国家自然科学基金(30330560)
- 作品数：19 被引量：112H指数：6
- 相关作者：李桂源李小玲周鸣武明花刘华英更多>>
- 相关机构：中南大学三峡大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- BRD7调控Rb/E2F通路的分子机制研究被引量：5
- 2007年
- BRD7是采用cDNA代表性差异分析法克隆的一个新的Bromodomain基因,过表达BRD7可抑制鼻咽癌细胞的生长和细胞周期进程,同时发现BRD7基因可以调控Rb/E2F通路的活性.该研究旨在进一步探讨BRD7调控Rb/E2F通路的分子机制.通过蛋白质印迹和RT-PCR实验方法发现,BRD7能够降低Rb的磷酸化水平,抑制cyclinD1、cyclinE的蛋白质表达,上调CDK4抑制子P19的mRNA表达,但对CDK4和CDK2的蛋白质表达没有明显影响;通过荧光素酶实验从转录调控水平进一步证实了BRD7能够明显抑制cyclinD1启动子活性;采用反义核酸技术抑制COS7细胞内源性BRD7的表达后,发现cyclinD1、cyclinE、磷酸化Rb的蛋白质表达水平上调,并且可以促进细胞生长.这些结果表明:BRD7参与调控Rb/E2F信号通路中重要靶分子的表达,抑制Rb/E2F通路的活性,从而阻止细胞周期G1-S期进程,抑制鼻咽癌细胞生长.
- 李淑芳周鸣刘华英徐晓杰彭聪彭淑平武明花李小玲李桂源
- 关键词：细胞周期调控CYCLIND1反义核酸技术
- 侯选抑瘤基因BRD7及家族蛋白的功能研究进展被引量：5
- 2005年
- 溴区结构(bromodomain)是近年来发现的广泛分布于多种生物中的一种高度保守的结构域,溴区结构蛋白通过参与信号依赖性的基因转录调控而广泛参与细胞内重要的生命活动.BRD7基因是1999年克隆的一个新的bromodomain基因,GenBank登录号为AF152604或AF152605.eMotif分析表明,BRD7蛋白包含多个磷酸化位点和一个保守bromodomain功能域,Blast显示BRD7蛋白与人的Celtix-1及鼠的bromodomain蛋白BP75具有高度的同源性.利用转基因技术已证实,在鼻咽癌细胞系HNE1中过表达BRD7基因可以抑制其细胞生长和细胞周期G1-S的进程,并部分逆转鼻咽癌细胞HNE1的恶性表型.为了全面地揭示BRD7基因的细胞内生物学功能,深入了解BRD7基因的细胞内整体信息流向,中南大学肿瘤研究所细胞遗传室已从上、中、下游三个不同层面对BRD7基因的功能研究展开了初步的探索.
- 刘华英李桂源
- 鼻咽癌癌变的分子机理被引量：41
- 2006年
- 鼻咽癌是一种多基因遗传性肿瘤,在中国南方和国外中国南方移民及后裔中发病率极高,严重危害了我国南方地区人民生命健康.对于这样一种具有明显民族聚集现象和地域差异的恶性肿瘤,目前认为其病理发病机制与遗传和环境因素的共同作用密切相关.现主要阐述鼻咽癌作为一种多基因遗传性肿瘤的病因发病机制,初步建立鼻咽癌易感基因群的概念和鼻咽癌发生发展过程中易感基因群主导的多阶段性多米诺骨牌效应分子机制假说,为寻找鼻咽癌遗传易感风险因子,筛选鼻咽癌高危人群以及探索鼻咽癌靶向性及个体化的诊断和治疗手段奠定实验与理论基础.
