(P=0.014,P=0.021)。结论腺相关病毒介导的siRNA表达能明显抑制A549细胞中Ang-2的表达,减慢肿瘤细胞的增殖,促进肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤生长。; 李白翎张冠鑫侯霄雷袁扬刘晓红龚德军黄盛东; 关键词：血管生成素-2 A549细胞株腺相关病毒 RNA干扰

食管肿瘤干细胞的分选及鉴定的实验研究被引量：10: 2009年; 目的进行人食管肿瘤干细胞（CSCs）的分选及鉴定。方法通过获取人食管癌标本进行肿瘤细胞的培养，应用流式细胞仪检测p75NTR在人食管肿瘤细胞（ECCs）中的表达，应用磁珠分选法（MACS）进行p75NTR阳性细胞与阴性细胞的分选，研究p75NTR阳性细胞的增殖、分化、软琼脂集落形成能力，并进行裸鼠接种以观察其致瘤能力。结果在8个食管肿瘤细胞系（株）中，除SHEC-1、SHEC-5未检测到p75NTR阳性细胞外，其余6个细胞系（株）中检测到p75NTR阳性细胞为0．32％-3．35％。MACS分选后的p75NTR阳性细胞的增殖能力明显强于阴性细胞[群体倍增时间分别为（17±3）h、（37±7）h，P〈0．01]；p75NTR阳性细胞具有分化产生其他表型细胞的能力；p75NTR阳性细胞在软琼脂中的集落形成能力（45．9％±8．9％）显著高于阴性细胞（3．7％±2．1％），P〈0．01；行裸鼠接种时，p75NTR阳性细胞表现出较强的致瘤性，SHEC-7细胞只需2×10^3个即可致瘤，其致瘤能力是未分选细胞的50倍。结论人ECCs中p75NTR阳性细胞具有自我更新、分化、增殖能力，并具有较强的致瘤能力，p75NTR阳性细胞具有CSCs的特性。; 孙志刚黄盛东张宝仁徐志云刘晓红龚德军袁扬; 关键词：食管肿瘤肿瘤干细胞

成人食管上皮细胞的体外培养及生物学特性被引量：3: 2008年; 目的培养成人正常食管上皮细胞,建立能够体外长期培养的食管上皮细胞系,为上皮细胞的体外研究提供实验材料。方法取食管癌患者正常食管上皮,用0.25%Dispase酶和0.25%胰蛋白酶/0.02%EDTA消化获取成人食管上皮细胞,使用无血清角化细胞培养液培养,通过细胞形态学观察和角蛋白、上皮膜抗原(EMA)免疫组织化学染色鉴定细胞。结果原代培养8d后,细胞汇合成片呈铺路石样生长,细胞角蛋白、上皮膜抗原表达阳性,可连续传代。结论为体外分离培养成人正常食管上皮细胞建立了方便可行的方法。; 刘洪涛黄盛东张宝仁徐驯宇; 关键词：上皮细胞无血清免疫组织化学

食管鳞癌干细胞的鉴定及其生物学特性的研究被引量：3: 2008年; 目的探讨食管鳞癌细胞(ECCs)的干细胞特性。方法将ECCs于无血清培养液(SFM)中培养,将其中可悬浮生长并形成的细胞球取出,制成单细胞悬液,以p75NTR为抗原标记细胞后进行流式细胞仪检测,观察其中p75NTR阳性细胞的比例。结果ECCs可在SFM中悬浮生长并形成细胞球,其形成细胞球的比例为3·6%~17·0%。悬浮生长的细胞中p75NTR阳性细胞比例为16·25%。结论ECCs在SFM中可悬浮生长并形成细胞球,其中的p75NTR阳性细胞具有干细胞的某些特性,其可作为食管鳞癌干细胞的标记之一。; 孙志刚黄盛东张宝仁徐志云刘晓红龚德军袁扬; 关键词：食管肿瘤鳞癌肿瘤干细胞

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