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国家自然科学基金(30471937)

作品数：12 被引量：22H指数：3
相关作者：黄培林金月玲金治吴平平吴鹏更多>>
相关机构：东南大学江苏省肿瘤医院江苏建康职业学院更多>>
发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
相关领域：医药卫生生物学更多>>

文献类型

  • 12篇中文期刊文章

领域

  • 9篇医药卫生
  • 3篇生物学

主题

  • 9篇基因
  • 9篇DLC-1
  • 7篇细胞
  • 5篇缺失基因
  • 5篇肠癌
  • 4篇结肠
  • 3篇蛋白
  • 3篇细胞株
  • 3篇结肠癌
  • 3篇结肠癌细胞
  • 3篇甲基化
  • 3篇肝癌
  • 3篇肝癌缺失基因...
  • 3篇癌细胞
  • 3篇肠癌细胞
  • 2篇增殖
  • 2篇直肠
  • 2篇直肠癌
  • 2篇质粒
  • 2篇转染

机构

  • 12篇东南大学
  • 1篇江苏建康职业...
  • 1篇江苏省肿瘤医...

作者

  • 12篇黄培林
  • 8篇金月玲
  • 6篇吴鹏
  • 6篇吴平平
  • 6篇金治
  • 5篇商延芳
  • 3篇李楠
  • 3篇田小强
  • 2篇伍健
  • 2篇徐佳佳
  • 1篇苏昀
  • 1篇杨琳
  • 1篇胡俊
  • 1篇梁舜之
  • 1篇田晓强
  • 1篇龙启强
  • 1篇方媛

传媒

  • 3篇江苏医药
  • 3篇现代生物医学...
  • 2篇东南大学学报...
  • 1篇南京医科大学...
  • 1篇肿瘤防治研究
  • 1篇中华消化杂志
  • 1篇现代医学

