国家自然科学基金(81201316)
- 作品数：8 被引量：28H指数：4
- 相关作者：余传信高玒沈双宋丽君王玠更多>>
- 相关机构：江苏省血吸虫病防治研究所卫生部中国疾病控制中心更多>>
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- 日本血吸虫果糖二磷酸醛缩酶抗体反应模式及诊断价值的研究被引量：6
- 2015年
- 目的观察血吸虫感染家兔体内抗日本血吸虫中国大陆株果糖二磷酸醛缩酶(Sj FBA)抗体反应的动态变化,评价检测抗Sj FBA抗体IgG用于血吸虫现症感染的诊断与疗效考核价值。方法采用RT-PCR方法从日本血吸虫中国大陆株cDNA中扩增出编码Sj FBA的开放阅读框基因片段,然后亚克隆到表达质粒pET28a(+)中,构建重组表达质粒Sj FBA-pET28a。将重组表达质粒转化至大肠埃希菌BL21(DE3)中,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,经镍螯合胶亲和层析的方法纯化重组Sj FBA蛋白。用日本血吸虫中国大陆株尾蚴感染日本大白兔,6周后用吡喹酮与青蒿琥酯进行治疗,收集感染前和感染后2、4、6周及治疗后2、4、6、8、10、12、14、16周的血样。以重组Sj FBA为包被抗原,建立检测抗Sj FBA抗体IgG的酶联免疫吸附试验方法(rSj FBA-ELISA),用于检测家兔不同感染阶段血清抗Sj FBA抗体反应模式。分别用5、10、15和20条日本血吸虫中国大陆株尾蚴感染小鼠,收集感染后35d的小鼠血清,采用rSj FBA-ELISA检测抗Sj FBA抗体IgG并观察抗Sj FBA抗体水平与感染度的关系。用rSj FBA-ELISA分别检测血吸虫病患者血清、健康人血清、华支睾吸虫病和卫氏并殖吸虫病患者血清,观察该方法用于血吸虫病诊断的敏感性与特异性;使用该方法检测治疗前及治疗后1年的同一血吸虫现症感染患者的配对血清,观察抗Sj FBA抗体IgG检测用于血吸虫病疗效考核的价值。结果血吸虫感染家兔体内抗Sj FBA抗体IgG水平随感染时间的延长而逐渐增强,感染6周达到高峰(A450值为1.364),但治疗后抗Sj FBA的抗体则迅速下降,治疗6-8周后抗体水平可下降至阴性阈值(A450值为0.4),而未治疗组则抗体水平则始终保持在高水平,表明家兔体内抗Sj FBA抗体反应呈典型的短寿抗体反应模式。不同感染度小鼠血清抗Sj FBA抗体水平随着感染度的升高而逐渐升高,呈剂量依
- 王玠余传信肖迪赵飞殷旭仁宋丽君沈双高玒张建中何利华许永良杨静
- 关键词：日本血吸虫中国大陆株现症感染免疫诊断疗效考核
- 检测华支睾吸虫特异性IgG4生物素-亲和素复合酶联免疫吸附法的建立及检测效能分析被引量：4
- 2015年
- 目的探讨亲和素-生物素复合酶联免疫吸附法(ABC-ELISA)检测特异性Ig G4抗体用于诊断华支睾吸虫病的效果。方法建立检测华支睾吸虫特异性抗体Ig G4的ABC-ELISA法(Ig G4-ABC-ELISA),以此方法检测华支睾吸虫病、日本血吸虫病、卫氏并殖吸虫病、弓形虫病、棘球蚴病、囊尾蚴病和曼氏裂头蚴病患者血清样本。以Ig G4-ELISA和Ig GELISA法为对照,比较3种方法用于诊断华支睾吸虫病的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值及诊断效率。