云南省教育厅科学研究基金(2011Y443)
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
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- 猪瘟病毒囊膜糖蛋白E2的克隆表达
- 2012年
- 为了研究不同时间段细胞MHC分子表达的变化情况,从分子水平上说明E2基因与NHC之间的关系。本研究克隆了中国猪瘟病毒强毒石门毒株E2基因,构建了pcDNA3.0真核表达质粒P-E2基因。限制性内切酶进行双酶切和序列分析鉴定E2基因插入位置、方向和读码框架的正确性。构建成功的真核表达质粒P-E2,用脂质体转染方法瞬时转染进行体外细胞表达,转染后24、48h后用Western-blot和间接免疫荧光技术检测P-E2基因质粒在PK-15细胞内的表达情况。结果表明:用His抗体进行间接免疫荧光检测发现E2基因得到表达,并定位于细胞浆,同时Western-blot检测后发现重组质粒P-E2转染后也在PK-15细胞中得到了表达。为进一步研究猪瘟病毒与宿主细胞之间的关系,病毒的致病机理提供了基础材料。
- 高斌冯励付晓萍李永强
- 关键词：猪瘟病毒E2基因克隆
- 猪瘟病毒N^(pro)基因的克隆表达
- 2012年
- 为了得到一个表达Npro蛋白的真核表达载体,从而为下一步研究不同时间段细胞主要组织相容性复合体(MHC)表达的变化情况,从分子水平上说明Npro与MHC之间的关系,本研究应用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术对猪瘟病毒石门毒株Npro基因进行了克隆和测序,结果得到了长度为592 bp的目的片段。用BamHⅠ和XhoⅠ限制性内切酶分别对重组克隆质粒和转移载体pcDNA3.0进行双酶切,回收目的基因DNA片段,将目的基因Npro亚克隆至真核转移载体pcDNA3.0中,经双酶切和序列测定鉴定插入基因和连接方向正确,得到含完整Npro基因的重组载体质粒P-Npro。构建成功的真核表达载体以脂质体介导的转染方法将此重组载体质粒转染PK-15细胞,转染24和48 h后检测表达情况。经Western-blot方法检测表明,此Npro蛋白在PK-15细胞中正确表达。
- 高斌冯励李永强付晓萍
- 关键词：猪瘟病毒真核表达