年份

  • 1篇2012
  • 3篇2010
  • 2篇2009
  • 3篇2008
  • 1篇2007
  • 1篇2006
  • 1篇2005
共 12 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
pcDNA3.1/DLC-1重组质粒的构建及其在HT-29细胞中的表达被引量：1
2010年
目的构建和表达DLC-1(deleted in liver cancer)基因重组质粒。方法用PCR法得到DLC-1基因片段,此基因片段带有XbaⅠ和BamHⅠ两个酶切位点,然后将此片段和真核表达载体pcDNA3.1连接,转化大肠杆菌DH5a,利用脂质体介导将pcDNA3.1/DLC-1重组质粒转染到结肠癌HT-29细胞中,再用RT-PCR法检测重组质粒的表达。结果重组质粒经XbaⅠ和BamHⅠ双酶切和测序与DLC-1基因序列一致;利用脂质体介导将pcDNA3.1/DLC-1重组质粒导入HT-29细胞,获得了DLC-1基因的表达。结论成功构建pcDNA3.1/DLC-1重组质粒并在HT-29细胞内表达。
吴平平金治吴鹏金月玲黄培林
关键词：DLC-1重组质粒结直肠癌基因转染
3种结肠癌细胞株中DLC-1基因的表达及其启动子区的甲基化状态研究被引量：5
2008年
目的:研究候选抑癌基因DLC-1在结肠癌细胞株中的表达及其启动子区的甲基化状态,初步探讨结肠癌细胞株DLC-1基因表达水平与其启动子区甲基化的相关性。方法:采用RT-PCR技术分别检测DLC-1基因在人结肠癌细胞株CaCo-2、HT-29和LoVo中的表达水平;应用甲基化特异性PCR(MSP)方法和亚硫酸氢盐修饰DNA测序检测启动子区域甲基化状态;分别用0、5、10μmol.L-1浓度的去甲基化药物5氮杂胞苷处理DLC-1基因启动子区域高甲基化状态细胞后,再检测DLC-1基因mRNA表达水平。结果:人结肠癌细胞株CaCo-2和LoVo中DLC-1 mRNA呈阳性表达,HT-29中的表达呈阴性表达;CaCo-2和LoVo细胞DLC-1基因启动子区域未发生甲基化,而HT-29出现启动子区高甲基化状态;经5氮杂胞苷药物干预后,HT-29结肠癌细胞的DLC-1基因表达明显增强。结论:结肠癌细胞株HT-29中DLC-1基因表达沉默与启动子区高甲基化状态有关。
金月玲田小强商延芳黄培林
关键词：甲基化结肠癌细胞株甲基化特异性PCR
肝癌缺失基因-1基因结构域调控人结肠癌HT29细胞增殖的实验研究
2012年
目的探讨肝癌缺失基因-1（DLC-1）基因主要结构域在调控人结肠癌HT29细胞增殖中的作用。方法分别构建DLC-1基因Rho蛋白GTP酶活化蛋白（RhoGAP）、SAM、START结构域敲除的亚克隆重组质粒，并转染至人结肠癌HT29细胞，另设野生型HT29细胞组（对照组）、pcDNA3．1-HT29细胞组（空载体组）和pcDNA3．1-HT29-DLC-1细胞组（全长转染组）作为对照。应用四甲基偶氮唑盐（MTT）实验、平板克隆实验检测细胞增殖的改变；流式细胞术检测细胞凋亡；pull-down方法分析RhoA蛋白活性。组间差异采用方差分析。结果转染成功48h后，与对照组及空载体组相比，全长转染组细胞增殖（F=146．36）及RhoA蛋白活性（F=698．08）明显抑制（P均〈0．05），细胞早期凋亡增加（F=294．08，P〈O．05）。敲除RhoGAP转染组细胞的增殖能力（F=0．99）、细胞凋亡（F=0．049）及RhoA蛋白活性（F=5．769）与对照组及空载体组相比差异均无统计学意义（P均〉0．05）；敲除SAM转染组细胞比DLC-1基因全长转染组更显著地抑制了细胞增殖（F=31．00，P〈0．05），使Rh0A蛋白活性下调（F=92．57，P〈0．05），凋亡增加（F=130．44，P〈0．05）；敲除START转染组相对于DLC-1基因全长转染组，细胞增殖能力增强（F=15．47，P〈0．05），凋亡细胞减少（F=110．23，P〈0．06），RhoA蛋白活性上调（F=199．39，P〈0．05）。结论DLC-1基因抑制HT29细胞增殖具有RhoGAP依赖性，SAM结构域可能是内源性RhoGAP活性的自身抑制区域，START结构域可能协助RhoGAP结构域而起作用。
吴平平吴鹏龙启强李楠金治田晓强黄培林
关键词：结肠肿瘤质粒密码子起动
5氮杂胞苷对HT29细胞DLC-1基因表达和细胞增殖活性的影响被引量：1
2005年
目的探讨去甲基化药物5氮杂胞苷对肠癌细胞系HT29的DLC1基因表达和细胞增殖活性的影响。方法使用浓度为5μmol·L-1和10μmol·L-1的去甲基化药物5氮杂胞苷处理HT29细胞,通过MTT实验观察细胞增殖活性的差异,RTPCR技术检测DLC1mRNA表达强度的变化。结果经药物处理后,HT29细胞的增殖活性受到抑制,DLC1mRNA的表达明显增强。结论HT29细胞DLC1mRNA的表达下调可能是由于启动子区域高甲基化所致,DLC1基因具有抑制肿瘤细胞生长的功能,其可能参与了结肠癌的发病机制。
伍健金月玲黄培林
关键词：去甲基化细胞增殖
DLC-1基因表达对结肠癌细胞侵袭转移能力的影响被引量：2
2008年