结果成功建立了用于检测华支睾吸虫特异性抗体的Ig G4-ABC-ELISA法,用此方法检测华支睾吸虫病患者血清特异性抗体Ig G4的敏感性为90.0%,特异性为98.2%,阳性预测值为93.8%,阴性预测值为97.0%,诊断效率为96.3%;Ig G4-ELISA法检测华支睾吸虫病患者血清特异性抗体敏感性为86.0%,特异性为98.2%,阳性预测值为93.5%,阴性预测值为95.9%,诊断效率为95.4%;Ig G-ELISA法检测华支睾吸虫病患者血清特异性抗体Ig G的敏感性为94.0%,特异性为88.1%,阳性预测值为70.1%,阴性预测值为98.0%,诊断效率为89.4%。Ig G4-ABC-ELISA法检测华支睾吸虫病患者血清特异性抗体的敏感性高于Ig G4-ELISA法(P<0.05),特异性高于Ig G-ELISA法(P<0.05)。结论 Ig G4-ABC-ELISA法检测华支睾吸虫特异性抗体IgG4具有高度敏感性与特异性,在华支睾吸虫病诊断中具有较好应用价值。
- 王玠宋丽君余传信沈双许永良殷旭仁柯雪丹高玒刘茜
- 关键词：华支睾吸虫亲和素-生物素酶联免疫吸附法IGG4
- 江苏省血吸虫病防治研究所2005--2014年科研课题回顾分析被引量：1
- 2017年
- 目的通过对江苏省血吸虫病防治研究所2005—2014年获批科研课题情况进行回顾与分析，为提升科研能力，加快人才培养和十三五科研业务发展规划的制定提供依据。方法将江苏省血防所2005—2014年的课题立项年度计划和人事部门提供的人员名册表录入MicrosoftExcel2010软件，用统计软件Stata12．0进行数据的统计分析，通过比较每年获批课题数来分析获批课题趋势。结果2005--2014年，江苏省血防所共获得课题100项，其中国家级课题29项，占29．0Voo；省部级课题31项，占31．0％；国际合作课题12项，占12．0％；其他市厅级课题28项，占28．0Vo。课题研究性质为基础研究58项，应用研究42项，获批课题负责人年龄中35岁以下人员人数上升明显，课题负责人逐渐转变为以中级职称人员为主。结论该所获批的课题研究类型以基础研究为主，课题中标总体呈上升趋势，青年人才正迅速成长，但仍需进一步提升国家重大项目和国际合作项目的承担能力，不断拓展研究领域，加强对其他寄生虫病的研究力度。
- 王阶周雯迪柯雪丹罗恩培毛元春曹园园颜维安羊海涛梁幼生
- 关键词：科研管理寄生虫病
- 抗三磷酸甘油醛脱氢酶抗体IgG检测诊断日本血吸虫病的研究被引量：3
- 2015年
- 目的探讨检测抗日本血吸虫三磷酸甘油酸脱氢酶(Sj GAPDH)抗体IgG诊断血吸虫病的价值。方法收集血吸虫现症感染患者治疗前、后不同时间点的血清及其他寄生虫病患者血清。以纯化的重组Sj GAPDH蛋白为抗原建立检测抗Sj GAPDH抗体IgG的常规酶联免疫吸附试验方法(Sj GAPDH ELISA)及生物素-亲和素信号放大酶联免疫吸附试验方法(Sj GAPDH BA ELISA),同时对收集的血清标本进行抗Sj GAPDH抗体IgG检测,并与检测抗SEA抗体IgG的SEA ELISA结果作比较,评价检测抗Sj GAPDH抗体IgG用于血吸虫病诊断与疗效考核的价值。结果 Sj GAPDH ELISA和Sj GAPDH BA ELISA检测79份现症感染血吸虫患者血清抗Sj GAPDH抗体IgG的敏感性分别为54.43%和91.14%,差异有统计学意义(P<0.05%);特异性分别为93.85%和92.31%,差异无统计学意义(P>0.05%)。Sj GAPDH ELISA检测患者在治疗后6个月血清特异性抗体阴转率为44.19%,治疗后12个月阴转率达53.49%。Sj GAPDH BA ELISA检测患者治疗后6个月血清特异性抗体阴转率为5.55%,治疗后12个月阴转率为9.72%。患者血清中抗SEA抗体IgG治疗后6和12个月均阳性。结论 Sj GAPDH蛋白在患者体内诱导短寿抗体反应,检测患者血清中的抗Sj GAPDH特异性抗体IgG水平及其在治疗前、后的变化具有一定的诊断与疗效考核价值。