- 李桂源刘华英周鸣周后德李小玲
- 关键词：鼻咽癌病因发病机制
- 分泌性蛋白SPLUNC1对上呼吸道绿脓杆菌的抑制作用被引量：4
- 2006年
- 目的:构建哺乳动物细胞表达的SPLUNC1重组蛋白,通过体外实验验证其杀菌/抑菌功能,并进一步研究其机制是否与SPLUNC1蛋白结合细菌脂多糖有关,从而为其将来临床应用奠定基础。方法:将SPLUNC1克隆入pCMV-tag4A哺乳动物表达载体,稳定转染鼻咽癌HNE1细胞株;收集细胞培养上清液,用其处理从患者上呼吸道分离的绿脓杆菌,比较转染SPLUNC1基因的细胞培养上清与转染空白载体的细胞培养上清对细菌克隆形成率的影响。同时将脂多糖包被96孔板,与SPLUNC1蛋白共同孵育,ELISA法检测SPLUNC1是否与细菌脂多糖结合;利用FITC标记的脂多糖干预转染SPLUNC1基因及空白载体的细胞,观察细胞内脂多糖与SPLUNC1的结合作用。结果:转染SPLUNC1基因的细胞培养上清能显著抑制绿脓杆菌在LB软琼脂板上形成集落;体外试验表明,SPLUNC1能与细菌脂多糖结合,但结合效率低;HNE1细胞经转染SPLUNC1后,细菌脂多糖摄取明显增加。结论:重组SPLUNC1蛋白能经转染细胞分泌到培养上清液中,具有结合细菌脂多糖,杀灭或抑制上呼吸道绿脓杆菌的功能,从而可能具有重要的临床应用价值。
- 周后德武明花石磊周鸣杨一新赵瑾邓坦李小玲沈守荣李桂源
- 关键词：绿脓杆菌脂多糖固有免疫
- 脑组织特异性基因/脑胶质瘤抑瘤基因LRRC4的功能研究进展被引量：4
- 2007年
- LRRC4是一个脑组织相对特异性表达基因,是采用表达序列标签(EST)介导的定位-候选克隆策略结合5′-RACE技术从染色体7q31～32区域克隆出来的一个富亮氨酸重复(LRR)超家族的新成员.LRRC4是神经系统发育与轴突生长的功能基因.LRRC4的表达与胶质瘤的级别进展呈负相关,其表达缺失参与脑胶质瘤进展的晚期事件.LRRC4能够下调一系列神经生长因子或受体(如IGF,EGF,PDGF,CNTF,bFGF,GDNF和BDNF等)的表达,通过调控多种信号转导通路(K-Ras/c-Raf/ERK/MAPK,PI-3K/AKT/NF-κB,p70S6/PKC,STAT3以及JNK2/c-Jun/mp53等)将U251细胞阻滞在G1晚期,抑制脑胶质瘤细胞的增殖和侵袭,而且这种抑制作用依赖于它的LRR结构域.LRRC4不能诱导胶质瘤细胞的凋亡,而是诱导胶质瘤细胞向胶质样细胞分化.
- 武明花李小玲李桂源
- 关键词：LRRC4脑胶质瘤信号转导
- Raji细胞中EB病毒染色体整合的荧光原位杂交定位
- 2009年
- 目的：对Raji细胞中EBV整合位点进行染色体定位。方法：用Southern免疫印迹检测Raji细胞中EBV DNA，应用G显带和荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization，FISH）对Raji细胞中EBV整合位点进行染色体定位。结果：Raji细胞gDNA经BamHI酶切消化后，与同位素标记的Probe-1（EBV基因组13232-16189）杂交，阳性片段大小为10kb和4kb，与Probe-2（EBV基因组5～3271）杂交，阳性片段大小为23kb。Raji细胞中EBV整合位点有1p，1q，2q，3p，3q，4q，5q，6q，7p，7q，9q，11p，14q，15q等，其中4q，2q，1q，7q为EBV DNA整合的高频位点。计数33个整合信号，分别有7，4，4，4个信号位于染色体4q，2q，1q，7q，这4个位点的信号占所有信号的构成比为64％，15号以后的染色体及2条性染色体均未见EBV整合。结论：本研究用G显带和FISH方法首次对Raji细胞中EBV整合位点进行了定位，Raji细胞中EBV整合具有一些高频位点，是一种非随机性整合。
- 高建明李小玲李桂源
- 关键词：RAJI细胞EB病毒荧光原位杂交
- 过表达E2F6基因抑制BRD7基因启动子活性被引量：1
- 2006年
- BRD7基因是采用cDNA代表性差异分析法克隆的一个新bromodomain基因(GenBank登录号AF152604).它在鼻咽癌细胞和组织中表达明显下调,过表达BRD7基因可抑制鼻咽癌细胞的生长和细胞周期的进程.前期工作已克隆了BRD7基因启动子区,并将其启动子定位于450bp(-404～+46bp)的区域.为了进一步揭示BRD7基因在鼻咽癌细胞和组织中表达下调的分子机制,生物信息学分析表明,BRD7基因启动子-229至-243bp为一个E2F6转录因子结合位点共有序列,电泳迁移率实验结果表明转录因子E2F6特异性地结合于BRD7启动子区.荧光素酶检测和绿色荧光蛋白表达检测都证实,过表达E2F6基因能抑制BRD7基因启动子活性.