目的:研究DLC-1基因对结肠癌细胞侵袭迁移能力的影响。方法:将DLC-1 shRNA(短发夹状RNA,short hairpin RNA)序列克隆到质粒pGCsi-U6/Neo载体,采用脂质体介导的转染方法将构建的DLC-1 shRNA表达质粒转入结肠癌细胞系LoVo细胞。采用RT-PCR技术和Western Blot技术分别检测LoVo细胞中DLC-1mRNA和蛋白表达水平的变化。Transwell小室人工重组基底膜侵袭转移实验观察LoVo细胞侵袭迁移能力的改变。结果:结肠癌细胞系LoVo细胞表达DLC-1分子。所构建质粒表达载体能有效地干扰LoVo细胞DLC-1 mRNA和蛋白质表达水平;Transwell小室人工重组基底膜侵袭转移实验结果显示,转染后LoVo细胞侵袭转移能力明显增强(p<0.05)。结论:结肠癌细胞系LoVo细胞表达DLC-1基因,应用RNAi技术可特异性降低其表达。DLC-1的表达水平与结肠癌细胞侵袭转移相关。
商延芳金月玲徐佳佳李楠黄培林
关键词：结肠癌细胞株RNAILOVO细胞DLC-1
抑癌基因DLC-1的研究进展
2006年
DLC-J(frequently deleted in liver cancer)基因是新发现的一个肿瘤抑制基因,它的失活有可能参与肿瘤的发生和发展。本文拟就DLC-1基因的结构功能及其在遗传和表遗传方面的失活机制作一综述。
金月玲伍健黄培林
关键词：表遗传
抑癌基因DLC-1在结肠癌细胞sw480中表达的研究被引量：2
2007年
目的:初步探讨DLC-1基因在结肠癌细胞sw480中的表达改变及其可能机制;方法:采用RT-PCR和Western blot分析结肠癌细胞CaCo2、sw480的DLC-1表达情况;应用去甲基化药物5—氮杂胞苷处理DLC-1基因阴性表达的细胞株,观察用药前后该细胞DLC-1基因的表达水平、细胞周期、细胞增殖力和侵袭力的影响。结果:CaCo2细胞高表达DLC-1 mRNA,而sw480则呈现表达缺失。经去甲基化药物5—氮杂胞苷处理sw480后,DLC-1 mRNA恢复表达,比较用药前后sw480细胞增殖力下降、细胞周期被阻滞在G2期、细胞侵袭力减弱。结论:DLC-1基因可影响结肠癌细胞sw480的增殖能力和侵袭力,并使结肠癌细胞sw480细胞周期阻滞于G2期,DNA甲基化可能是导致DLC-1在sw480细胞中的失活的一个重要原因。
田小强金月玲商延芳胡俊黄培林
关键词：抑癌基因DLC-1结肠癌细胞SW480甲基化
RhoGAP结构域在DLC-1基因抑制人结肠癌HT29细胞增殖、侵袭中的作用被引量：3
2010年
目的:探讨Rho蛋白GTP酶活化蛋白(Rho GTPase activation protein,RhoGAP)结构域在肝癌缺失基因1(frequentlydeleted in liver,DLC-1)抑制人结肠癌HT29细胞的增殖、侵袭中的作用。方法:脂质体转染DLC-1基因及RhoGAP结构域缺失的ΔDLC-1亚克隆至大肠癌HT29细胞株;应用MTT、平板克隆实验检测细胞增殖的改变;Transwell实验观察细胞侵袭迁移能力的改变;流式细胞术检测细胞周期。结果:转染成功后,全长DLC-1基因转染组(pcDNA3.1-DLC1-HT29)与野生型及空载组相比,细胞增殖能力下降,侵袭能力减弱,细胞周期G1期阻滞并诱导凋亡,而ΔDLC-1亚克隆转染组(pcDNA3.1-ΔDLC1-HT29)对细胞增殖、侵袭及细胞周期均无明显影响。结论:DLC-1基因可能是通过其内在的RhoGAP结构域抑制人结肠癌细胞HT29的增殖和侵袭。
吴鹏吴平平金治李楠杨琳黄培林
关键词：肝癌缺失基因-1转染
Rho A蛋白通路在DLC-1基因调控人结肠癌HT29细胞周期中的作用及其机制被引量：10
2009年
目的:探讨Rho A蛋白通路在DLC-1(frequently deleted in liver cancer-1)基因调控人结肠癌HT29细胞周期中的作用及其机制。方法:构建pcDNA3.1-DLC1质粒载体,脂质体法转染HT29细胞,筛选稳定细胞系;pull-down方法分析Rho A蛋白活性;实时定量PCR检测细胞周期相关蛋白Cyclin D1、p21的表达变化;流式细胞仪检测细胞周期分布。结果:野生型人结肠癌HT29细胞DLC-1基因表达呈阴性,经转染获得DLC-1稳定表达细胞系。与野生型及空载组HT29细胞相比,转染组细胞RhoA蛋白活性下降;Cyclin D1表达下调,p21表达上调;G1期及凋亡细胞数增加,而G2期细胞数下降。结论:转染DLC-1基因引起人结肠癌HT29细胞Rho A蛋白活性下调,进而可能通过对Cyclin D1、p21表达的调控使细胞周期G1期阻滞并诱导凋亡,同时分裂前期细胞数减少,细胞增殖受抑。
吴平平苏昀金治吴鹏徐佳佳黄培林
关键词：肝癌缺失基因-1RHOA蛋白CYCLINP21基因
5-Aza-CdR对HT29细胞DLC-1基因表达及生物学行为的影响被引量：2
2009年
目的研究去甲基化药物5-氮杂胞苷(5-Aza-CdR)对人结肠癌HT29细胞株生物学行为及肝癌缺失基因1(DLC-1)表达的影响。方法5-Aza-CdR处理HT29细胞72 h;RT-PCR检测DLC-1 mRNA的表达;MTT、平板克隆实验、Transwell小室实验分别检测药物处理前后的HT29细胞增殖、侵袭、迁移能力的变化。结果经5-Aza-CdR作用后,HT29细胞DLC-1恢复表达,细胞增殖活性降低,侵袭能力与迁移能力下降。结论5-Aza-CdR可抑制HT29细胞增殖、侵袭、迁移,可能与DLC-1基因恢复表达有关。
吴平平金月玲商延芳金治吴鹏黄培林
关键词：5-氮杂胞苷
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