- 王玠刘茜张秋明余传信宋丽君沈双殷旭仁高玒何伟曹国群华万全钟春蕾
- 关键词：血吸虫疗效考核
- 日本血吸虫高速泳动家族B1蛋白基因的克隆表达与功能分析
- 2014年
- 目的克隆、表达日本血吸虫高速泳动家族B1蛋白(SjHMGB1),并研究其功能特性。方法利用逆转录PCR(RT-PCR)技术从日本血吸虫成虫mRNA中反转录扩增出编码SjHMGB1的完整开放阅读框DNA片段,然后将其亚克隆至原核表达载体质粒pET28a(+)中,构建重组表达质粒SjHMGB1-pET28a。将重组表达质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3),含重组质粒的转化子细菌经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导以表达重组SjHMGB1蛋白。通过镍螯合琼脂糖亲和胶亲和层析法制备纯化的重组SjHMGB1蛋白。通过DNA迟滞实验和动物免疫鉴定重组SjHMGB1的DNA结合和免疫学特性。通过免疫印迹试验(Western blotting)和RT-PCR确定SjHMGB1分子在日本血吸虫不同发育阶段的表达情况。以重组SjHMGB1为抗原免疫小鼠,3次免疫后每只小鼠感染45±2条血吸虫尾蚴,42 d后剖杀,计算减虫率与减卵率,观察其诱导抗血吸虫感染的免疫保护性作用。结果采用RT-PCR法从日本血吸虫成虫mRNA中反转录扩增到长度约为530 bp的特异性DNA条带,序列分析证实为编码SjHMGB1蛋白的开放阅读框序列。将此片段亚克隆至表达质粒pET28a(+)中,成功构建了重组表达质粒SjHMGB1-pET28a。含重组表达质粒SjHMGB1-pET28a的转化子细菌经IPTG诱导能表达分子量约28 kDa的可溶性SjHMGB1蛋白。采用镍螯合亲和层法制备了纯化的重组SjHMGB1蛋白。DNA迟滞试验显示纯化的Sj HMGB1蛋白可同超螺旋及线性DNA结合,重组SjHMGB1免疫小鼠能产生高效价的抗体IgG,Western blotting分析证实重组SjHMGB1蛋白能被重感染小鼠血清所识别,表明重组表达的SjHMGB1分子具有天然蛋白的功能活性与免疫学特性。RT-PCR和Western blotting分析显示SjHMGB1分子在血吸虫成虫和虫卵期大量表达,而在尾蚴阶段表达量极低。免疫保护性试验结果表明,重组SjHMGB1分子免疫不能诱导有效的抗血吸虫感染免疫保护性作用。结论获得了编码SjHMGB1基因和纯�
- 姚媛余传信宋丽君殷旭仁王玠金一沈双张伟高玒许永良杨静
- 关键词：日本血吸虫DNA结合活性免疫保护作用BOX
- 预警哨鼠抗Sj23HD IgG抗体Western blot检测方法的改进及应用被引量：2
- 2013年