- 刘华英罗晓敏李夏雨牛朝霞张荔茗周鸣彭聪向波李征彭淑平李丹李小玲李桂源
- 关键词：启动子活性绿色荧光蛋白
- 鼻咽癌的表观遗传学研究进展被引量：10
- 2007年
- 表观遗传学是功能基因组学的重要组成部分,它实际上是研究理化、生物等环境因素以及饮食习惯等对遗传因素的作用,并由这一作用引起DNA序列以外的遗传物质改变.鼻咽癌是我国南方常见恶性肿瘤,具有明显的家族聚集倾向,存在基因组不稳定性,易受理化、生物等环境因素的影响,是多基因遗传性肿瘤.鼻咽癌这种独特病因体系提示:鼻咽癌是研究肿瘤表观遗传修饰的最佳模型之一.主要从DNA甲基化、组蛋白修饰、染色质重构和非编码RNA的调控4方面对鼻咽癌表观遗传学研究进展进行综述并针对性地提出了一些新的建议,目的是为进一步探究鼻咽癌表观遗传学发病机制,更好地全面理解鼻咽癌的病因发病机制网络体系,寻找鼻咽癌高危易感人群的筛查、早期诊断、治疗、预后判断的表观遗传修饰分子标志物开辟新的前景.
- 刘华英彭淑平周鸣李桂源
- 关键词：鼻咽癌表观遗传学DNA甲基化组蛋白修饰
- 鼻咽癌转录组学研究的现状与进展被引量：11
- 2007年
- 转录组学是一门在整体水平上研究某一时刻某一细胞中基因全部转录本种类、结构和功能及转录调控规律的学科,它为研究鼻咽癌不同发病阶段的分子机理和调控网络提供全新的手段.现简要介绍鼻咽癌不同发病阶段相关易感/抑瘤基因的分离鉴定及其功能研究,各阶段基因转录谱和转录调控网络的构建等方面的研究现状和进展.
- 黄琛武明花李桂源
- 关键词：鼻咽癌转录组学转录调控网络
- 纯化鼻咽组织全基因组表达谱在筛选鼻咽癌相关靶基因中的应用被引量：6
- 2005年
- 目的:通过全基因组寡核苷酸基因芯片构建鼻咽部纯化组织基因表达谱,筛选鼻咽癌相关靶基因。 方法:采用RNA保护技术保护组织标本,显微切割纯化分离鼻咽癌组织标本中的癌细胞、鼻咽部非癌组织标本中 的黏膜上皮细胞,提取每一例纯化组织标本RNA,线性扩增获得足量aRNA,标记探针后与HG U133.Plus2.0杂 交,构建每一例鼻咽部纯化组织标本基因表达谱,通过组间信息比对筛选鼻咽癌相关靶基因。结果:鼻咽癌组与非 鼻咽癌组基因表达谱比对,筛选出了与鼻咽癌发病相关的候选靶基因。通过鼻咽癌标本中颈部转移组和非颈部转 移组表达谱比对,找出了与鼻咽癌颈部淋巴结转移相关的候选靶基因。结论:利用全基因组基因芯片构建基因表 达谱,可准确、高效地筛选出鼻咽癌相关的候选靶基因。
- 刘仲奇田勇泉黄河周厚德张秋红周鸣彭聪李小玲李桂源
- 关键词：鼻咽癌显微切割基因芯片靶基因