- 目的改进检测预警哨鼠血清抗日本血吸虫23ku膜蛋白大亲水肽段（Sj23HD）IgG抗体的Western blot方法，并观察其现场应用价值。方法预先制备转印有重组si23HD蛋白的NC膜条，采用化学发光Western blot检测哨鼠血清抗sj23HD IgG，观察方法的稳定性和敏感性，并对2012年江苏省潜在血吸虫感染高风险水域监测预警哨鼠回收后第14、21、35d血样进行检测，同时以ELISA检测方法作为对照，对免疫检测结果与解剖查虫结果进行统计学分析。结果改进后的Western blot操作简便，比常规方法节省142周时间。预制NC膜条至少可低温保存6个月，其敏感性与新鲜制备的NC膜条的敏感性相似。使用改进后的Western blot方法检测预警哨鼠14、21和35d血清标本，阳性率分别为0．90％，3．50％和5．06％，ELISA阳性率分别为0．45％、3．00％和5．06％，差异无统计学意义（P〉0．05）。两种免疫学方法的敏感性均高于解剖查虫法。结论改进后的Western blot操作简便，敏感性高，可用于预警哨鼠血吸虫感染检测。
- 王玠余传信杨坤殷旭仁宋丽君沈双金一姚媛陶永辉许永良杨静
- 关键词：特异性IGG抗体哨鼠WESTERNBLOT
- 烯醇化酶与寄生虫感染被引量：7
- 2014年
- 烯醇化酶是生物体中广泛存在的一种重要的糖酵解酶类,近来发现其还具有激活纤溶酶原的功能,参与寄生虫在宿主体内侵染和转移过程,并能下调宿主免疫功能,协助寄生虫逃避宿主的免疫攻击。本文总结当前对寄生虫烯醇化酶的研究进展,旨在探究其用于寄生虫病诊断、药物研发及疫苗靶标的可能性。
- 高玒余传信
- 关键词：寄生虫烯醇化酶免疫
- 日本血吸虫热休克蛋白70(Sj HSP70)的抗体反应特征及免疫诊断价值被引量：8
- 2014年
- 目的制备重组日本血吸虫中国大陆株热休克蛋白[rSj HSP70（Grp78）],检测其抗体反应特征及用于血吸虫病免疫诊断的价值。方法以日本血吸虫中国大陆株成虫mRNA为模板逆转录合成cDNA,采用基因特异性引物,通过PCR技术扩增编码Sj HSP70（Grp78）成熟肽的基因片段,并将该片段插入到表达质粒pET28a（＋）中,构建表达质粒HSP70（Grp78）-pET28a。将重组质粒转化大肠埃希菌BL21（DE3）感受态细胞,经IPTG诱导表达后采用镍亲和层析法制备纯化的可溶性rSj HSP70（Grp78）。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）及Western blot检测rSj HSP70（Grp78）的抗体反应特异性及抗rSj HSP70（Grp78）IgG在血吸虫感染小鼠血清中动态变化,以分析其早期诊断与疗效考核价值,并比较rSj HSP70（Grp78）-ELISA与SEA-ELISA检测血吸虫感染者血清抗体IgG的敏感性与特异性。结果编码Sj SP70（Grp78）成熟肽基因片段克隆成功,并获得纯化的分子质量单位约69ku的重组表达Sj HSP70（Grp78）蛋白。Western blot显示Sj HSP70（Grp78）蛋白能被日本血吸虫感染的小鼠及人血清识别,但不与华支睾吸虫病和卫氏并殖吸虫病患者血清及健康人、鼠血清反应。感染小鼠血清抗Sj HSP70（Grp78）IgG水平与血吸虫感染度呈正相关,并随着感染时间延长呈增强趋势,在感染后16~18周达到峰值,随后开始回调,但始终维持在较高水平。治疗组小鼠经药物治疗后第2周（感染后第8周）,体内抗体水平迅速上升并达到高峰,经过短暂下降后再次上升,出现第二个高峰,随后逐渐回调,至治疗16周（感染后第22周）,部分小鼠抗体水平已接近阴性阈值。部分个体在血吸虫感染后1周即可检测到血清抗rSj HSP70（Grp78）IgG。分别以rSj HSP70（Grp78）和SEA血吸虫、华支睾吸虫及卫氏并殖吸虫感染者血清及健康人血清,敏感性分别为82.9%和95.7%,特异性分别为94.3%和85.7%,与健康人血清的�
- 高玒余传信宋丽君王玠殷旭仁沈双姚媛许永良杨静
- 关键词：热休克蛋白70抗体反应免疫诊断
